汞作為環(huán)境中毒性極強(qiáng)的金屬離子,可在水稻體內(nèi)積累,對(duì)水稻細(xì)胞具有強(qiáng)烈的毒性,并誘發(fā)植物體損傷、產(chǎn)量下降。為了探究水稻對(duì)汞的吸收及耐性機(jī)制,本研究將實(shí)驗(yàn)前期篩選得到的OsPP2C進(jìn)行表達(dá)分析及其遺傳轉(zhuǎn)化,主要研究結(jié)果如下:1、表達(dá)分析:日本晴幼苗光照培養(yǎng)箱中正常培養(yǎng)到三葉期,從光照0小時(shí)開始,以2 h為間隔,分析葉片中OsPP2C表達(dá)變化。結(jié)果顯示,日本晴中OsPP2C的表達(dá)峰值在ZT 10 h處;在黑暗條件下OsPP2C的表達(dá)均趨于平穩(wěn),因此OsPP2C的表達(dá)在水稻幼苗期具有周期節(jié)律性。正常生長(zhǎng)情況下,日本晴OsPP2C在各個(gè)組織中均有表達(dá),葉片中表達(dá)量最高;汞脅迫6 h后,根、莖、根莖結(jié)合處OsPP2C表達(dá)量顯著上升,但葉片中的顯著下降。構(gòu)建OsPP2C與GFP融合載體,利用農(nóng)桿菌GV3101菌液注射本氏煙葉片細(xì)胞以及重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化水稻原生質(zhì)體,發(fā)現(xiàn)OsPP2C可能在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜均有表達(dá)。2、功能驗(yàn)證:陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因株系與野生型日本晴幼苗汞脅迫6 h后,野生型和超表達(dá)株系葉片中表達(dá)量出現(xiàn)下降,而干擾株系的未發(fā)生顯著變化。但根系OsPP2C的表達(dá)量呈上升趨勢(shì),野生型和超表達(dá)株系中的表達(dá)量在... 

【文章來(lái)源】：浙江師范大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

5S::eGFP(NO-TAA)載體圖譜

圖 1-4 OsPP2C 的組織特異性表達(dá)Fig. 1-4 Tissue-specific expression of OsPP2C4.4 OsPP2C 的瞬時(shí)表達(dá)4.4.1 35S::OsPP2C:eGFP 與 35S::eGFP:OsPP2C 載體的構(gòu)建本實(shí)驗(yàn)利用水稻 cDNA，擴(kuò)增了 OsPP2C 基因，并通過(guò) pMD-18T 驗(yàn)證、檢

圖 1-5 酶切及菌液 PCR 電泳圖a. 酶切圖 M. Marker(DL2000); 1, 2. PP2C-No-ATG; 3, 4. eGFP-No-ATG; 5. 對(duì)照質(zhì) 菌液 PCR 驗(yàn)證圖 M. Marker(DL2000); 1, 2. 35S::eGFP:OsPP2C; 3, 4. 35S::OsPP2C:eG. 質(zhì)粒酶切驗(yàn)證圖 M1. Marker(DL2000); M2. Marker(DL10000); 1 , 2. 35S::eGFP:OsPP3, 4. 35S::OsPP2C:eGFPFig. 1-5 agarose gel electrophoresis of enzymatic digestion and PCR

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]二穗短柄草BdPYL和BdPP2CA基因的克隆及BdPP2CA6抗鹽功能研究[D]. 張釩.華中科技大學(xué) 2017
[2]汞脅迫下水稻根蛋白質(zhì)組學(xué)及抗性相關(guān)基因功能分析[D]. 王飛娟.浙江大學(xué) 2010

碩士論文
[1]汞對(duì)水稻幼苗生長(zhǎng)的影響及水稻基因OsPP2C與其耐汞性[D]. 劉元香.浙江師范大學(xué) 2016
[2]百脈根LjPP2C蛋白磷酸酶負(fù)調(diào)控MPK6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑[D]. 官曉敏.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]白菜PP2C型蛋白磷酸酶ABI1同源蛋白（BraABI1b）參與植物ABA反應(yīng)的初步功能分析[D]. 郝紅梅.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[4]水曲柳節(jié)律基因LHY啟動(dòng)子克隆及功能研究[D]. 王璇.東北林業(yè)大學(xué) 2015
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