三角帆蚌（Hyriopsis cumingii）是我國重要的淡水養(yǎng)殖貝類之一,TGF-β介導(dǎo)的信號通路在胚胎發(fā)育、組織和器官的形成、創(chuàng)傷修復(fù)及免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮重要的作用。本研究克隆了三角帆蚌的TGF-β及其I型受體（TGF-βRI）基因的cDNA全長序列。結(jié)果表明:三角帆蚌TGF-β基因cDNA序列全長2850bp,其中5’非編碼區(qū)（UTR）長度為211bp;3’UTR為1457bp;開放閱讀框（ORF）為1182bp,編碼393個氨基酸。預(yù)測的TGF-β蛋白包含1個25aa的信號肽,1個TGF-β結(jié)構(gòu)域（294-393）。TGF-βRI基因的cDNA全長序列為2017bp,其中5’UTR為80bp;3’UTR為383bp;ORF長度為1554bp,編碼517個氨基酸。預(yù)測的TGF-βRI蛋白包含信號肽（1-22aa）,膜外區(qū)（23-127aa）、跨膜區(qū)（128-150aa）以及胞內(nèi)區(qū)（151-517）。胞內(nèi)區(qū)含有TGF-β受體特征序列GS結(jié)構(gòu)域和絲氨酸/蘇氨酸激酶催化結(jié)構(gòu)域。序列比對分析顯示:三角帆蚌TGF-β與哺乳動物TGF-β1同源性為25%。預(yù)測的TGF-β成熟蛋白由18... 

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語表
第1章 引言
    1.1 TGF-β信號通路
        1.1.1 TGF-β亞家族
        1.1.2 TGF-β受體
        1.1.3 TGF-β信號的功能
        1.1.4 TGF-β信號的調(diào)節(jié)
        1.1.5 TGF-β信號在免疫中的作用
        1.1.6 TGF-β信號在組織損傷修復(fù)中的作用
    1.2 本研究的目的和意義
第2章 三角帆蚌TGF-β及其I型受體基因克隆、原核表達(dá)及在創(chuàng)傷修復(fù)中的作用
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 菌種和ccc DNA
        2.2.3 實驗儀器
        2.2.4 實驗試劑
        2.2.5 引物表
        2.2.6 微生物刺激及創(chuàng)傷修復(fù)試驗和抑制阻斷實驗
        2.2.7 總RNA的提取
        2.2.8 SMART c DNA的合成
        2.2.9 Hc TGF-β和TGF-βRI基因的克隆
        2.2.10 TGF-β基因和TGF-βRI基因的生物學(xué)分析
        2.2.11 TGF-β和TGF-βRI基因的原核表達(dá)
        2.2.12 TGF-βRI基因胞內(nèi)段的原核表達(dá)
        2.2.13 TGF-β及TGF-βRI的多克隆抗體制備
        2.2.14 TGF-β及TGF-βRI多克隆抗體效價的ELISA檢測
        2.2.15 TGF-β及TGF-βRI Western blotting檢測
        2.2.16 重組蛋白TGF-β活性測定
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 三角帆蚌的總RNA
        2.3.2 Hc TGF-β基因的RACE實驗和Hc TGF-βRI基因片段克隆
        2.3.3 Hc TGF-β和Hc TGF-βRI基因c DNA全長序列及推導(dǎo)的氨基酸序列
        2.3.4 預(yù)測的Hc TGF-β和Hc TGF-βRI蛋白序列的生物信息學(xué)分析
        2.3.5 推導(dǎo)Hc TGF-β和Hc TGF-βRI氨基酸序列比對
        2.3.6 TGF-β和TGF-βRI基因的系統(tǒng)進(jìn)化樹
        2.3.7 Hc TGF-βRI基因的組織表達(dá)
        2.3.8 嗜水氣單胞菌和肽聚糖刺激后Hc TGF-βRI基因在肝胰臟、血細(xì)胞組織中的表達(dá)
        2.3.9 創(chuàng)面組織TGF-βRI基因的表達(dá)變化
        2.3.10 SB431542 處理三角帆蚌后TGF-β/Smads信號通路下游基因表達(dá)變化
        2.3.11 TGF-β基因在大腸桿菌中的表達(dá)及純化
        2.3.12 TGF-βRI基因在大腸桿菌中的表達(dá)及純化
        2.3.13 多克隆抗體的制備及ELISA檢測
        2.3.14 Western blotting檢測
        2.3.15 重組蛋白TGF-β活性測定
    2.4 討論
第3章 結(jié)論與展望
    3.1 結(jié)論
    3.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同溫度脅迫方式對中華絨螯蟹免疫化學(xué)指標(biāo)的影響[J]. 洪美玲,陳立僑,顧順樟,劉超,張璐,李二超.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報. 2007(06)
[2]Construction of prokaryotic expression system of TGF-β1 epitope gene and identification of recombinant fusion protein immunity[J]. Yong-Hong Guo, Jin-Yan Luo, Jun-Hong Wang, The Second Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an710004, Shannxi Province, China Zhi-Ming Hao, The Post Doctor Xijing Hospital of Fourth Military Medical University, Xi’an 710004, Shannxi Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(40)



本文編號：3659873