目的:研究PM_2.5有機(jī)提取物暴露對(duì)小鼠畸胎瘤干細(xì)胞P19心肌分化過程的干擾作用,旨在揭示PM_2.5有機(jī)提取物產(chǎn)生心肌分化毒性的機(jī)制。方法:1.MTT法篩選出PM_2.5無細(xì)胞毒性劑量MTT細(xì)胞毒性試驗(yàn)設(shè)置劑量梯度設(shè)置為0 mg/L,1 mg/L,10 mg/L,100mg/L,同時(shí)設(shè)置陽性對(duì)照組0.5%TritonX100,選擇非細(xì)胞毒性的劑量進(jìn)行后續(xù)研究。2.建立P19小鼠畸胎瘤干細(xì)胞體外心肌分化模型P19小鼠畸胎瘤干細(xì)胞體外心肌分化模型模擬體內(nèi)胚胎心臟發(fā)育過程,整個(gè)過程分為四個(gè)時(shí)期:未分化時(shí)期、心肌中胚層時(shí)期、心肌祖細(xì)胞期、和成熟心肌期,1%DMSO懸浮培養(yǎng)誘導(dǎo)擬胚體形成后進(jìn)行貼壁培養(yǎng),分化過程共持續(xù)14天。3.未分化P19細(xì)胞暴露非細(xì)胞毒性劑量(10 mg/L)PM_2.5.5 48 h對(duì)分化進(jìn)程的干擾作用顯微鏡下觀察分化各時(shí)期形態(tài)學(xué)變化,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)不同分化時(shí)期特異性標(biāo)志物的表達(dá),免疫熒光及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分化末期成熟心肌細(xì)胞功能性蛋白cTNT的表達(dá)情況,判斷未分化時(shí)期暴露PM

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
引言
第一部分 PM_2.5對(duì)P19小鼠畸胎瘤干細(xì)胞心肌分化過程的影響
    (一)材料與方法
        1.材料
        2.方法
    (二)結(jié)果
        1.PM_2.5無細(xì)胞毒性劑量的確定
        2.P19小鼠畸胎瘤細(xì)胞心肌定向分化模型及分化不同時(shí)期形態(tài)學(xué)變化
        3.PM_2.5干擾心肌分化各階段特異性標(biāo)志物的表達(dá)
        4.PM_2.5抑制P19細(xì)胞分化為成熟心肌細(xì)胞
    (三)討論
        1.PM_2.5成分的復(fù)雜性
        2.干擾干細(xì)胞分化效率的混雜因素
        3.體外干細(xì)胞模型研究PM_2.5心肌發(fā)育毒性結(jié)果外推至人的不確定性
        4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果的局限性
第二部分 PM_2.5對(duì)未分化期P19細(xì)胞的毒性作用機(jī)制研究
    (一)材料與方法
        1.材料
        2.方法
    (二)結(jié)果
        1.AHR信號(hào)通路的激活和WNT信號(hào)通路的抑制
        2.PM_2.5引起細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
        3.PM_2.5致細(xì)胞遺傳損傷
        4.PM_2.5致細(xì)胞凋亡作用
        5.PM_2.5抑制細(xì)胞增殖
        6.PM_2.5阻滯細(xì)胞周期
    (三)討論
        1.AHR信號(hào)通路、WNT信號(hào)通路與干細(xì)胞特性維持之間的關(guān)系
        2.細(xì)胞遺傳損傷與細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系
        3.細(xì)胞周期與細(xì)胞增殖的關(guān)系
        4.細(xì)胞周期與遺傳損傷及細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系
        5.AHR信號(hào)通路和WNT信號(hào)通路改變
        6.本部分結(jié)果總結(jié)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖解
結(jié)論和展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
中英文縮寫詞表
研究生期間科研經(jīng)歷和發(fā)表的文章
致謝



本文編號(hào)：3786419