本文關(guān)鍵詞：龍眼抗腫瘤化學(xué)成分及其初步藥理作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第四軍醫(yī)大學(xué)》 2013年

龍眼抗腫瘤化學(xué)成分及其初步藥理作用研究

張曉衛(wèi)  

【摘要】：龍眼是無患子科龍眼屬植物龍眼DimocarpusLonganLour.的果實，又名桂圓、益智。原產(chǎn)于東南亞的亞熱帶區(qū)域，我國福建、廣東、廣西等地有大量栽培。龍眼果實由龍眼果皮、龍眼假種皮和龍眼種子組成。龍眼富含多種人體所需的營養(yǎng)成分，如碳水化合物、蛋白質(zhì)、纖維素、脂肪、氨基酸、維生素C、多種微量元素等。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為龍眼肉（假種皮）具有補益心脾、健腦益智、消腫止痛之功；近年來研究發(fā)現(xiàn)其還具有抗腫瘤、抗氧化、延緩衰老和增強免疫力的作用，但具體活性成分不明。鑒于此，本研究旨在探討龍眼的化學(xué)成分及其藥理活性，為初步闡明龍眼化學(xué)成分與功效間的關(guān)系，龍眼有效成分的發(fā)掘和新藥的研究開發(fā)奠定基礎(chǔ)。 1研究目的 本研究對龍眼化學(xué)成分進行提取、初步分離后，對其粗分物進行活性篩選，然后對活性部位進行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，明確其主要活性部位的物質(zhì)類型及結(jié)構(gòu)，并對主要活性成分進行抗腫瘤活性和一般藥理學(xué)研究，為其進一步開發(fā)利用提供實驗數(shù)據(jù)。 2研究方法 2.1龍眼不同部分化學(xué)成分的提取分離與鑒定 以95%的乙醇作為提取溶劑，采用冷凝回流提取法提取龍眼假種皮、龍眼果皮和龍眼種子中的主要化學(xué)成分，用各種化學(xué)試劑對其進行初步的理化鑒別，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別對龍眼三個部分95%乙醇提取物進行萃取，得到龍眼三個部分不同極性的萃取物，稱重計算產(chǎn)率。 2.2龍眼假種皮各部分初步的抗腫瘤活性篩選 采用同種移植性小鼠肉瘤S180動物模型，對龍眼假種皮各部分體內(nèi)抗腫瘤活性進行篩選。 2.3龍眼活性部位的化學(xué)成分研究 結(jié)合龍眼假種皮抗腫瘤活性篩選結(jié)果，首先對龍眼假種皮黃棕色結(jié)晶狀物質(zhì)進行酸堿性測定、理化性質(zhì)鑒別、紫外掃描測定以及高效液相色譜檢測，明確其化合物類型和分離目標(biāo)。進一步對龍眼黃酮苷活性部位（龍眼假種皮黃棕色結(jié)晶狀物質(zhì)）的主要化學(xué)成分進行系統(tǒng)研究，分別采用硅膠薄層色譜法、硅膠柱色譜法、聚酰胺柱色譜法、葡聚糖凝膠色譜法、大孔吸附樹脂色譜法、制備高效液相色譜法等分離、純化龍眼假種皮中的黃酮苷活性部位，采用熔點測定以及HPLC、UV、NMR等色譜和波譜方法對分離純化得到的化合物進行初步的純度和結(jié)構(gòu)鑒定。同時，采用GC-MS法對龍眼果實三個部分的有一定活性的石油醚萃取物進行分離分析。 2.4龍眼黃酮苷活性部位初步藥理作用研究 2.2.1體外抗腫瘤活性研究：采用MTT方法，測定龍眼黃酮苷活性部位對體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞HepG2、人宮頸癌細(xì)胞HeLa、人肺癌細(xì)胞A549和人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖的影響。 2.2.2體內(nèi)抗腫瘤活性研究：采用小鼠肉瘤S180移植模型，觀察測定龍眼黃酮苷活性部位灌胃給藥對小鼠體內(nèi)腫瘤抑制的影響。 2.2.3一般藥理學(xué)研究：采用曠野法實驗、睡眠實驗和尾懸吊實驗觀察龍眼黃酮苷活性部位對小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的影響，用RM-6280生理記錄及分析生理系統(tǒng)觀察龍眼黃酮苷活性部位對麻醉小鼠呼吸頻率、對麻醉大鼠心率血壓的影響，從而分析其對呼吸系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)的影響。 