我國是淡水魚食用大國,也是淡水魚養(yǎng)殖大國,而魚鱗作為魚的副產(chǎn)物,常被當(dāng)作廢棄物而丟棄。為了合理利用廢棄魚鱗資源,實(shí)現(xiàn)其高值化,本研究以鯽魚魚鱗為實(shí)驗(yàn)原料,通過單因素和響應(yīng)面優(yōu)化得到了制備鯽魚魚鱗抗菌肽的最佳工藝,然后對其分離純化并進(jìn)行了抗菌活性以及抗氧化活性分析,最后通過鯽魚魚鱗抗菌肽的噴灑和添加試驗(yàn),測定和評價(jià)了其對果蔬及其制品的防腐保鮮效果。主要結(jié)論如下:1、制備鯽魚魚鱗抗菌肽粗酶解液,以大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌活性為優(yōu)化目標(biāo),篩選確定胃蛋白酶為本試驗(yàn)酶解用酶。單因素試驗(yàn)確定各最適條件分別為:檸檬酸濃度10%,酸和魚鱗液料比14:1(mL/g),提取溫度50℃,提取時(shí)間為12 h,胃蛋白酶添加量0.8%(w/w),酶解時(shí)間2 h。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化,確定鯽魚魚鱗抗菌肽粗酶解液的最佳制備工藝為:酸濃度11.3%,液料比15:1(mL/g),酶添加量0.9%(w/w),酶解時(shí)間2.4 h。此條件下,鯽魚魚鱗中膠原蛋白提取率達(dá)到了79.47%。2、最佳工藝條件下制得的魚鱗抗菌肽粗酶解液經(jīng)透析后,再分別經(jīng)Sephadex G-15、Sephadex G-50凝膠過濾層析和纖維素...

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
    1.1 抗菌肽概述
        1.1.1 抗菌肽簡介
        1.1.2 抗菌肽的分類
            1.1.2.1 昆蟲抗菌肽
            1.1.2.2 魚類抗菌肽
            1.1.2.3 哺乳動物抗菌肽
            1.1.2.4 兩棲類動物抗菌肽
            1.1.2.5 其他來源動物抗菌肽
            1.1.2.6 植物源抗菌肽
            1.1.2.7 微生物源抗菌肽
        1.1.3 抗菌肽的制備方法
            1.1.3.1 自然提取法
            1.1.3.2 化學(xué)合成法
            1.1.3.3 基因工程法
            1.1.3.4 酶解法
        1.1.4 抗菌肽的生物活性
            1.1.4.1 廣譜抗細(xì)菌活性
            1.1.4.2 抗真菌活性
            1.1.4.3 抗病毒活性
            1.1.4.4 抗原蟲活性
            1.1.4.5 抗腫瘤活性
        1.1.5 抗菌肽的作用機(jī)理
            1.1.5.1 對細(xì)胞膜損傷
            1.1.5.2 細(xì)胞內(nèi)損傷
    1.2 抗菌肽的應(yīng)用前景及存在的問題
        1.2.1 抗菌肽的應(yīng)用前景
            1.2.1.1 在動植物轉(zhuǎn)基因工程的應(yīng)用
            1.2.1.2 在食品工業(yè)的應(yīng)用
            1.2.1.3 在臨床醫(yī)療的應(yīng)用
            1.2.1.4 在畜牧養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用
        1.2.2 抗菌肽應(yīng)用存在的問題
    1.3 魚鱗研究利用現(xiàn)狀
    1.4 本研究的目的及意義
    1.5 本研究的主要內(nèi)容
第2章 鯽魚魚鱗抗菌肽粗酶解液的制備工藝研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 魚鱗中主要成分測定
            2.2.1.1 水分含量測定
            2.2.1.2 灰分含量測定
            2.2.1.3 蛋白質(zhì)含量測定
            2.2.1.4 粗脂肪含量測定
        2.2.2 魚鱗粗酶解液制備工藝方法
            2.2.2.1 制備工藝流程
            2.2.2.2 魚鱗預(yù)處理
            2.2.2.3 酸提魚鱗膠原蛋白
            2.2.2.4 酶解和滅酶
            2.2.2.5 離心
