本文關(guān)鍵詞：大豆脂肪氧化酶基因RNAi表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)調(diào)控的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文 大豆臘肪氧化酶基因RNAi表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)調(diào)控的研究 摘要 本項(xiàng)研究應(yīng)用基因工程手段，克隆大豆脂肪氧化酶基因核心保守序列，構(gòu)建高效的具 其導(dǎo)入大豆，抑制大豆脂肪氧化酶基因的表達(dá)，調(diào)控脂肪氧化酶的生物合成過(guò)程。以期通 過(guò)基因工程手段，改變大豆脂肪氧化酶合成途徑，降低大豆脂肪氧化酶含量，提高大豆油 份含量，培育具有優(yōu)良品質(zhì)的大豆品種。取得如下結(jié)果： 添加一個(gè)從質(zhì)粒pBll21上酶切下來(lái)的35S啟動(dòng)子。 2．以大豆品種“吉農(nóng)18號(hào)"的基因組DNA為模板，選取大豆三種脂肪氧化酶同功酶基 因同源性最高部分，通過(guò)PCR擴(kuò)增得到大豆脂肪氧化酶基因片段，將其克隆到 與已發(fā)表的基因一致。將大豆脂肪氧化酶基因片段按正向+反向的順序插入到 pCAMBIAl301 基因的整合情況，從PCR陽(yáng)性植株中隨機(jī)抽取2株進(jìn)行Southernblot分析。結(jié)果表明， 轉(zhuǎn)化株均有雜交帶出現(xiàn)，外源基因以單拷貝和雙拷貝的形式插入，而未經(jīng)轉(zhuǎn)化的植株沒(méi)有 雜交信號(hào)出現(xiàn)，證明外源基因已整合到大豆基因組中。以轉(zhuǎn)基因大豆籽粒的總RNA反轉(zhuǎn)錄 標(biāo)18S對(duì)蛆含量相同，而內(nèi)源脂肪氧化酶mRNA的含量明顯降低。 3．克隆了大豆“吉農(nóng)18號(hào)一自身的一段內(nèi)含子，片段長(zhǎng)度230bp，將其插入到表達(dá)載 blot 為進(jìn)～步確定外源基因的整合情況，從PCR陽(yáng)性植株中隨機(jī)抽取3株進(jìn)行Southern 分析。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)化株均有雜交帶出現(xiàn)，外源基因以單拷貝和雙拷貝的形式插入，，而未 經(jīng)轉(zhuǎn)化的植株沒(méi)有雜交信號(hào)出現(xiàn)，證明外源基因已整合到大豆基因組中。以轉(zhuǎn)基因大豆籽 IV 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文 大豆脂肪氧化酶基因RNAi表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)調(diào)控的研究 和非轉(zhuǎn)基因植株的內(nèi)標(biāo)18SRNA含量相同，而內(nèi)源脂肪氧化酶mRNA的

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