本文關(guān)鍵詞：抗草甘膦基因aroAM12及抗蟲(chóng)基因Bts1m的轉(zhuǎn)基因棉株，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘭州大學(xué)》 2009年

抗草甘膦aroAM1基因轉(zhuǎn)化煙草的研究

閆廣為  

【摘要】： 草甘膦是70年代開(kāi)發(fā)的世界上最為成功的一種除草劑。由于具有廣譜性,對(duì)環(huán)境無(wú)污染,對(duì)人和動(dòng)物的健康幾乎不影響,能除掉其他除草劑難以鏟除的多種多年生植物等優(yōu)點(diǎn),這種除草劑被廣泛使用。 近年來(lái),抗草甘膦轉(zhuǎn)基因作物的研究進(jìn)展迅速。從1996年美國(guó)種植抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆開(kāi)始,全球轉(zhuǎn)基因作物的數(shù)量在逐年增加,然而這些品種幾乎都是孟山都公司的專利,因此開(kāi)發(fā)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的、商業(yè)化的抗草甘膦作物,成為當(dāng)前國(guó)內(nèi)研究的重點(diǎn)。 5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸莽草酸合成酶(EPSPS)是草甘膦作用機(jī)理中的關(guān)鍵酶之一,它由aroA基因所編碼。本實(shí)驗(yàn)所用基因?yàn)樯抽T氏菌(Salmonella typhimurium)和大腸桿菌(Escherichia coli)中aroA基因的重組基因aroAM1。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,用農(nóng)桿菌感染受傷的煙草葉片細(xì)胞,使外源基因aroAM1轉(zhuǎn)化到煙草基因組中。最后,利用組織培養(yǎng)技術(shù),再生出轉(zhuǎn)基因煙草植株。 獲得轉(zhuǎn)aroAM1基因的農(nóng)桿菌后,在優(yōu)化的含有0.1μg/ml IAA,2μg/ml 6-BA,500μg/ml CB,24μmol/L草甘膦的培養(yǎng)基上培養(yǎng)煙草葉片,獲得再生煙草植株。然后在三個(gè)不同水平上對(duì)再生煙草植株進(jìn)行檢測(cè):在分子水平上,PCR檢測(cè)陽(yáng)性率為100%;在器官水平上,轉(zhuǎn)基因的離體煙草葉片對(duì)草甘膦的抗性增加了12倍;在植株水平上,用5mmol/L草甘膦涂抹非轉(zhuǎn)基因煙草和轉(zhuǎn)基因煙草葉片,前者葉片枯黃,而后者變化不明顯。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在優(yōu)化的草甘膦抗性培養(yǎng)基上篩選煙草,可獲得有明顯抗性效果的轉(zhuǎn)基因煙草植株。由于草甘膦的安全無(wú)污染等特點(diǎn),以及本實(shí)驗(yàn)對(duì)aroAM1基因轉(zhuǎn)入模式植物煙草中功能的驗(yàn)證,今后可深入的研究此基因在轉(zhuǎn)基因植物的定位、目的蛋白EPSPS的表達(dá)以及草甘膦耐受機(jī)制等方面奠定基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：S572
【目錄】：