3研究結(jié)果 3.1龍眼果實不同部位化學(xué)成分的提取分離與鑒定 3.1.1龍眼果實不同部位化學(xué)成分的提取分離：龍眼假種皮，果皮，種子的95%乙醇提取物分別用正丁醇、乙酸乙酯、石油醚三種不同極性的溶劑進行萃取，結(jié)果龍眼假種皮5kg得石油醚萃取物14.5g，產(chǎn)率為0.3%，乙酸乙酯萃取物36.3g，產(chǎn)率為0.7%，正丁醇萃取物118.0g，產(chǎn)率為2.4%；龍眼果皮3kg得石油醚萃取物31.1g，產(chǎn)率為1.0%，乙酸乙酯萃取物47.5g，產(chǎn)率為1.6%，正丁醇萃取物74.2g，產(chǎn)率為2.5%；龍眼種子5kg得石油醚萃取物114.8g，產(chǎn)率為2.3%，乙酸乙酯萃取物78.1g，產(chǎn)率為1.6%，正丁醇萃取物89.8g，產(chǎn)率為1.8%。龍眼假種皮黃棕色結(jié)晶狀物質(zhì)的產(chǎn)量70.1g，產(chǎn)率為1.4%。 3.1.2龍眼果實不同部分化學(xué)成分的理化性質(zhì)鑒別：龍眼假種皮、果皮、種子的95%乙醇提取物理化鑒別實驗結(jié)果顯示，2%三氯化鋁反應(yīng)、異羥肟酸鐵反應(yīng)、菲林試劑反應(yīng)、醋酐-濃硫酸反應(yīng)三個部位的醇提物均為陽性結(jié)果，10%的氫氧化鉀-水反應(yīng)、碘化鉍鉀試劑反應(yīng)三個部位的醇提物均為陰性結(jié)果，1%三氯化鐵反應(yīng)和茚三酮反應(yīng)龍眼果皮和龍眼種子為陽性結(jié)果而龍眼假種皮為陰性結(jié)果，溴酚藍(lán)試劑反應(yīng)龍眼假種皮和龍眼果皮為陽性結(jié)果而龍眼種子為陰性結(jié)果。 3.2龍眼假種皮各部分抗腫瘤活性篩選 體內(nèi)抗腫瘤活性篩選結(jié)果顯示，龍眼假種皮95%醇提物、結(jié)晶物、石油醚部位、乙酸乙脂部位、正丁醇部位的腫瘤抑制率分別為26.2%、41.3%、28.9%、14.3%、34.3%。 3.3龍眼活性部位的化學(xué)成分研究 3.3.1龍眼黃酮苷活性部位化學(xué)成分的分離和結(jié)構(gòu)的初步研究：龍眼黃棕色結(jié)晶狀物質(zhì)的酸堿性測試結(jié)果顯示其pH≈3，理化性質(zhì)鑒別結(jié)果顯示，ɑ-萘酚濃硫酸反應(yīng)、鹽酸-鎂粉反應(yīng)、磷鉬酸試劑反應(yīng)、鋁鹽和鎂鹽的絡(luò)合反應(yīng)、氨熏實驗均呈陽性，在紫外燈下檢視有黃綠色熒光，紫外掃描顯示在295nm波長下有最大吸收。從龍眼黃酮苷活性部位中分離得到的組分A和B經(jīng)HPLC純度鑒定分別為90.0%和92.0%，熔點測定A的熔程為132℃～135℃，B為161℃～163℃，其熔距均大于1℃。紫外掃描顯示，最大吸收波長分別為297.8nm和284.7nm。組分A的NMR圖譜顯示其有部分黃酮苷類化合物的13C和1H的信號峰。 3.3.2龍眼果實不同部分石油醚萃取物的GC-MS分析：通過GC-MS聯(lián)用技術(shù)對龍眼假種皮、龍眼果皮、龍眼種子石油醚萃取物的成分進行分析，從龍眼假種皮中共分離出25個成分，鑒定出15個成分，檢出率為60.0%，檢出物含量占總石油醚部位的76.7%，其中含量較高的成分為角鯊烯、棕櫚酸、鄰苯二甲酸二異丁酯、棕櫚酸乙酯、油酸、油酸乙酯等；從龍眼果皮中共分離出45個成分，鑒定出28個成分，檢出率為62.2%，檢出物含量占總石油醚部位的83.2%，其中含量較高的成分為棕櫚酸、油酸、反油酸、角鯊烯、豆甾醇、γ-谷甾醇等；從龍眼種子中共分離出43個成分，鑒定出30個成分，檢出率為69.8%，檢出物含量占總石油醚部位的87.1%，其中含量較高的成分為棕櫚酸、油酸、油酸乙酯等。 3.4龍眼黃酮苷活性部位初步藥理作用研究 3.4.1體外抗腫瘤活性研究：龍眼黃酮苷活性部位對人肝癌細(xì)胞HepG2、人宮頸癌細(xì)胞HeLa、人肺癌細(xì)胞A549和人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U2514種腫瘤細(xì)胞生長均有不同程度的抑制作用，在藥物濃度為1000mg/L時，龍眼黃酮苷活性部位對腫瘤細(xì)胞的抑制率分別為：HepG2：53.2%，HeLa：48.7%，A549：79.5%，U251：41.6%。