辣根過氧化物酶（HRP;EC 1.11.1.7）是一種含鐵原卟啉輔基的復合蛋白酶,在H202存在條件下可以催化氧化多種芳香化合物。本課題用共價交聯(lián)法和物理包埋法將辣根過氧化物酶分別固定在改性聚丙烯腈小球表面上和聚乙烯醇混合膜中,應用到金橙Ⅰ溶液的處理中。在第二章中,先利用NaOH等試劑將聚丙烯腈小球改性,然后用戊二醛將辣根過氧化物酶固定上去,并利用FTIR和SEM/EDS對固定化前后的聚丙烯腈小球表征。優(yōu)化后的酶固定化條件如下:戊二醛濃度為10%;酶溶液濃度為1mg/mL;固定化時間為24h;最適pH為7.0。優(yōu)化條件下固定化酶的最大載酶量為10mg/g,固定化酶的相對活性保留值為67%,固定化酶的儲存穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性均明顯提高。在第三章中,我們將適量辣根過氧化物酶與一定濃度的聚乙烯醇和藻朊酸鈉混合在一起形成均勻溶液,然后將溶液平鋪在玻璃板上,最后將玻璃板浸入50%硝酸鈉和1%氯化鈣的混合溶液中成膜,即得到固定化酶,固定化酶用SEM/EDS進行表征。優(yōu)化后的酶固定化條件如下:聚乙烯醇濃度為10%;藻朊酸鈉濃度為1.2%;酶溶液濃度為2mg/mL;最適pH值為7.0。優(yōu)化條件下固定化酶的... 

【文章來源】：福州大學福建省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

辣根實物圖

夠催化酚類、芳香類、吲哚類等含有大；ｉ鍵共軛體系芳香化合物的氧化反應，所??以辣根過氧化物酶也是應用較為廣泛的酶制劑，在廢水處理、環(huán)境化學、生物傳??感器、有機合成中都有較大的應用【１２】。辣根過氧化物酶分子量約為４４ｋＤａ，穩(wěn)定??性很好，酶溶液在室溫下置于ｐＨ５￣１０的環(huán)境中能夠長期保存，粉劑酶如果儲存??于低溫干燥處，可以長期保存不失活…］。ＨＲＰ的純度常用ＲＺ來表示，ＲＺ是德??文ＲｅｉｎｈｅｉｔＺａｈｌ?（純度數(shù)）的縮寫，ＲＺ值越小說明雜蛋白越少１｜４］。??１．１．３辣根過氧化物酶的結構??辣根過氧化物酶是由主酶和輔基結合的卟啉蛋白質，其主酶是無色的糖蛋白??（最高吸收峰為２７５ｎｍ），輔基是深棕色的含鐵卟啉（最高吸收峰為４０３ｎｍ）。辣??根過氧化物酶內有一條具有３０８個氨基酸殘基的多肽鏈，Ｗｅｌｉｎｄｅｒ己經對這些氨??基酸殘基測序｜１５］。肽鏈的氨基末端連有焦谷氨酸鹽，羧基末端連有丟失了末端殘??基Ｓｅｒ３０８的分子。四個半胱氨酸殘基之間形成了四個二硫鍵，Ａｓｐ９９和Ａｒｇｌ２３??之間還有一個鹽橋。９個糖基化位點已經有８個被占據(jù)，但是形成的多糖并不是??均一的：七糖占全部多糖的７５°／ｅｒ￣８０％，剩下的是比七糖聚合度低的多糖ｌ｜６】。ＨＲＰ??碳水化合物的含量與辣根的品種和產地有關，大多是在１８％￣２２％之間。??

ＨＲＰ（Ｐｏｒ－Ｆｅｍ，?Ｐｏｒ代表血紅素卟啉）被Ｈ２０２激活形成一種高價含中間體Ｐ〇ｒ＇Ｆｅｍ＝０，這個中間體通常也被稱作Ｃｏｍｐｏｕｎｄ?Ｉ?；?ＨＲＰ優(yōu)先催ｏｍｐｏｕｎｄ?Ｉ被供電子底物苯酌還原，這時Ｃｏｍｐｏｕｎｄ丨要么恢復到原始酶的，要么轉化成另一種中間體ＣｏｍｐｏｕｎｄＩＩ?（Ｐｏｒ－Ｆｅｎ－ＯＨ）；?ＣｏｍｐｏｕｎｄＩＩ被苯原成原始酶。??１．５辣根過氧化物酶的應用研究現(xiàn)狀??早在二十世紀初期，Ｒｏｂｅｒｔ?Ｃｈｏｄａｔ和Ａｌｅｘｅｉ?Ｎｉｋｏｌａｅｖｉｃｈ?Ｂａｃｈ在瑞士日內學開創(chuàng)了過氧化物酶的研宄，其中包括辣根過氧化物酶［２２］。隨著純辣根過氧酶能夠被分離出來以及鐵血紅素和糖蛋白作為辣根過氧化物酶的組分被熟知二十世紀中期的時候，有人第一次報道了以Ｈ２０２為底物的反應動力學分析ｉｗ于辣根過氧化物酶來源豐富、性質穩(wěn)定、底物非特異性、價格便宜等優(yōu)點，的應用研宄有很多，在作為有機物合成和生物轉化的催化劑、聯(lián)酶使用、化２４＿２６

【參考文獻】：
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本文編號：3371560