發(fā)布時間：2023-03-26 16:12

　　隨著全球工業(yè)的迅速發(fā)展，我國乃至全世界日益嚴(yán)重的重金屬污染現(xiàn)狀，已經(jīng)引起了卄I：界各W科學(xué)家的高度重視，對于這個問題的解決己迫在眉睫。I I前里金屬的檢測方法：微譜分析(MS)、紫外可見分光光度法(UV)、原子吸收法(AAS)、原了熒光法(AFS)、X熒光光譜(XRF)、電感拙合等離子質(zhì)譜法(丨CP-MS)等，里然這些方法具奮靈敏度高、特異性好等特點(diǎn)，但所需設(shè)備較為昂貴，需要專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行操作，樣品前處理過程復(fù)雜，檢測費(fèi)力費(fèi)時且成本高�；谶@些方而的考慮，『-種簡便、快速、特異和靈敏的檢測方法的建立已然成為一研究熱點(diǎn)。而免疫學(xué)檢測方法為重金屬檢測提供丫一種新的策略和途徑，該方法是一種其存高度特異性和靈敏度的分析方法，而且操作簡單、價格低廉、檢測時間短(約3?5min),迪于大規(guī)模的現(xiàn)場蹄選。目前，國內(nèi)外對于重金屬的免疫檢測主要集中在鎘(Cd)、鉛(Pb)、汞(Hg)、鉻(Cr)等毒性較大的重金屬，本課題以重金屬鎘(Cd)為研宄對象，利用噬菌體-納米抗體展示技術(shù)成功獲得了一種新型的特異性針對Cd-DTPA的非傳統(tǒng)型單克隆抗體——納米抗體(Nb)，初步建立了間接競爭性ELISA免疫檢測法...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號表
第一章 緒論
    1 研究的背景及意義
    2 重金屬污染的主要來源、危害及現(xiàn)狀
        2.1 土壤中重金屬的污染來源、危害及現(xiàn)狀
        2.2 水體中重金屬的污染來源、危害及現(xiàn)狀
        2.3 農(nóng)產(chǎn)品中重金屬的污染來源、危害及現(xiàn)狀
    3 主要的重金屬污染及危害
        3.1 鉛
        3.2 汞
        3.3 鉻
        3.4 砷
        3.5 鎘
    4 重金屬的檢測方法及特點(diǎn)
        4.1 傳統(tǒng)檢測法
            4.1.1 紫外可見分光光度法
            4.1.2 原子吸收光譜法
            4.1.3 原子熒光法
            4.1.4 電化學(xué)法
            4.1.5 X 熒光光譜法
            4.1.6 電感耦合等離子質(zhì)譜法
        4.2 免疫檢測法
            4.2.1 重金屬 KinExA 免疫檢測法
            4.2.2 重金屬免疫色譜法
            4.2.3 免疫膠體金層析技術(shù)
            4.2.4 直接競爭性 ELISA 檢測法
            4.2.5 間接競爭性 ELISA 檢測法
    5 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀、發(fā)展水平以及存在的問題
    6 本課題的研究目的、內(nèi)容及意義
    7 研究方法及技術(shù)路線
        7.1 研究方法
        7.2 技術(shù)路線
第二章 金屬鎘完全抗原的制備及鑒定
    1 材料與方法
        1.1 儀器與試劑
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 主要試劑配方
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.0 完全抗原的制備
        2.1 完全抗原的鑒定
            2.1.1 SDS-PAGE 鑒定
            2.1.2 抗原濃度測定
            2.1.3 紫外鑒定
            2.1.4 質(zhì)譜鑒定
    3 結(jié)果與分析
        3.1 完全抗原 SDS-PAGE 鑒定
        3.2 抗原濃度測定
            3.2.1 BSA 標(biāo)蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
            3.2.2 Cd-DTPA-BSA 濃度測定
            3.2.3 Cd-DTPA-OVA 濃度測定
            3.2.4 DTPA-BSA 濃度測定
            3.2.5 無金屬抗原 DTPA-OVA 濃度測定
        3.3 紫外鑒定
        3.4 質(zhì)譜鑒定
    4 結(jié)論與討論
第三章 金屬鎘-納米抗體庫的篩選及檢測
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 細(xì)胞
            1.1.2 單域重鏈抗體庫
        1.2 儀器與試劑