摘要6-7

Abstract7-8

常用縮寫詞8-9

第一章 前言9-20

1.1 草甘膦簡(jiǎn)介9-11

1.1.1 草甘膦的理化性質(zhì)9

1.1.2 草甘膦的作用特點(diǎn)9-10

1.1.3 草甘膦的作用機(jī)理10-11

1.2 獲得抗草甘膦植物的方法11-12

1.2.1 促使EPSPS過(guò)量表達(dá)11

1.2.2 導(dǎo)入非敏感型的EPSPS11-12

1.2.3 轉(zhuǎn)入降解草甘膦的基因12

1.3 EPSPS及其編碼基因aroA的研究進(jìn)展12-16

1.3.1 EPSPS的定位13

1.3.2 EPSPS的結(jié)構(gòu)13-15

1.3.3 運(yùn)用基因改造獲得有抗性的EPSPS15-16

1.4 轉(zhuǎn)抗草甘膦基因的主要方法和原理16-17

1.4.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法16-17

1.4.2 花粉管介導(dǎo)法17

1.4.3 基因槍轉(zhuǎn)化法17

1.4.4 其它轉(zhuǎn)化方法17

1.5 抗草甘膦轉(zhuǎn)基因作物研究進(jìn)展17-18

1.5.1 世界上抗草甘膦轉(zhuǎn)基因作物的研究進(jìn)展17-18

1.5.2 我國(guó)抗草甘膦轉(zhuǎn)基因植物的研究進(jìn)展18

1.6 本研究的目的意義18-20

第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法20-26

2.1 實(shí)驗(yàn)材料20-21

2.1.1 供試材料20

2.1.2 工具酶及其它試劑20-21

2.2 實(shí)驗(yàn)方法21-26

2.2.1 制備含有目的基因的農(nóng)桿菌21-22

2.2.2 獲得轉(zhuǎn)化的煙草22-23

2.2.3 轉(zhuǎn)基因煙草的鑒定23-24

2.2.4 EPSPS抗體的制備24-26

第三章 實(shí)驗(yàn)過(guò)程及結(jié)果26-38

3.1 獲得含有aroAM1目的基因的農(nóng)桿菌26-27

3.1.1 擴(kuò)增質(zhì)粒pAM1Bt的酶切鑒定26

3.1.2 菌落PCR的鑒定農(nóng)桿菌LBA4404的轉(zhuǎn)化26-27

3.2 獲得轉(zhuǎn)基因的煙草27-32

3.2.1 實(shí)驗(yàn)植物材料的獲得27

3.2.2 草甘膦篩選濃度的確定27-30

3.2.3 侵染葉片再生的煙草植株30-31

3.2.4 獲得煙草植株的PCR檢測(cè)31-32

3.3 轉(zhuǎn)基因煙草的檢測(cè)32-36

3.3.1 轉(zhuǎn)基因煙草植株離體葉片的抗性檢測(cè)32-35

3.3.2 轉(zhuǎn)基因煙草植株涂抹草甘膦的檢測(cè)35-36

3.4 轉(zhuǎn)基因煙草EPSPS抗體的制備36-38

第四章 實(shí)驗(yàn)討論與結(jié)論38-40

4.1 討論38

4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)論38-40

附表1 基本培養(yǎng)基40-42

參考文獻(xiàn)42-46

致謝46

下載全文 更多同類文獻(xiàn)

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購(gòu)買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 謝龍旭,徐培林,聶燕芳,田穎川;抗草甘膦抗蟲(chóng)植物表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)基因煙草的分析[J];生物工程學(xué)報(bào);2003年05期

2 劉小林;轉(zhuǎn)基因技術(shù)及其應(yīng)用[J];陜西農(nóng)業(yè)科學(xué);2005年03期

3 趙福永,謝龍旭,田穎川,徐培林;抗草甘膦基因aroAM12及抗蟲(chóng)基因Bts1m的轉(zhuǎn)基因棉株[J];作物學(xué)報(bào);2005年01期

4 陳梁鴻,王新望,張文俊,張曉東,胡道芬,劉廣田;抗除草劑草甘膦EPSPs基因在小麥中的轉(zhuǎn)化[J];遺傳學(xué)報(bào);1999年03期

5 王景雪;趙福永;徐培林;田穎川;;油菜轉(zhuǎn)抗草甘膦、抗蟲(chóng)基因獲得雙抗植株[J];遺傳學(xué)報(bào);2005年12期

6 何鳴,曾海燕,徐培林,葉長(zhǎng)明;aroA基因的克隆和優(yōu)化[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2002年02期

7 王宏偉;梁業(yè)紅;史振聲;張世煌;;作物抗草甘膦轉(zhuǎn)基因研究概況[J];作物雜志;2007年04期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 武麗敏,鄭有良,魏育明,吳衛(wèi),顏澤洪,張志清;小麥轉(zhuǎn)基因研究進(jìn)展[J];四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年02期

2 胡景煥;李福祥;;草甘膦生產(chǎn)的技術(shù)進(jìn)展[J];山西化工;2010年01期

3 周永國(guó);尹中明;沈忠偉;李建粵;;秈稻9311成熟胚再生體系[J];上海師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年04期

4 石少華;周永國(guó);胥劍雄;褚玉甲;李建粵;;不同溫度培養(yǎng)對(duì)根癌農(nóng)桿菌生長(zhǎng)及水稻幼胚再生的影響[J];上海師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年02期

