1917年,德國醫(yī)生Alfred Nissle從志賀菌感染疫區(qū)一名未患腸炎士兵糞便中分離得到一株無致病性的大腸桿菌,故將其命名為Nissle 1917（EcN）。EcN能很好地在腸道生存和定植,且不帶有主要的毒力因子,具有明顯的益生特性,因此其成為除了一些乳酸桿菌外,人類研究最多的益生菌之一。研究表明Nissle 1917其對人類腸道疾病有一定的療效,以其為主要成分的商品化藥物Mutaflor在歐美多個國家被用于炎癥性腸�。↖BD）的治療。近年來,Nissle 1917作為靶向呈遞外源蛋白的載體,在治療人類腸道疾病的過程中扮演了越來越重要的角色。在EcN的基因組上,我們比對分析發(fā)現了一種編碼腸桿菌科絲氨酸蛋白酶（SPATE）的pic基因,基于NCBI上大腸桿菌EcN基因組上注釋的pic基因序列,設計一對用于λ-Red同源重組系統試驗的pic基因缺失長引物,其5’端與pi基因缺失部分兩側的基因同源,3’端與pKD3質粒上的氯霉素抗性基因cat同源,通過λ-Red同源重組的方式和程序完成pi基因的缺失。首先以pKD3質粒DNA作模板,利用上述缺失引物PCR擴增出兩端與pi基因上下游同源,中... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１融合ｃｗ基因的ＰＣＲ產物鑒定??－

將野生型ＥｃＮ與一次重組菌ＥｃＮＡｐ／ｃ：?：ｃａ／分別利用煮沸法制備模板，利用鑒定引物??Ｐ３、Ｐ４進行ＰＣＲ擴增鑒定，野生型ＥｃＮ擴增片段大小應為４００８ｂｐ，ＥｃＮＡｐｆｃ：：ｃ加大小??應為１１７３ｂｐ，與瓊脂糖凝膠電泳結果吻合，電泳結果如下圖２－２所示。??Ｍ?１?２??＿：｜蘑＿：：＿??５〇〇〇ｂｐ—??３０００ｂｐ一??２０００ｂｐ一??２０００ｂｐ—??：丨??圖２－２?—次重組菌ＥｃＮＡ＃ｃ：：?Ｗ的ＰＣＲ鑒定??Ｆｉｇｕｒｅ２－２?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＥｃＮＡ／）／ｃ！?Ｉ?ｃａ／ｍｕｔａｎｔｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：Ｔｒａｎｓ２ｋＰｌｕｓ?ＩＩ?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１．野生型?ＥｃＮ；?２．—次重組菌?ＥｃＮＡｐ／ｃ：?：ｃａｒ??３．３二次重組菌ＥｃＮＡｐｆｃ的鑒定??將野生型ＥｃＮ與二次重組菌ＥｃＮＡｐｆｃ分別利用煮沸法制備模板，利用鑒定引物Ｐ３、??Ｐ４進行ＰＣＲ擴增鑒定，野生型ＥｃＮ擴增片段大小應為４００８ｂｐ，二次重組菌ＥｃＮＡ＾ｃ擴增??片段大小應為２６２ｂｐ，與瓊脂糖凝膠電泳結果吻合。結果如下圖２－３所示。??

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【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3625166