微囊藻毒素（microcystin, MC）是淡水水體中一類常見的藍(lán)藻肝毒素，主要由銅綠微囊藻產(chǎn)生。近年來由于藍(lán)藻水華的頻繁爆發(fā)，MC的危害受到越來越多的重視。白鰱（Hypophthalmichthys molitrix）作為我國一種重要的淡水養(yǎng)殖魚類，在發(fā)生藍(lán)藻水華的水體中經(jīng)常受到MC的暴露，但已有研究表明，白鰱對MC卻具有極強(qiáng)的耐受能力。CYP450是動物肝臟最重要的I相解毒酶類，在魚類中也普遍存在。本研究為了探討白鰱CYP2K基因的表達(dá)情況是否與MC的休克相關(guān)，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：（1）根據(jù)其他魚類中CYP2K基因的保守序列設(shè)計(jì)簡并引物，采用PCR方法，在白鰱肝臟中克隆CYP2K基因cDNA的編碼序列；（2）利用熒光定量PCR (qPCR)技術(shù)，檢測CYP2K基因在白鰱肝臟、腎臟、脾臟、心臟、腦、腸及肌肉中的表達(dá)情況；（3）用孫瑞元氏改進(jìn)的寇氏法設(shè)計(jì)急性毒性試驗(yàn)，求得了MC腹腔注射白鰱24h的LD50；（4）以24h LD50及其1/2濃度的MC腹腔注射白鰱，注射6h后，取肝臟制作組織切片，檢測了受MC急性暴露的白鰱肝組織的損傷情況；（5）用24h LD50的1/5及1/10濃度的M...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1微囊藻毒素MC-LR的結(jié)構(gòu)

MC的致毒機(jī)理是通過與蛋白磷酸酶(proteinphosphatas絲氨酸/蘇氨酸殘基結(jié)合,抑制其活性[122],從而誘發(fā)細(xì)胞骨架蛋白高度磷使哺乳動物肝細(xì)胞凋亡或壞死,使肝臟充血腫大、動物失血休克死亡[123]由于蛋白磷酸酶的活性受到抑制,這樣就相對激活了蛋白激酶,....

圖2-1簡并引物

圖2-1簡并引物Fig.2-1DegeneratePrimer（2）總RNA提取提取RNA所用的離心管和槍頭均用0.1%的DEPC水浸泡過夜n高壓蒸汽滅菌兩次，待用；玻璃勻漿器121℃，20min高壓蒸烘烤6h，待用；所用氯仿及異丙醇均為新開封的試劑....

圖2-2膠回收圖解

圖2-2膠回收圖解Fig.2-2Thediagramofgelextractio行瓊脂糖凝膠電泳，利用Qu2-1所示。

圖3-1白鰱肝臟總RNAFig.3-1.ThetolalRNAinthehepatopancreasofsilvercarp

3結(jié)果與分析檢測結(jié)果總RNA，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢NA的18S和28S條帶清晰，在值的比值在1.8~2.0之間，表明段PCR擴(kuò)增的模板。

本文編號：3917301