5 林鴻生,華志華,盧德趙,高振宇,顏美仙,錢前,黃大年;水稻基因槍轉(zhuǎn)化過(guò)程中選擇標(biāo)記基因的研究[J];上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2001年03期

6 石少華;周永國(guó);潘忠浩;李建粵;;粳稻品系“超2-10”幼胚在不同溫度下的誘導(dǎo)和再生研究[J];上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2009年01期

7 葉水烽;李天菲;劉國(guó)蘭;羅利軍;;轉(zhuǎn)cry1C~*秈型抗蟲(chóng)節(jié)水抗旱稻的獲得及鑒定[J];上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2012年02期

8 周壯志,周永剛,何朝族,莽克強(qiáng),田穎川;cry3A和vhb基因在轉(zhuǎn)基因馬鈴薯中的表達(dá)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2004年08期

9 謝龍旭,徐培林,聶燕芳,田穎川;抗草甘膦抗蟲(chóng)植物表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)基因煙草的分析[J];生物工程學(xué)報(bào);2003年05期

10 沈晶晶;李永豐;黃星;俞欣妍;何健;李順鵬;;乙酰羥酸合成酶同工酶基因ilvBN、ilvGM和ilvIH的表達(dá)及對(duì)除草劑抗性的比較[J];生物工程學(xué)報(bào);2009年07期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 鄭助實(shí);陳連國(guó);張偉;;除草劑草甘膦合成新技術(shù)[J];上海化工;1989年05期

2 趙存友,袁正強(qiáng),秦紅敏,田穎川;轉(zhuǎn)雙抗蟲(chóng)基因煙草的研究[J];生物工程學(xué)報(bào);2001年03期

3 謝龍旭,徐培林,聶燕芳,田穎川;抗草甘膦抗蟲(chóng)植物表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)基因煙草的分析[J];生物工程學(xué)報(bào);2003年05期

4 黃艷娥,闞保東;轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的生產(chǎn)與安全管理[J];世界農(nóng)業(yè);2001年03期

5 孫凡,馮沈萍;轉(zhuǎn)基因技術(shù)在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用[J];世界農(nóng)業(yè);2002年08期

6 趙錦,劉孟軍,蔣洪恩;轉(zhuǎn)基因技術(shù)及其在植物育種中的應(yīng)用[J];生物技術(shù);2002年06期

7 李軼女,胡英考,沈桂芳;轉(zhuǎn)基因植物基因工程疫苗[J];生物技術(shù)通報(bào);2002年02期

8 藍(lán)海燕,陳正華;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的蕓薹屬植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);1999年03期

9 鄭騰,陸承平;轉(zhuǎn)基因技術(shù)對(duì)糧食生產(chǎn)的影響[J];生物學(xué)通報(bào);2004年01期

10 趙福永,謝龍旭,田穎川,徐培林;抗草甘膦基因aroAM12及抗蟲(chóng)基因Bts1m的轉(zhuǎn)基因棉株[J];作物學(xué)報(bào);2005年01期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蘇少泉;抗草甘膦作物的創(chuàng)制與發(fā)展[J];世界農(nóng)業(yè);2004年03期

2 王宏偉;梁業(yè)紅;史振聲;張世煌;;作物抗草甘膦轉(zhuǎn)基因研究概況[J];作物雜志;2007年04期

3 卜貴軍;劉洪梅;李英;崔琳;王學(xué)東;;草甘膦對(duì)大豆超微結(jié)構(gòu)及光合指標(biāo)影響的研究[J];電子顯微學(xué)報(bào);2008年04期

4 蘇少泉;;轉(zhuǎn)基因抗草甘膦作物的新進(jìn)展[J];現(xiàn)代農(nóng)藥;2009年06期

5 朱元招;王鳳來(lái);尹靖東;;抗草甘膦大豆及豆粕營(yíng)養(yǎng)成分和抗?fàn)I養(yǎng)因子研究[J];營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2010年02期

6 葉勝海;趙寧春;金慶生;張小明;;水稻品種對(duì)草甘膦抗性的研究進(jìn)展[J];種子;2010年06期

7 原向陽(yáng);郭平毅;張麗光;王鑫;呂苗苗;張紅剛;宋喜娥;;草甘膦對(duì)抗草甘膦大豆光合特性日變化的影響[J];大豆科學(xué);2011年03期