其中對HepG2、HeLa和U251的抑制呈明顯的濃度依賴關(guān)系，藥物濃度從10mg/L到1000mg/L，腫瘤細(xì)胞HepG2的存活率從98.2%降低至53.2%，HeLa從96.2%降低至48.7%，U251從87.9%降低至41.6%。 3.4.2體內(nèi)抗腫瘤活性研究：三個劑量的龍眼黃酮苷活性部位均能抑制腫瘤在小鼠體內(nèi)的生長，且呈劑量依賴關(guān)系。藥物濃度從60mg/kg增加至240mg/kg，腫瘤的抑制率從13.0%增加至52.5%。5-FU組的胸腺指數(shù)（0.68mg/g）和脾臟指數(shù)(3.72mg/g)與對照組(2.18mg/g，7.18mg/g)比較均明顯下降（P＜0.05），三個劑量的龍眼黃酮苷活性部位治療組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均明顯高于5-FU組，但隨著劑量的增加，胸腺指數(shù)有逐步降低的趨勢（從2.06mg/g降至1.63mg/g），脾臟指數(shù)有增加的趨勢（從8.85mg/g增加至11.94mg/g）。 3.4.3一般藥理學(xué)研究：龍眼黃酮苷活性部位中劑量（120mg/kg）和高劑量（240mg/kg）對小鼠自主活動有一定的抑制作用（P＜0.05）；三個劑量組對小鼠呼吸頻率均無顯著影響（P0.05）；對麻醉大鼠的血壓也均無顯著影響（P0.05）。 4研究結(jié)論 4.1龍眼不同部位化學(xué)成分的提取分離與鑒定 用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取龍眼假種皮、龍眼果皮和龍眼種子三個部分的95%乙醇提取物，結(jié)果表明龍眼果皮和龍眼假種皮中富含極性較大的化合物，而龍眼種子中富含極性小的油脂類化合物。各部分的理化性質(zhì)鑒定結(jié)果表明龍眼假種皮、龍眼果皮和龍眼種子中均含有黃酮類、有機酸類、內(nèi)酯或香豆素類、還原糖或多糖或苷類、皂苷類化合物，龍眼果皮和種子還含有鞣質(zhì)類、蛋白質(zhì)或多肽或氨基酸類化合物。 4.2龍眼假種皮各部分物質(zhì)抗腫瘤活性篩選 龍眼假種皮各部分物質(zhì)的體內(nèi)抗腫瘤活性篩選結(jié)果顯示龍眼假種皮各部分均有一定的抗腫瘤活性，其中黃棕色結(jié)晶狀物質(zhì)的抗腫瘤活性最強，其石油醚部分和正丁醇部分也具有相對較好的抗腫瘤活性。 4.3龍眼活性部位的化學(xué)成分研究 龍眼假種皮黃棕色結(jié)晶狀物質(zhì)的酸堿性測試、理化性質(zhì)鑒定、紫外掃描結(jié)果均顯示其為黃酮苷類物質(zhì)，加之其抗腫瘤活性篩選結(jié)果顯示其具有較好的活性，故稱之為龍眼黃酮苷活性部位。從龍眼黃酮苷活性部位中分離得到了組分A和B，，但目前組分A和B質(zhì)量較少、純度較低，其結(jié)構(gòu)有待進一步解析。龍眼各部分的GC-MS分析明確了其石油醚部位的化學(xué)成分，假種皮中鑒定出15個成分，主要為角鯊烯、棕櫚酸等。 4.4龍眼黃酮苷活性部位初步藥理作用研究 龍眼黃酮苷活性部位的體內(nèi)、體外抗腫瘤活性研究結(jié)果表明，龍眼黃酮苷活性部位具有抗腫瘤作用和一定的免疫調(diào)節(jié)作用。一般藥理學(xué)研究表明，試驗劑量（120mg/kg、240mg/kg）的龍眼黃酮苷活性部位對小鼠神經(jīng)系統(tǒng)有一定抑制作用；對小鼠的呼吸頻率雖然沒明顯的影響，但中劑量組（120mg/kg）具有使小鼠呼吸頻率減慢的趨勢；對大鼠血壓無顯著影響。 根據(jù)以上分析表明：龍眼黃酮苷可能是龍眼抗腫瘤、增強免疫力、鎮(zhèn)靜安神的主要活性成分。目前我們已經(jīng)初步建立了從龍眼假種皮中提取分離純化龍眼黃酮苷類物質(zhì)的工藝，為龍眼化學(xué)成分的進一步研究和新藥研發(fā)提供了參考。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R284.1;R285
【目錄】：

