化學(xué)農(nóng)藥在保護(hù)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、提高產(chǎn)量等方面發(fā)揮著重要作用。但是,最近半個(gè)世紀(jì),越來越多的農(nóng)藥被證實(shí)可能存在環(huán)境內(nèi)分泌干擾效應(yīng)。它們通過干擾生物體正常激素調(diào)節(jié),引起機(jī)體內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)、分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)產(chǎn)生諸如雄性退化,雌雄同體,種群退化等問題。戊唑醇(Tebuconazole)是一種廣譜、高效的內(nèi)吸性三唑類殺菌劑,其低毒高效的特點(diǎn)使其被全世界廣泛使用。隨著戊唑醇?xì)⒕鷦┑膹V泛使用,其對(duì)我國(guó)生態(tài)環(huán)境的影響應(yīng)引起高度重視。相關(guān)研究已表明戊唑醇會(huì)對(duì)斑馬魚造成生殖內(nèi)分泌干擾效應(yīng),但其具體干擾機(jī)制尚未清楚。因此,本課題擬展開戊唑醇對(duì)cAMP/PKA/SF-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)干擾機(jī)制的相關(guān)研究。(1)為篩選戊唑醇體外實(shí)驗(yàn)具體暴露時(shí)間及暴露濃度,首先選擇0-72h間11個(gè)時(shí)間點(diǎn),通過細(xì)胞計(jì)數(shù)法,選擇人源H295R細(xì)胞生長(zhǎng)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的時(shí)期,確定戊唑醇暴露時(shí)間為48 h。同時(shí)通過MTS試劑盒及ATP試劑盒,檢測(cè)0.1 mg/L-50 mg/L范圍戊唑醇暴露48 h后H295R細(xì)胞的活力。MTS及ATP結(jié)果表明,在20mg/L濃度下,細(xì)胞活力為對(duì)照80%左右。最終選擇48h,戊唑醇暴露濃度為20 mg/L作為后續(xù)體外實(shí)驗(yàn)暴...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
術(shù)語和縮略語表
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物概述
        1.1.1 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物定義
        1.1.2 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物分類
        1.1.3 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物作用及危害
    1.2 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物對(duì)HPG軸干擾作用機(jī)制研究
    1.3 戊唑醇的應(yīng)用現(xiàn)狀及毒理學(xué)研究進(jìn)展
        1.3.1 戊唑醇應(yīng)用現(xiàn)狀
        1.3.2 戊唑醇毒理學(xué)研究進(jìn)展
    1.4 cAMP/PKA/SF-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究進(jìn)展
        1.4.1 蛋白質(zhì)磷酸化研究進(jìn)展
        1.4.2 cAMP/PKA/SF-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究進(jìn)展
    1.5 本研究設(shè)計(jì)
        1.5.1 目的及意義
        1.5.2 主要研究?jī)?nèi)容
        1.5.3 技術(shù)路線
    1.6 課題來源
第二章 戊唑醇對(duì)H295R細(xì)胞全基因組水平基因表達(dá)影響
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 供試藥劑
        2.2.2 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 戊唑醇對(duì)人H295R細(xì)胞暴露時(shí)間及濃度篩選
        2.2.2 H295R細(xì)胞暴露及取樣
        2.2.3 轉(zhuǎn)錄組分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 戊唑醇對(duì)人H295R細(xì)胞生長(zhǎng)抑制
        2.3.2 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估
        2.3.3 差異基因表達(dá)分析
        2.3.4 差異基因表達(dá)聚類分析
        2.3.5 差異表達(dá)基因GO分析
        2.3.6 差異表達(dá)基因KEGG注釋與富集分析
    2.4 小結(jié)
第三章 戊唑醇對(duì)PKA的活性抑制效應(yīng)
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 供試藥劑
        3.1.2 主要儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 斑馬魚胚胎培養(yǎng)
        3.2.3 人H295R細(xì)胞、YAK1基因缺失型人H295R細(xì)胞及斑馬魚胚胎中PKA活性測(cè)定
        3.2.4 人H295R細(xì)胞及YAK1基因缺失型人H295R細(xì)胞中SF-1通路相關(guān)基因表達(dá)水平測(cè)定
        3.2.5 人H295R細(xì)胞、YAK1基因缺失型人H295R細(xì)胞及斑馬魚胚胎中PKA磷酸化功能
        3.2.6 數(shù)據(jù)整理及分析評(píng)估
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 YAK-1基因缺失型人H295R細(xì)胞驗(yàn)證
        3.3.2 戊唑醇對(duì)PKA的磷酸化功能影響
        3.3.3 戊唑醇對(duì)PKA磷酸化功能的影響
        3.3.4 戊唑醇對(duì)人H295R細(xì)胞SF-1通路相關(guān)基因表達(dá)量影響
        3.3.5 戊唑醇對(duì)人AYAK1 H295R細(xì)胞SF-1通路相關(guān)基因表達(dá)量影響
    3.4 小結(jié)
第四章 戊唑醇對(duì)PKA的活性抑制機(jī)制
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 供試藥劑
        4.1.2 主要儀器設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 TEB與PKA-Cα亞基的結(jié)合試驗(yàn)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 TEB與PKA-Cα亞基的結(jié)合試驗(yàn)
    4.4 小結(jié)
全文總結(jié)
    總結(jié)
    論文創(chuàng)新點(diǎn)
    不足與展望
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷及讀研期間取得的科研成果



本文編號(hào)：3860766