            2.2.2.6 旋蒸濃縮
        2.2.3 抑菌活性測定
            2.2.3.1 菌懸液的制備
            2.2.3.2 抑菌圈測定
        2.2.4 蛋白酶的篩選
        2.2.5魚鱗粗酶解液制備單因素實(shí)驗(yàn)
            2.2.5.1 魚鱗膠原蛋白提取酸濃度
            2.2.5.2 魚鱗膠原蛋白酸提液料比
            2.2.5.3 魚鱗膠原蛋白提取溫度
            2.2.5.4 魚鱗膠原蛋白提取時(shí)間
            2.2.5.5 蛋白酶添加量
            2.2.5.6 酶解時(shí)間
        2.2.6 響應(yīng)面法優(yōu)化魚鱗粗酶解液制備工藝
        2.2.7 膠原蛋白提取率的測定
            2.2.7.1 試劑配制
            2.2.7.2 羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            2.2.7.3 魚鱗中羥脯氨酸含量測定
            2.2.7.4 魚鱗粗酶解液中羥脯氨酸含量測定
            2.2.7.5 膠原蛋白提取率的計(jì)算
        2.2.8 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 魚鱗中主要成分測定結(jié)果
        2.3.2 蛋白酶篩選結(jié)果
        2.3.3 魚鱗粗酶解液制備單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.3.3.1 提取酸濃度對粗酶解液抑菌性的影響
            2.3.3.2 酸提液料比對粗酶解液抑菌性的影響
            2.3.3.3 提取溫度對粗酶解液抑菌性的影響
            2.3.3.4 提取時(shí)間對粗酶解液抑菌性的影響
            2.3.3.5 蛋白酶添加量對粗酶解液抑菌性的影響
            2.3.3.6 酶解時(shí)間對粗酶解液抑菌性的影響
        2.3.4 響應(yīng)面優(yōu)化魚鱗粗酶解液制備工藝結(jié)果及分析
            2.3.4.1 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果
            2.3.4.2 回歸模型建立與方差分析
            2.3.4.3 各因素間交互作用響應(yīng)面分析
            2.3.4.4 魚鱗粗酶解液最佳制備工藝條件的確定與驗(yàn)證
        2.3.5 膠原蛋白提取率測定結(jié)果
            2.3.5.1 羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線建立
            2.3.5.2 魚鱗膠原蛋白提取率
    2.4 本章小結(jié)
第3章 鯽魚魚鱗抗菌肽的分離純化及其性能分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 魚鱗抗菌肽粗酶解液的制備
        3.2.2 透析除鹽
        3.2.3 Sephadex G-15 凝膠過濾層析
            3.2.3.1 Sephadex G-15 裝柱、平衡
            3.2.3.2 上樣、洗脫和收集
            3.2.3.3 Sephadex G-15 的清洗和再生
        3.2.4 Sephadex G-50 凝膠過濾層析
            3.2.4.1 Sephadex G-50 裝柱、平衡
            3.2.4.2 上樣、洗脫和收集
            3.2.4.3 Sephadex G-50 的清洗和再生
        3.2.5 纖維素DEAE-52 離子交換層析
            3.2.5.1 裝柱、平衡
            3.2.5.2 上樣、洗脫和收集
            3.2.5.3 纖維素DEAE-52 的清洗和再生
        3.2.6 SDS-PAGE電泳分子質(zhì)量測定
            3.2.6.1 電泳試劑配制
            3.2.6.2 分離膠與濃縮膠的配制
            3.2.6.3 樣品蛋白與Marker處理
            3.2.6.4 SDS-PAGE電泳