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2 李雪華;吳妮妮;李福森;黃燕軍;龍盛京;;龍眼核醋酸乙酯部位的抗氧化活性研究[J];時珍國醫(yī)國藥;2008年08期

3 左映平;梁志;;龍眼核的研究現(xiàn)狀[J];廣西輕工業(yè);2010年05期

4 梁志;左映平;;龍眼核中總黃酮含量測定及其抗氧化性研究[J];云南化工;2010年05期

5 劉干中;周金黃;;黨參化學(xué)成分及藥理作用研究進展[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;1983年02期

6 張國華;張如松;;蘿藦科植物的藥理作用研究[J];浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2009年03期

7 陳靜;袁明勇;鄭玲利;吳娟;;黃芪的化學(xué)成分和藥理作用研究[J];臨床醫(yī)藥實踐;2009年32期

8 楊犇;陶靚;李沖;;醉魚草屬植物化學(xué)成分及藥理作用研究新進展[J];中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育;2009年10期

9 張慧清;馮鋒;謝寧;鞠建明;;落花生化學(xué)成分及藥理作用研究[J];中南藥學(xué);2010年01期

10 趙晶,賀江萍;槲寄生的化學(xué)成分及藥理作用研究[J];天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2005年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李建光;潘學(xué)文;韓冬梅;李榮;;廣東龍眼種質(zhì)資源研究[A];海峽兩岸荔枝龍眼產(chǎn)業(yè)發(fā)展研討會論文集[C];2009年

2 賈曉光;熊元君;波拉提·馬卡比力;;駱駝刺化學(xué)成分及藥理作用研究[A];全國第9屆天然藥物資源學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

3 席旭東;尹紅芳;晉小軍;何尤;;施肥對寬葉羌活化學(xué)成分的影響[A];中藥藥效提高與中藥飲片質(zhì)量控制交流研討會論文集[C];2009年

4 張曉玲;戴靈超;;鴨跖草化學(xué)成分及藥理作用研究概況[A];藥用植物化學(xué)與中藥資源可持續(xù)發(fā)展學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2009年