            1.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 主要試劑配方
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 原 VHH 抗體庫的擴(kuò)增
            2.1.1 M13K07 單克隆噬菌體的擴(kuò)增、純化
            2.1.2 原始 VHH 庫的大量制備
        2.2 Cd-納米抗體庫的富集、篩選
            2.2.1 納米抗體庫第一輪富集步驟
            2.2.2 Cd-DTPA-VHH 的再富集
    3 Cd-DTPA VHH 庫富集度及特異性檢測
    4 結(jié)果與分析
        4.1 輔助噬菌體的擴(kuò)增
        4.2 原始 VHH 庫的擴(kuò)增
        4.3 Cd-DTPA VHH 庫富集度及特異性檢測
            4.3.1 Cd-DTPA 第一至七輪納米抗體庫噬菌體輸入輸出量比較
            4.3.2 抗體庫富集度及特異性檢測
    5 結(jié)論與討論
第四章 單克隆 VHH 挑選及檢測
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 儀器與試劑
            1.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 主要試劑配方
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 單克隆 VHH 菌落的挑選
        2.2 單克隆 VHH 上清 ELISA 檢測
            2.2.1 單克隆陽性克隆初篩選
            2.2.2 陽性克隆特異性初步檢測
    3 結(jié)果與分析
        3.1 單克隆陽性克隆初篩選
        3.2 陽性克隆特異性初檢測
    4 結(jié)論與討論
第五章 Cd-單克隆抗體(VHH)的特性測定及其應(yīng)用
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 儀器與試劑
            1.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 主要試劑配方
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 陽性單克隆抗體的擴(kuò)增、純化
        2.2 Cd-單克隆噬菌體 VHH-螯合物競爭性 ELISA
        2.3 Cd-DTPA 單克隆 VHH 編碼序列的測定
        2.4 Cd-DTPA-VHH 間接競爭性 ELISA 檢測法的建立
            2.4.1 棋盤法最佳抗原抗體反應(yīng)濃度摸索及其親和常數(shù) Kaff測定
            2.4.2 最佳濃度條件下對包被溫度、時間及游離半抗原孵育時間優(yōu)化
            2.4.3 VHH 與 DTPA 濃度關(guān)系摸索
            2.4.4 VHH 與 Cd-DTPA 及 DTPA 間接競爭性 ELISA
            2.4.5 VHH 間接競爭性 ELISA 標(biāo)準(zhǔn)抑制曲線
        2.5 Cd-DTPA-VHH 與其他金屬離子的交叉實(shí)驗(yàn)
        2.6 水樣加強(qiáng)回收實(shí)驗(yàn)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 陽性單克隆抗體的擴(kuò)增、純化
        3.2 Cd-單克隆噬菌體 VHH –螯合物競爭性 ELISA
        3.3 Cd-DTPA 單克隆 VHH 編碼序列的測定
        3.4 Cd-DTPA-VHH 間接競爭性 ELISA 檢測法的建立
            3.4.1 棋盤法最佳抗原抗體反應(yīng)濃度摸索及其親和常數(shù) Kaff測定
            3.4.2 最佳濃度條件下對包被溫度、時間及游離半抗原孵育時間優(yōu)化
            3.4.3 VHH 與 DTPA 濃度關(guān)系摸索
            3.4.4 VHH 與 Cd-DTPA 及 DTPA 間接競爭性 ELISA
            3.4.5 VHH 間接競爭性 ELISA 標(biāo)準(zhǔn)抑制曲線
        3.5 Cd-DTPA-VHH 與其他金屬離子的交叉實(shí)驗(yàn)
        3.6 水樣加強(qiáng)回收實(shí)驗(yàn)
    4 結(jié)論與討論
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 本課題創(chuàng)新點(diǎn)
    6.3 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文和承擔(dān)科研項(xiàng)目及取得成果
致謝



本文編號：3771276