本文關鍵詞：氡致小鼠肺組織損傷及p53基因表達的改變

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【摘要】：目的:建立染氡小鼠模型,觀察氡暴露對小鼠肺組織和線粒體的損傷,p53及其靶基因的表達改變,為闡明氡及其子體的損傷機制提供基礎資料。方法:(1)染氡小鼠模型的建立:32只BALB/c小鼠隨機分為4組,每組8只,分別為對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組。p53基因敲除的C57BL/6小鼠16只,雌雄各半,隨機分為對照組和中劑量組,每組8只。染氡組小鼠置于多功能生態(tài)染氡室,染氡濃度為100000Bq/m3,低、中、高劑量組的累積照射劑量分別為30、60、120工作水平月。(2)小鼠肺組織病理損傷:小鼠達到暴露劑量后,處死取適量肺組織,4%多聚甲醛溶液固定,病理學常規(guī)制作HE染色切片,TUNEL法檢測細胞凋亡。(3)采用WST-8法檢測肺組織、外周血和線粒體中SOD活性,硫代巴比妥酸法(TBA)檢測MDA含量。熒光定量PCR檢測線粒體DNA拷貝數(shù)、p53及其靶基因PUMA的表達。Western blot檢測p53及PUMA蛋白的表達。(4)采用spss21.0進行統(tǒng)計分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示,p0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結果:(1)小鼠肺組織病理學觀察發(fā)現(xiàn):氡染毒后的小鼠肺組織出現(xiàn)肺泡壁變薄、斷裂、數(shù)個肺泡融合成大肺泡,高劑量組還出現(xiàn)了肺泡塌陷、出血等病理改變。小鼠肺組織細胞凋亡指數(shù)升高,線粒體DNA拷貝數(shù)增加。(2)染氡后小鼠肺組織、外周血和線粒體SOD活力下降,MDA含量升高。小鼠肺組織細胞中p53及其靶基因PUMA的基因表達和蛋白表達均上調。結論:1、氡致小鼠的肺損傷效應包括病理改變、氧化損傷、凋亡指數(shù)上升和線粒體DNA拷貝數(shù)增加。2、氡染毒后小鼠肺組織細胞中p53及其靶基因PUMA的表達升高,提示p53-PUMA通路參與了氡致肺損傷的效應。
【關鍵詞】：氡 小鼠 肺損傷 p53 線粒體
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R14
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 第一部分 氡吸入致小鼠肺組織的損傷11-22
• 1.材料與方法11-16
• 1.1 試劑和儀器11-12
• 1.1.1 主要試劑11
• 1.1.2 主要儀器11
• 1.1.3 實驗動物11-12
• 1.2 方法12-16
• 1.2.1 主要試劑配制12
• 1.2.2 氡及其子體吸入染毒動物模型的建立12
• 1.2.3 外周血的采集（摘除眼球取血）12
• 1.2.4 肺組織樣品的制備12-13
• 1.2.5 HE染色13
• 1.2.6 小鼠肺組織SOD活性、MDA含量的測定13-16
• 1.2.7 小鼠外周血SOD活性、MDA含量的測定16
• 1.2.8 統(tǒng)計分析16
• 2 結果16-20
• 2.1 染氡小鼠肺組織病理改變16-17
• 2.2 氡染毒致BALB/c小鼠肺組織SOD活性和MDA含量的改變17-18
• 2.3 氡染毒致C57BL/6 小鼠外周血SOD活性和MDA含量的改變18-20
• 3 討論20-22
• 第二部分 氡吸入致肺組織線粒體改變22-30
• 1 材料與方法22-25
• 1.1 材料22-23
• 1.1.1 主要試劑22
• 1.1.2 主要儀器22-23
• 1.2 實驗方法23-25
• 1.2.1 小鼠肺組織線粒體的提取23
• 1.2.2 小鼠肺組織DNA的提取23-24
• 1.2.3 線粒體DNA拷貝數(shù)檢測24-25
• 1.2.4 凋亡切片的制作25
• 1.2.5 統(tǒng)計分析25
• 2 結果25-28
• 2.1 肺組織細胞凋亡25-27
• 2.2 線粒體SOD活力、MDA含量變化27-28
• 2.3 線粒體DNA拷貝數(shù)變化28
• 3 討論28-30
• 第三部分 氡吸入致小鼠p53基因及其 靶基因表達的改變30-40
• 1 材料與方法30-35
• 1.1 材料30-31
• 1.1.1 主要試劑30-31
• 1.1.2 主要儀器31
• 1.2 實驗方法31-35
• 1.2.1 肺組織RNA的提取31-32
• 1.2.2 cDNA的制備32
• 1.2.3 熒光實時定量PCR檢測目的基因的表達32-33
• 1.2.4western blot檢測蛋白表達33-35
• 1.2.5 統(tǒng)計分析35
• 2.結果35-39
• 2.1 氡染毒小鼠p53和PUMA基因表達改變35-37
• 2.2 氡染毒小鼠p53和PUMA蛋白表達改變37-39
• 3.討論39-40
• 結論40-41
• 參考文獻41-46
• 綜述46-52
• 參考文獻49-52
• 研究生期間科研經(jīng)歷及發(fā)表的文章52-53
• 中英文縮略語對照表53-54
• 致謝54-55

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本文編號：788761