5 楊光忠;胡昀;陳玉;;竹葉椒木脂素成分的研究[A];藥用植物化學(xué)與中藥資源可持續(xù)發(fā)展學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2009年

6 黃敏聰;;金銀花的質(zhì)量管理和應(yīng)用[A];2009浙江省中藥學(xué)術(shù)年會論文集[C];2009年

7 楊可立;羅瑞芝;郭治昕;;夏枯草化學(xué)成分及藥理作用研究進展[A];2010年中國藥學(xué)大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

8 艾國;化薇;黃正明;;黃蜀葵花化學(xué)成分及藥理活性的研究進展[A];中國成人醫(yī)藥教育論壇[2010（3）][C];2010年

9 楊念云;段金廒;李萍;錢士輝;張健;;連錢草黃酮類化學(xué)成分的研究[A];全國第六屆天然藥物資源學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

10 張衛(wèi)東;HA.Thi Bang Tam;陳萬生;孔德云;李惠庭;;中藥燈盞細(xì)辛中酚酸類化合物的結(jié)構(gòu)與活性研究[A];中國中醫(yī)藥信息研究會第二屆理事大會暨學(xué)術(shù)交流會議論文匯編[C];2003年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡立山;[N];上海中醫(yī)藥報;2004年

2 汪志錚;[N];福建科技報;2006年

3 蒲軍;[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

4 劉光泉;[N];民族醫(yī)藥報;2008年

5 梅全喜 徐景遠(yuǎn);[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

6 本報記者 李衛(wèi)芹;[N];中國消費者報;2008年

7 西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院 胡新中 徐瑩;[N];中國食品質(zhì)量報;2010年

8 記者 高原;[N];新華每日電訊;2009年

9 姚耀;[N];中國化工報;2006年

10 ;[N];上海中醫(yī)藥報;2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何春年;芍藥屬藥用植物親緣學(xué)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

2 彭燕;海燕和中華疣海星的化學(xué)成分及其生物活性研究[D];華南理工大學(xué);2010年

3 王延年;沙漠嘎種子化學(xué)成分及質(zhì)量研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2004年

4 馬挺軍;土貝母化學(xué)成分及抗腫瘤活性研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

5 劉軍民;沉香（白木香）藥材規(guī)范化種植（GAP）研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2005年

6 劉利;桑葉次生代謝產(chǎn)物研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2005年

7 楊炳友;洋金花治療銀屑病有效部位的化學(xué)成分和藥理作用研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2005年

8 劉高峰;北洋金花的非生物堿化學(xué)成分及指紋圖譜研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2005年

9 盧汝梅;匙羹藤莖化學(xué)成分和降血糖作用的研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2005年

10 郭巧生;半夏遺傳多樣性的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);1998年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張曉衛(wèi);龍眼抗腫瘤化學(xué)成分及其初步藥理作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 王淑霞;龍眼核中多酚類抗氧化活性物質(zhì)的提取優(yōu)化與液質(zhì)聯(lián)用分析[D];暨南大學(xué);2011年

3 吳蘭蘭;龍眼核多酚的分離純化及其結(jié)構(gòu)和抗氧化活性研究[D];集美大學(xué);2010年

4 劉釋文;龍眼核綜合利用的基礎(chǔ)研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2008年

5 吳妮妮;龍眼核的化學(xué)成分分析及龍眼核和龍眼殼的抗氧化活性測定[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年

6 何運燕;龍眼核酚類物質(zhì)的提取分離及其抗氧化活性研究[D];暨南大學(xué);2008年

7 劉穎;蒺藜果實的化學(xué)成分和其藥理作用研究[D];北京化工大學(xué);2010年

8 王志遠(yuǎn);龍眼殼與龍眼核多酚的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及抗氧化活性[D];廈門大學(xué);2008年

9 尹鍵;煙草及制品化學(xué)成分系統(tǒng)鑒別分析方法研究[D];湖南大學(xué);2001年

10 于曉敏;蓬子菜有效成分的化學(xué)研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2004年

  本文關(guān)鍵詞：龍眼抗腫瘤化學(xué)成分及其初步藥理作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：63935