RNA干擾hTERT基因對人惡性黑素瘤A375細胞遷移和侵襲的影響
發(fā)布時間:2022-02-21 21:37
目的:使用特異性siRNA靶向干擾黑素瘤A375細胞中hTERT基因的表達后,觀察對黑素瘤細胞遷移和侵襲能力的影響,從而探索hTERT基因在黑素瘤發(fā)病過程中的作用。方法:培養(yǎng)黑素瘤A375細胞,分別設置空白對照組、陰性對照組和干擾組。干擾組的黑素瘤A375細胞轉染課題組前期篩選出的特異性hTERT siRNA,陰性對照組則使用陰性對照siRNA對細胞進行轉染,空白對照組細胞不做處理。Real-Time PCR和Western-blot實驗分別檢測各組細胞中hTERT m RNA和蛋白的表達水平,之后使用細胞劃痕實驗和Transwell侵襲實驗檢測各組細胞的遷移和侵襲能力。結果:干擾組中使用特異性hTERT siRNA靶向干擾hTERT基因可明顯下調hTERT基因m RNA和蛋白的表達,與陰性對照組和空白對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。細胞劃痕實驗和Transwell侵襲實驗結果顯示,當黑素瘤A375細胞中hTERT基因表達沉默后,細胞的遷移和侵襲能力也出現(xiàn)明顯下降(P<0.05)。結論:特異性hTERT siRNA可以有效沉默黑素瘤A375細胞中hTERT基因...
【文章來源】:石河子大學新疆維吾爾自治區(qū)211工程院校
【文章頁數(shù)】:48 頁
【學位級別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
中英文縮略詞對照表
前言
實驗內容與方法
1 材料和試劑
1.1 實驗細胞
1.2 主要試劑
1.3 主要儀器
1.4 實驗常用試劑及其配置
1.5 引物合成
1.6 siRNA的選擇及合成
2.實驗方法
2.1 細胞培養(yǎng)
2.2 細胞轉染
2.3 提取細胞總RNA
2.4 瓊脂糖凝膠電泳測定
2.5 反轉錄合成c DNA
2.6 Real-time PCR
2.7 細胞總蛋白提取
2.8 細胞蛋白濃度測定
2.9 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
2.10 轉膜
2.11 封閉與抗體孵育
2.12 化學發(fā)光、顯影與定影
2.13 凝膠圖像分析
2.14 細胞劃痕實驗
2.15 Transwell侵襲實驗
3 統(tǒng)計方法
結果
1 各組細胞中h TERT基因的表達情況
1.1 RNA樣本質檢結果
1.2 PCR擴增曲線及溶解曲線
1.3 Real-Time PCR檢測h TERTmRNA的表達水平
1.4 Western-blot檢測h TERT蛋白的表達水平
2 靶向干擾hTERT基因對黑素瘤A375 細胞遷移能力的影響
3 靶向干擾hTERT基因對黑素瘤A375 細胞侵襲能力的影響
討論
結論
參考文獻
文獻綜述
參考文獻
致謝
作者簡介
導師評閱表
【參考文獻】:
期刊論文
[1]人端粒酶反轉錄酶mRNA在不同類型黑素瘤中的表達及其意義[J]. 曾明鳳,康曉靜,曾穎,柴莉,吳秀娟,趙娟,孫振柱,王瑩,王唯嘉. 腫瘤研究與臨床. 2016 (07)
本文編號:3638083
【文章來源】:石河子大學新疆維吾爾自治區(qū)211工程院校
【文章頁數(shù)】:48 頁
【學位級別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
中英文縮略詞對照表
前言
實驗內容與方法
1 材料和試劑
1.1 實驗細胞
1.2 主要試劑
1.3 主要儀器
1.4 實驗常用試劑及其配置
1.5 引物合成
1.6 siRNA的選擇及合成
2.實驗方法
2.1 細胞培養(yǎng)
2.2 細胞轉染
2.3 提取細胞總RNA
2.4 瓊脂糖凝膠電泳測定
2.5 反轉錄合成c DNA
2.6 Real-time PCR
2.7 細胞總蛋白提取
2.8 細胞蛋白濃度測定
2.9 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
2.10 轉膜
2.11 封閉與抗體孵育
2.12 化學發(fā)光、顯影與定影
2.13 凝膠圖像分析
2.14 細胞劃痕實驗
2.15 Transwell侵襲實驗
3 統(tǒng)計方法
結果
1 各組細胞中h TERT基因的表達情況
1.1 RNA樣本質檢結果
1.2 PCR擴增曲線及溶解曲線
1.3 Real-Time PCR檢測h TERTmRNA的表達水平
1.4 Western-blot檢測h TERT蛋白的表達水平
2 靶向干擾hTERT基因對黑素瘤A375 細胞遷移能力的影響
3 靶向干擾hTERT基因對黑素瘤A375 細胞侵襲能力的影響
討論
結論
參考文獻
文獻綜述
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致謝
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【參考文獻】:
期刊論文
[1]人端粒酶反轉錄酶mRNA在不同類型黑素瘤中的表達及其意義[J]. 曾明鳳,康曉靜,曾穎,柴莉,吳秀娟,趙娟,孫振柱,王瑩,王唯嘉. 腫瘤研究與臨床. 2016 (07)
本文編號:3638083
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