1917年,德國(guó)醫(yī)生Alfred Nissle從志賀菌感染疫區(qū)一名未患腸炎士兵糞便中分離得到一株無(wú)致病性的大腸桿菌,故將其命名為Nissle 1917（EcN）。EcN能很好地在腸道生存和定植,且不帶有主要的毒力因子,具有明顯的益生特性,因此其成為除了一些乳酸桿菌外,人類研究最多的益生菌之一。研究表明Nissle 1917其對(duì)人類腸道疾病有一定的療效,以其為主要成分的商品化藥物Mutaflor在歐美多個(gè)國(guó)家被用于炎癥性腸�。↖BD）的治療。近年來(lái),Nissle 1917作為靶向呈遞外源蛋白的載體,在治療人類腸道疾病的過(guò)程中扮演了越來(lái)越重要的角色。在EcN的基因組上,我們比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)了一種編碼腸桿菌科絲氨酸蛋白酶（SPATE）的pic基因,基于NCBI上大腸桿菌EcN基因組上注釋的pic基因序列,設(shè)計(jì)一對(duì)用于λ-Red同源重組系統(tǒng)試驗(yàn)的pic基因缺失長(zhǎng)引物,其5’端與pi基因缺失部分兩側(cè)的基因同源,3’端與pKD3質(zhì)粒上的氯霉素抗性基因cat同源,通過(guò)λ-Red同源重組的方式和程序完成pi基因的缺失。首先以pKD3質(zhì)粒DNA作模板,利用上述缺失引物PCR擴(kuò)增出兩端與pi基因上下游同源,中... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１融合ｃｗ基因的ＰＣＲ產(chǎn)物鑒定??－

將野生型ＥｃＮ與一次重組菌ＥｃＮＡｐ／ｃ：?：ｃａ／分別利用煮沸法制備模板，利用鑒定引物??Ｐ３、Ｐ４進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增鑒定，野生型ＥｃＮ擴(kuò)增片段大小應(yīng)為４００８ｂｐ，ＥｃＮＡｐｆｃ：：ｃ加大小??應(yīng)為１１７３ｂｐ，與瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果吻合，電泳結(jié)果如下圖２－２所示。??Ｍ?１?２??＿：｜蘑＿：：＿??５〇〇〇ｂｐ—??３０００ｂｐ一??２０００ｂｐ一??２０００ｂｐ—??：丨??圖２－２?—次重組菌ＥｃＮＡ＃ｃ：：?Ｗ的ＰＣＲ鑒定??Ｆｉｇｕｒｅ２－２?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＥｃＮＡ／）／ｃ！?Ｉ?ｃａ／ｍｕｔａｎｔｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：Ｔｒａｎｓ２ｋＰｌｕｓ?ＩＩ?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１．野生型?ＥｃＮ；?２．—次重組菌?ＥｃＮＡｐ／ｃ：?：ｃａｒ??３．３二次重組菌ＥｃＮＡｐｆｃ的鑒定??將野生型ＥｃＮ與二次重組菌ＥｃＮＡｐｆｃ分別利用煮沸法制備模板，利用鑒定引物Ｐ３、??Ｐ４進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增鑒定，野生型ＥｃＮ擴(kuò)增片段大小應(yīng)為４００８ｂｐ，二次重組菌ＥｃＮＡ＾ｃ擴(kuò)增??片段大小應(yīng)為２６２ｂｐ，與瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果吻合。結(jié)果如下圖２－３所示。??

將野生型ＥｃＮ與一次重組菌ＥｃＮＡｐ／ｃ：?：ｃａ／分別利用煮沸法制備模板，利用鑒定引物??Ｐ３、Ｐ４進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增鑒定，野生型ＥｃＮ擴(kuò)增片段大小應(yīng)為４００８ｂｐ，ＥｃＮＡｐｆｃ：：ｃ加大小??應(yīng)為１１７３ｂｐ，與瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果吻合，電泳結(jié)果如下圖２－２所示。??Ｍ?１?２??＿：｜蘑＿：：＿??５〇〇〇ｂｐ—??３０００ｂｐ一??２０００ｂｐ一??２０００ｂｐ—??：丨??圖２－２?—次重組菌ＥｃＮＡ＃ｃ：：?Ｗ的ＰＣＲ鑒定??Ｆｉｇｕｒｅ２－２?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＥｃＮＡ／）／ｃ！?Ｉ?ｃａ／ｍｕｔａｎｔｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：Ｔｒａｎｓ２ｋＰｌｕｓ?ＩＩ?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１．野生型?ＥｃＮ；?２．—次重組菌?ＥｃＮＡｐ／ｃ：?：ｃａｒ??３．３二次重組菌ＥｃＮＡｐｆｃ的鑒定??將野生型ＥｃＮ與二次重組菌ＥｃＮＡｐｆｃ分別利用煮沸法制備模板，利用鑒定引物Ｐ３、??Ｐ４進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增鑒定，野生型ＥｃＮ擴(kuò)增片段大小應(yīng)為４００８ｂｐ，二次重組菌ＥｃＮＡ＾ｃ擴(kuò)增??片段大小應(yīng)為２６２ｂｐ，與瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果吻合。結(jié)果如下圖２－３所示。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CD14參與固有免疫應(yīng)答抵御感染的研究進(jìn)展[J]. 陳志霞,梅舒雅,邵珍珍,李泉.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2016(04)
[2]口服益生菌Escherichia coli Nissle 1917調(diào)控?cái)嗄套胸i空腸黏膜屏障功能的機(jī)理研究[J]. 唐志如,鄧歡,孫衛(wèi)忠,張小龍,張翥.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(01)
[3]腸道免疫的安全靶向載體:大腸桿菌Nissle1917[J]. 夏芃芃,朱軍,朱國(guó)強(qiáng).  微生物學(xué)報(bào). 2013(06)
[4]腸桿菌科絲氨酸蛋白酶自動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)家族研究進(jìn)展[J]. 張俊琪,瞿滌.  微生物與感染. 2010(02)
[5]LPS所介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究進(jìn)展[J]. 楊一新,李桂源.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2006(01)



本文編號(hào)：3625166