目的:使用特異性siRNA靶向干擾黑素瘤A375細胞中hTERT基因的表達后,觀察對黑素瘤細胞遷移和侵襲能力的影響,從而探索hTERT基因在黑素瘤發(fā)病過程中的作用。方法:培養(yǎng)黑素瘤A375細胞,分別設置空白對照組、陰性對照組和干擾組。干擾組的黑素瘤A375細胞轉染課題組前期篩選出的特異性hTERT siRNA,陰性對照組則使用陰性對照siRNA對細胞進行轉染,空白對照組細胞不做處理。Real-Time PCR和Western-blot實驗分別檢測各組細胞中hTERT m RNA和蛋白的表達水平,之后使用細胞劃痕實驗和Transwell侵襲實驗檢測各組細胞的遷移和侵襲能力。結果:干擾組中使用特異性hTERT siRNA靶向干擾hTERT基因可明顯下調hTERT基因m RNA和蛋白的表達,與陰性對照組和空白對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。細胞劃痕實驗和Transwell侵襲實驗結果顯示,當黑素瘤A375細胞中hTERT基因表達沉默后,細胞的遷移和侵襲能力也出現(xiàn)明顯下降（P<0.05）。結論:特異性hTERT siRNA可以有效沉默黑素瘤A375細胞中hTERT基因... 

【文章來源】：石河子大學新疆維吾爾自治區(qū)211工程院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞對照表
前言
實驗內容與方法
    1 材料和試劑
        1.1 實驗細胞
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 實驗常用試劑及其配置
        1.5 引物合成
        1.6 siRNA的選擇及合成
    2.實驗方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2 細胞轉染
        2.3 提取細胞總RNA
        2.4 瓊脂糖凝膠電泳測定
        2.5 反轉錄合成c DNA
        2.6 Real-time PCR
        2.7 細胞總蛋白提取
        2.8 細胞蛋白濃度測定
        2.9 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
        2.10 轉膜
        2.11 封閉與抗體孵育
        2.12 化學發(fā)光、顯影與定影
        2.13 凝膠圖像分析
        2.14 細胞劃痕實驗
        2.15 Transwell侵襲實驗
    3 統(tǒng)計方法
結果
    1 各組細胞中h TERT基因的表達情況
        1.1 RNA樣本質檢結果
        1.2 PCR擴增曲線及溶解曲線
        1.3 Real-Time PCR檢測h TERTmRNA的表達水平
        1.4 Western-blot檢測h TERT蛋白的表達水平
    2 靶向干擾hTERT基因對黑素瘤A375 細胞遷移能力的影響
    3 靶向干擾hTERT基因對黑素瘤A375 細胞侵襲能力的影響
討論
結論
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
致謝
作者簡介
導師評閱表


【參考文獻】：
期刊論文
[1]人端粒酶反轉錄酶mRNA在不同類型黑素瘤中的表達及其意義[J]. 曾明鳳,康曉靜,曾穎,柴莉,吳秀娟,趙娟,孫振柱,王瑩,王唯嘉.  腫瘤研究與臨床. 2016 (07)



本文編號：3638083