            3.2.6.5 脫色、染色與拍照
        3.2.7 魚鱗抗菌肽廣譜抑菌活性測試
        3.2.8 魚鱗抗菌肽的MIC和 MBC測定
        3.2.9 魚鱗抗菌肽的抗氧化性能測試
            3.2.9.1 羥自由基(·OH)清除能力的測定
            3.2.9.2 DPPH自由基(DPPH·)清除能力測定
            3.2.9.3 超氧陰離子自由基(O2
-·)清除能力測定
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 Sephadex G-15 凝膠過濾層析結(jié)果分析
        3.3.2 Sephadex G-50 凝膠過濾層析結(jié)果分析
        3.3.3 DEAE-52 陰離子交換層析結(jié)果分析
        3.3.4 SDS-PAGE電泳結(jié)果
        3.3.5 魚鱗抗菌肽廣譜抑菌活性結(jié)果
        3.3.6 魚鱗抗菌肽MIC和 MBC測定結(jié)果
        3.3.7 魚鱗抗菌肽抗氧化性測試結(jié)果
            3.3.7.1 羥自由基(·OH)清除能力測定結(jié)果
            3.3.7.2 DPPH自由基(DPPH·)清除能力測定結(jié)果
            3.3.7.3 超氧陰離子自由基(O2-·)清除能力測定結(jié)果
    3.4 本章小結(jié)
第4章 鯽魚魚鱗抗菌肽在果蔬及其制品方面的應(yīng)用研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 魚鱗抗菌肽對新鮮果蔬防腐保鮮效果測試
            4.2.1.1 魚鱗抗菌肽對新鮮水果防腐保鮮試驗(yàn)
            4.2.1.2 果實(shí)外觀感官評價(jià)
            4.2.1.3 果實(shí)失重率測定
            4.2.1.4 果實(shí)呼吸強(qiáng)度測定
            4.2.1.5 果實(shí)丙二醛(MDA)含量測定
            4.2.1.6 多酚氧化酶(PPO)活性測定
            4.2.1.7 過氧化物酶(POD)活性測定
        4.2.2 魚鱗抗菌肽對鮮榨果蔬汁防腐保鮮效果測試
            4.2.2.1 魚鱗抗菌肽對鮮榨蔬菜汁抑菌保鮮試驗(yàn)
            4.2.2.2 鮮榨黃瓜汁的色澤變化測定
            4.2.2.3 鮮榨黃瓜汁穩(wěn)定系數(shù)的測定
            4.2.2.4 鮮榨黃瓜汁的pH變化測定
            4.2.2.5 鮮榨黃瓜汁中菌落總數(shù)測定
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 魚鱗抗菌肽對李子防腐保鮮試驗(yàn)
            4.3.1.1 果實(shí)外觀感官評價(jià)
            4.3.1.2 果實(shí)失重率測定結(jié)果
            4.3.1.3 果實(shí)呼吸強(qiáng)度測定結(jié)果
            4.3.1.4 果實(shí)丙二醛(MDA)含量測定結(jié)果
            4.3.1.5 多酚氧化酶(PPO)活性測定結(jié)果
            4.3.1.6 過氧化物酶(POD)活性測定結(jié)果
        4.3.2 魚鱗抗菌肽對鮮榨黃瓜汁抑菌保鮮試驗(yàn)
            4.3.2.1 鮮榨黃瓜汁的色澤變化測定結(jié)果
            4.3.2.2 鮮榨黃瓜汁穩(wěn)定系數(shù)的測定結(jié)果
            4.3.2.3 鮮榨黃瓜汁的pH變化測定結(jié)果
            4.3.2.4 鮮榨黃瓜汁中菌落總數(shù)測定結(jié)果
    4.4 本章小結(jié)
第5章 論文總結(jié)、創(chuàng)新點(diǎn)與展望
    5.1 論文總結(jié)
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
參考文獻(xiàn)
碩士研究生期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3772561

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