多抗PVY, TMV 和CMV 轉(zhuǎn)基因煙草的培育.pdf
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中國農(nóng)業(yè)科學 2008,41 4 :1040-1047
Scientia Agricultura Sinica
多抗PVY、TMV和CMV轉(zhuǎn)基因煙草的培育
1,2
1,2
2
朱常香
,宋云枝
,,溫孚江
1
2
(山東農(nóng)業(yè)大學生命科學學院,山東泰安 271018 ; 作物生物學國家重點實驗室,山東泰安 271018 )
摘要:【目的】利用RNA介導抗性培育抗多種植物病毒的轉(zhuǎn)基因煙草!痉椒ā糠謩e以馬鈴薯Y病毒(PVY)、
煙草花葉病毒(TMV)和黃瓜花葉病毒(CMV)全長衣殼蛋白(CP)基因為模板,通過設(shè)計 PCR 引物和亞克隆獲得
PVY CP 3′端長度 100 bp、TMV CP 3′端長度 100 bp 和 CMV CP 3′端長度 200 bp 的 cDNA 片段并拼接成嵌合基
因,并以此為模板構(gòu)建反向重復結(jié)構(gòu)嵌合基因的植物表達載體pRHPTC。將pRHPTC通過凍融法導入農(nóng)桿菌LBA4404,
采用葉盤法轉(zhuǎn)化煙草 NC89,然后測定轉(zhuǎn)基因煙草對 3 種病毒的抗性。【結(jié)果】經(jīng)卡那霉素篩選和 PCR 檢測,共獲
得276株轉(zhuǎn)基因煙草。Southern和Northern blot分析表明,外源基因以不同拷貝數(shù)整合于煙草基因組中;不同
轉(zhuǎn)基因植株中病毒RNA的積累量存在顯著差異?共⌒詸z測顯示:23%左右的轉(zhuǎn)基因植株表現(xiàn)出對3 種病毒侵染的
抗性。對轉(zhuǎn)基因植株擴繁后代和T1 代的抗性分析表明:多病毒抗性表現(xiàn)穩(wěn)定。【結(jié)論】利用RNA介導的抗病毒基因
工程可獲得同時抗多種病毒的轉(zhuǎn)基因煙草,其抗病性在T 代擴繁植株和T 代植株中得到穩(wěn)定遺傳。
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