化學農(nóng)藥在保護農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、提高產(chǎn)量等方面發(fā)揮著重要作用。但是,最近半個世紀,越來越多的農(nóng)藥被證實可能存在環(huán)境內(nèi)分泌干擾效應。它們通過干擾生物體正常激素調(diào)節(jié),引起機體內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)、分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)產(chǎn)生諸如雄性退化,雌雄同體,種群退化等問題。戊唑醇(Tebuconazole)是一種廣譜、高效的內(nèi)吸性三唑類殺菌劑,其低毒高效的特點使其被全世界廣泛使用。隨著戊唑醇殺菌劑的廣泛使用,其對我國生態(tài)環(huán)境的影響應引起高度重視。相關研究已表明戊唑醇會對斑馬魚造成生殖內(nèi)分泌干擾效應,但其具體干擾機制尚未清楚。因此,本課題擬展開戊唑醇對cAMP/PKA/SF-1信號轉導干擾機制的相關研究。(1)為篩選戊唑醇體外實驗具體暴露時間及暴露濃度,首先選擇0-72h間11個時間點,通過細胞計數(shù)法,選擇人源H295R細胞生長對數(shù)生長期的時期,確定戊唑醇暴露時間為48 h。同時通過MTS試劑盒及ATP試劑盒,檢測0.1 mg/L-50 mg/L范圍戊唑醇暴露48 h后H295R細胞的活力。MTS及ATP結果表明,在20mg/L濃度下,細胞活力為對照80%左右。最終選擇48h,戊唑醇暴露濃度為20 mg/L作為后續(xù)體外實驗暴...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
術語和縮略語表
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物概述
        1.1.1 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物定義
        1.1.2 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物分類
        1.1.3 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物作用及危害
    1.2 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物對HPG軸干擾作用機制研究
    1.3 戊唑醇的應用現(xiàn)狀及毒理學研究進展
        1.3.1 戊唑醇應用現(xiàn)狀
        1.3.2 戊唑醇毒理學研究進展
    1.4 cAMP/PKA/SF-1信號轉導機制研究進展
        1.4.1 蛋白質磷酸化研究進展
        1.4.2 cAMP/PKA/SF-1信號轉導機制研究進展
    1.5 本研究設計
        1.5.1 目的及意義
        1.5.2 主要研究內(nèi)容
        1.5.3 技術路線
    1.6 課題來源
第二章 戊唑醇對H295R細胞全基因組水平基因表達影響
    2.1 實驗材料
        2.2.1 供試藥劑
        2.2.2 主要儀器設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 戊唑醇對人H295R細胞暴露時間及濃度篩選
        2.2.2 H295R細胞暴露及取樣
        2.2.3 轉錄組分析
    2.3 結果與分析
        2.3.1 戊唑醇對人H295R細胞生長抑制
        2.3.2 測序數(shù)據(jù)質量評估
        2.3.3 差異基因表達分析
        2.3.4 差異基因表達聚類分析
        2.3.5 差異表達基因GO分析
        2.3.6 差異表達基因KEGG注釋與富集分析
    2.4 小結
第三章 戊唑醇對PKA的活性抑制效應
    3.1 實驗材料
        3.1.1 供試藥劑
        3.1.2 主要儀器設備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)
        3.2.2 斑馬魚胚胎培養(yǎng)
        3.2.3 人H295R細胞、YAK1基因缺失型人H295R細胞及斑馬魚胚胎中PKA活性測定
        3.2.4 人H295R細胞及YAK1基因缺失型人H295R細胞中SF-1通路相關基因表達水平測定
        3.2.5 人H295R細胞、YAK1基因缺失型人H295R細胞及斑馬魚胚胎中PKA磷酸化功能
        3.2.6 數(shù)據(jù)整理及分析評估
    3.3 結果與分析
        3.3.1 YAK-1基因缺失型人H295R細胞驗證
        3.3.2 戊唑醇對PKA的磷酸化功能影響
        3.3.3 戊唑醇對PKA磷酸化功能的影響
        3.3.4 戊唑醇對人H295R細胞SF-1通路相關基因表達量影響
        3.3.5 戊唑醇對人AYAK1 H295R細胞SF-1通路相關基因表達量影響
    3.4 小結
第四章 戊唑醇對PKA的活性抑制機制
    4.1 實驗材料
        4.1.1 供試藥劑
        4.1.2 主要儀器設備
    4.2 實驗方法
        4.2.1 TEB與PKA-Cα亞基的結合試驗
    4.3 結果與分析
        4.3.1 TEB與PKA-Cα亞基的結合試驗
    4.4 小結
全文總結
    總結
    論文創(chuàng)新點
    不足與展望
參考文獻
作者簡歷及讀研期間取得的科研成果



本文編號：3860766