尼古丁是一種吡啶類生物堿，能夠非常容易的穿過生物膜和血腦屏障，并可作用于人類的神經(jīng)系統(tǒng)，嚴(yán)重威脅人類的健康；同時(shí)在加工煙草的過程中也會(huì)伴隨著產(chǎn)生高濃度的尼古丁廢棄物，對(duì)環(huán)境造成嚴(yán)重污染。因此尋找切實(shí)可行的途徑降低煙草和環(huán)境廢棄物中的尼古丁含量，對(duì)維護(hù)人類健康和生態(tài)安全有著深遠(yuǎn)的意義。 惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida S16）是本課題組前期篩選的一株能高效降解尼古丁的微生物。目前對(duì)其代謝降解尼古丁的途徑已經(jīng)確定為吡咯途徑。該降解途徑有多種酶的參與。 HspB催化6-羥基-3-琥珀酰吡啶(6-hydroxy-3-succinoyl-pyridine，HSP)到2，5-二羥基吡啶(2，5-dihydroxy-pyridine，DHP)，是尼古丁吡咯降解途徑中的關(guān)鍵酶之一。本研究對(duì)HspB進(jìn)行了表達(dá)、純化和結(jié)晶，成功獲得可培養(yǎng)HspB晶體的條件。 NicR是S16菌株降解尼古丁途徑中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。NicR屬于TetR家族，是一種最常見的原核轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。本研究對(duì)NicR全長蛋白進(jìn)行了表達(dá)、純化和結(jié)晶，并對(duì)其進(jìn)行了晶體的優(yōu)化和X射線衍射。通過同源序列比對(duì)后，截去NicR中的...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖1-1尼古丁結(jié)構(gòu)式

[2]。圖1-1尼古丁結(jié)構(gòu)式Fig.1-1StructuralFormulaofnicotine尼古丁是導(dǎo)致人類煙癮的罪魁禍?zhǔn)�。煙草在燃吸的過程中產(chǎn)生的大量尼古丁會(huì)直接進(jìn)入肺循環(huán)，能在10-20s內(nèi)穿過血腦屏障進(jìn)入大腦，并最終作用于人類的神經(jīng)系統(tǒng)[3,4]。長期....

圖1-2假單胞菌株S16尼古丁代謝途徑（A）惡臭假單胞菌株S16降解尼古丁的途徑（B）

4圖1-2假單胞菌株S16尼古丁代謝途徑（A）惡臭假單胞菌株S16降解尼古丁的途徑（B）HspB催化的反應(yīng)Fig.1-2Pathwayforthemetabolismofnicotine(A)Pathwayforthemetabolismofnicot....

圖1-3四環(huán)素抗性阻遏蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)控示意圖

圖1-3四環(huán)素抗性阻遏蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)控示意圖[32]Fig.1-3Transcriptionalregulationoftetracyclineresistancerepressorprotein[32]1.2蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)生物學(xué)簡(jiǎn)介1.2.1蛋白質(zhì)及其組成氨基酸....

圖2-1PCR反應(yīng)程序Figure2-1ProgramofPCR

圖2-1PCR反應(yīng)程序Figure2-1ProgramofPCR2.4.1.3PCR擴(kuò)增產(chǎn)物回收PCR產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠電泳回收。先在PCR產(chǎn)物中加入10×已加入核酸染料的上樣緩沖液，混勻后再上樣于瓊脂糖凝膠孔中，110V電壓，電泳20-30min....

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