8 原向陽(yáng);郭平毅;張麗光;王鑫;祁祥;邵冬紅;;干旱及復(fù)水條件下草甘膦對(duì)抗草甘膦大豆幼苗滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)和莽草酸含量的影響[J];核農(nóng)學(xué)報(bào);2012年07期

9 韓思寧;金龍國(guó);蔣凌雪;陶波;邱麗娟;;抗草甘膦真菌的分離鑒定及其功能基因表達(dá)[J];作物雜志;2012年06期

10 原向陽(yáng);張麗光;郭平毅;王鑫;姚滿生;王宏富;;第二復(fù)葉期噴施草甘膦對(duì)抗草甘膦大豆生理指標(biāo)及產(chǎn)量構(gòu)成的影響[J];核農(nóng)學(xué)報(bào);2008年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 韓思寧;金龍國(guó);陶波;邱麗娟;;抗草甘膦真菌的分離及其抗性基因的表達(dá)[A];第23屆全國(guó)大豆科研生產(chǎn)研討會(huì)論文摘要集[C];2012年

2 劉東軍;張銳;孟志剛;郭紅媛;程海剛;王成社;郭三堆;;抗草甘膦基因突變體的克隆及表達(dá)[A];全國(guó)作物生物技術(shù)與誘變技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

3 劉東軍;張銳;孫國(guó)清;閆喜中;胡建斌;王成社;郭三堆;;抗草甘膦基因的克隆及其在在棉花中的表達(dá)[A];全國(guó)作物生物技術(shù)與誘變技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

4 魏守輝;李香菊;張朝賢;黃紅娟;崔海蘭;;抗草甘膦雜草發(fā)生現(xiàn)狀及轉(zhuǎn)基因大豆田草害治理策略[A];糧食安全與植�？萍紕�(chuàng)新[C];2009年

5 劉琦;李希臣;劉昭軍;雷勃鈞;;抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆基因漂移的研究[A];第五次全國(guó)植物分子育種代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2008年

6 楊兆光;劉亞平;肖遠(yuǎn)龍;;抗草甘膦棉花的雜種優(yōu)勢(shì)研究[A];中國(guó)棉花學(xué)會(huì)2013年年會(huì)論文集[C];2013年

7 頓保慶;金丹;梁愛(ài)敏;陸偉;林敏;;新型高抗草甘膦EPSP合酶基因的拆分和重建[A];2005熱帶亞熱帶微生物資源的遺傳多樣性與基因發(fā)掘利用研討會(huì)論文集[C];2005年

8 郝獻(xiàn)領(lǐng);李志強(qiáng);張敏;陳洪濤;張延忠;李澤田;;室內(nèi)對(duì)轉(zhuǎn)基因抗草甘膦棉花品系鑒定方法[A];中國(guó)棉花學(xué)會(huì)2013年年會(huì)論文集[C];2013年

9 潘愛(ài)虎;張大兵;潘良文;陳家華;袁政;梁婉琪;;轉(zhuǎn)基因抗草甘膦油菜的實(shí)用PCR檢測(cè)方法[A];全國(guó)作物細(xì)胞工程與分子技術(shù)育種學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2003年

10 朱元招;李德發(fā);尹靖東;王鳳來(lái);;抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆PCR定量檢測(cè)研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2004學(xué)術(shù)年會(huì)暨第五屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 方舟子;[N];新華每日電訊;2013年

2 本報(bào)記者 馬愛(ài)平;[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

3 實(shí)習(xí)記者 江華;[N];農(nóng)資導(dǎo)報(bào);2012年

4 張?zhí)锟?[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2013年

《中國(guó)學(xué)術(shù)期刊（光盤版）》電子雜志社有限公司
同方知網(wǎng)數(shù)字出版技術(shù)股份有限公司
地址：北京清華大學(xué) 84-48信箱 大眾知識(shí)服務(wù)
京ICP證040441號(hào)
互聯(lián)網(wǎng)出版許可證 新出網(wǎng)證（京）字008號(hào)
出版物經(jīng)營(yíng)許可證 新出發(fā)京批字第直0595號(hào)

訂購(gòu)熱線：400-819-9993 010-62982499
服務(wù)熱線：010-62985026 010-62791813
在線咨詢：
傳真：010-62780361
京公網(wǎng)安備11010802020475號(hào)

  本文關(guān)鍵詞：抗草甘膦基因aroAM12及抗蟲(chóng)基因Bts1m的轉(zhuǎn)基因棉株，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：219247