黃瓜綠斑駁花葉病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）是葫蘆科作物上的重要病毒之一,給葫蘆科作物的生產(chǎn)造成了嚴(yán)重的威脅。近十年來,CGMMV在世界范圍內(nèi)的蔓延范圍仍在不斷擴大。本文以CGMMV不同突變體為研究對象,對其突變體致病性進行分析,發(fā)現(xiàn)決定致病性的關(guān)鍵位點,進一步了解該病毒致病的分子機理。病毒外殼蛋白不僅是病毒正常組裝所必須的,還參與了病毒的長距離運輸過程。通過農(nóng)桿菌浸潤接種的方法,對CGMMV CP丙氨酸掃描文庫各個突變體在本生煙和西瓜上的致病性進行了初步篩選,并通過DAS-ELISA和一步RT-PCR對病毒進行檢測。在接種本生煙后,所有的134個突變體中,有23個丙氨酸突變體在接種本生煙后癥狀發(fā)生改變,且突變前大部分為非極性氨基酸。還有49個突變體在接種后未顯癥,且病毒檢測為陰性。另外,癥狀改變的突變體在CP蛋白亞基上的定位有一定可循規(guī)律,23個突變位點全部定位于四個α螺旋內(nèi)側(cè)的中空結(jié)構(gòu)區(qū)域內(nèi),且在三級結(jié)構(gòu)上位于病毒外殼蛋白亞基外表面區(qū)域。黃瓜綠斑駁花葉病毒的病毒起始裝配位點是位于病毒基因組RNA上,當(dāng)外殼蛋白聚合體與病毒基因... 

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 黃瓜綠斑駁花葉病毒概況
        1.1.1 黃瓜綠斑駁花葉病毒的起源
        1.1.2 生物學(xué)特性
        1.1.3 分子生物學(xué)特性
    1.2 病毒檢測方法
        1.2.1 生物學(xué)鑒定
        1.2.2 血清學(xué)檢測
        1.2.3 電鏡觀察
        1.2.4 分子生物學(xué)檢測
    1.3 植物病毒侵染性克隆技術(shù)
    1.4 CGMMV突變體致病性研究的分子生物學(xué)基礎(chǔ)
    1.5 CGMMV弱毒株研究進展
    1.6 本研究的目的與意義
第二章 CP突變體致病性分析
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 菌株與植物材料
        2.1.2 試驗中所用酶與其它試劑
        2.1.3 儀器與設(shè)備
        2.1.4 溶液的配置方法
    2.2 實驗方法
        2.2.1 突變體的構(gòu)建
        2.2.2 接種和樣品的采集
        2.2.3 突變體侵染性的檢測
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 黃瓜綠斑駁花葉病毒CP突變體庫在本生煙上的癥狀分析
        2.3.2 突變體侵染性檢測及其在CP外殼蛋白上的分布情況
        2.3.3 黃瓜綠斑駁花葉病毒突變體在本生煙和西瓜上致病性比較
        2.3.4 病毒起始裝配位點突變體補償性癥狀的發(fā)生
        2.3.5 CP蛋白第96位氨基酸能夠影響病毒致病性
        2.3.6 E96K相關(guān)突變體病毒RNA積累量與致病性關(guān)系分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 復(fù)制相關(guān)蛋白突變體致病性分析
    3.1 材料和試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 突變位點的選擇
        3.2.2 突變體的構(gòu)建
        3.2.3 侵染性檢測
    3.3 結(jié)果與分析
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 全文結(jié)論
    4.1 主要結(jié)論
    4.2 創(chuàng)新點
    4.3 下一步工作展望
參考文獻
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]黃瓜綠斑駁花葉病毒核酸試紙條檢測技術(shù)的建立[J]. 霍亞云,張永江,李為民,朱羅羅,胡林,尤其敏.  北方園藝. 2017(10)
[2]黃瓜綠斑駁花葉病毒病防治研究進展[J]. 劉華威,羅來鑫,朱春雨,梁超瓊,劉鵬飛,李健強.  植物保護. 2016(06)
[3]黃瓜綠斑駁花葉病毒磁免疫層析試紙條的研制[J]. 魏梅生,李桂芬,馬潔,朱水芳,王軍平,文朝慧.  植物保護. 2014(03)
[4]西瓜感染黃瓜綠斑駁花葉病毒后糖的變化與倒瓤關(guān)系的研究[J]. 李立梅,吳元華,趙秀香,王文航,王林,蔡明.  植物病理學(xué)報. 2011(03)
[5]葫蘆種子傳黃瓜綠斑駁花葉病毒的檢測[J]. 秦碧霞,蔡健和,陸秀紅,林林,廖富榮,劉志明.  植物保護. 2011(03)
[6]黃瓜綠斑駁花葉病毒西瓜、甜瓜種子的帶毒率和傳毒率[J]. 吳會杰,秦碧霞,陳紅運,彭斌,蔡建和,古勤生.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(07)
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[10]南瓜種子中黃瓜綠斑駁花葉病毒IC-RT-PCR檢測方法的建立[J]. 黃靜,廖富榮,林石明,陳青.  漳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報. 2009(01)

碩士論文
[1]黃瓜綠斑駁花葉病毒的RT-LAMP檢測和番茄斑萎病毒的膠體金免疫層析試紙條檢測[D]. 李晉玉.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號：3665154