山核桃（Carya cathayensis）是浙江和安徽省等地特色干果,具有很高的經(jīng)濟價值,長期以來由于過度集約經(jīng)營導(dǎo)致土壤酸化、養(yǎng)分失衡、病原菌爆發(fā)等一系列問題,尤其是干腐病病害較為嚴重。本研究團隊前期篩選分離到一株對山核桃病原菌（Botryosphaeria dothidea）具有很好抑制效果且廣譜性抗病原菌的解淀粉芽孢桿菌Bacillus anyloliquefaciens WK1（菌種保藏號:CGMCC 11640）,但在實際生產(chǎn)應(yīng)用過程中遇到困難,手工涂抹樹桿工作量太大。如能定殖于植物體內(nèi),則相當于植物體獲得自身免疫能力。本研究通過測序手段獲得WK1全基因組信息,解析其抗生素合成、細菌定殖相關(guān)基因簇;利用綠色熒光蛋白標記（green fluorescent protein,GFP）技術(shù)對WK1進行熒光標記,追蹤WK1在土壤和植物體內(nèi)的軌跡和動態(tài)。通過不同土壤pH的小苗盆栽試驗揭示適宜WK1的土壤酸堿條件,通過林地灌根、掛液、噴葉等三種接種方式探究最佳的菌液施用方法。主要研究結(jié)果如下:1.全基因組信息分析表明,WK1具有合成脂肽類和聚酮類抗生素的基因簇,以及與定殖相關(guān)的系列基因... 

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 文獻綜述
    1.1 引言
    1.2 山核桃干腐病的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 山核桃干腐病癥狀
        1.2.2 病因及其機制
        1.2.3 山核桃干腐病的防治
    1.3 生防菌
        1.3.1 生防菌的研究進展
        1.3.2 生防菌、病原菌和植物的聯(lián)系
    1.4 芽孢桿菌研究進展
        1.4.1 芽孢桿菌的研究進展
    1.5 全基因組測序
    1.6 綠色熒光蛋白在微生物定殖方面的應(yīng)用
        1.6.1 綠色熒光蛋白的發(fā)展及其性質(zhì)
    1.7 立題依據(jù)和研究內(nèi)容
        1.7.1 立題依據(jù)
        1.7.2 研究內(nèi)容
        1.7.3 技術(shù)路線
2 解淀粉芽孢桿菌WK1的抗菌基因和定植基因分析
    2.1 試驗材料
        2.1.1 菌株
    2.2 試驗方法
        2.2.1 基因組測序和組裝
        2.2.2 基因組注釋和比較分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 解淀粉芽孢桿菌WK1的基因組結(jié)構(gòu)和特征
        2.3.2 碳水化合物活性酶(CAZy)結(jié)果
        2.3.3 次級抑菌代謝產(chǎn)物簇結(jié)果
        2.3.4 芽孢桿菌WK1的定植基因分析結(jié)果
    2.4 小結(jié)
3 解淀粉芽孢桿菌WK1的GFP標記及穩(wěn)定性檢測
    3.1 試驗材料與方法
        3.1.1 材料
    3.2 方法
        3.2.1 芽孢桿菌WK1的GFP標記方法
        3.2.2 標記菌的分子生物學、熒光及質(zhì)粒穩(wěn)定性檢驗
        3.2.3 標記菌株和原始菌株的抑菌能力測定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 標記菌株GFP-WK1的構(gòu)建及PCR檢測結(jié)果
        3.3.2 標記菌的分子生物學、熒光及質(zhì)粒穩(wěn)定性結(jié)果
        3.3.3 GFP-WK1菌株的生長曲線
        3.3.4 標記菌株和原始菌株對葡萄座腔菌抑制效果對比
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 土壤pH影響GFP-WK1在土壤和山核桃幼苗定殖效果研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 盆栽試驗材料
        4.1.2 試驗設(shè)計與實施
        4.1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 GFP-WK1在不同pH處理土壤中定殖效果
        4.2.2 標記菌GFP-WK1在山核桃不同器官的定殖比較
        4.2.3 不同pH對GFP-WK1在山核桃樹幼苗不同部位的定殖結(jié)果
    4.3 討論
    4.4 結(jié)論
5 解淀粉芽孢桿菌GFP-WK1在山核桃林地的定殖規(guī)律
    5.1 材料與方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 接種標記菌分布規(guī)律
        5.2.2 不同接種方法標記菌在不同部位定殖比較分析
    5.3 討論
    5.4 結(jié)論
6 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新點
    6.3 展望
參考文獻
個人簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3652911