鎘（Cd）是環(huán)境中一種常見的有毒重金屬污染物,被廣泛應用于工業(yè)生產。Cd是高度累積的毒物,具有很長的生物半衰期,對動物機體損傷嚴重。Cd一旦被生物體吸收,能夠對腎臟,肝臟,睪丸和脾臟等器官產生強烈的毒性作用。其中腎臟是Cd蓄積的主要部位,尤其是腎皮質,Cd主要損傷近端小管上皮細胞,引起腎毒性。前期研究表明葛根素（PU）在重金屬鉛致大鼠近端小管上皮細胞損傷中有保護效果,但在Cd致腎損傷中的保護作用尚未報道。因此,本試驗以PU作為Cd中毒的保護劑,從細胞自噬、溶酶體功能和氧化應激三個方面對PU的保護效應進行探討。本試驗通過建立原代大鼠近端小管上皮細胞（rPT）體外模型,在Cd染毒期間進行不同濃度的PU共處理12 h,進行以下指標的檢測。首先,采用CCK-8法檢測細胞存活率及通過相差顯微鏡觀察處理后rPT細胞的形態(tài)學變化。結果發(fā)現濃度為100μM的PU對2.5μMCd致細胞毒性的保護效果最佳。第二,探討PU能否恢復Cd所致rPT細胞自噬抑制。免疫印跡技術檢測自噬標志蛋白LC3-Ⅱ和p62表達水平的變化,結合瞬時轉染RFP-GFP-LC3和GFP-LC3質粒進行激光共聚焦顯微鏡觀察,發(fā)現PU處... 

【文章來源】：山東農業(yè)大學山東省

【文章頁數】：72 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度葛根素對鎘致近端小管上皮細胞死亡率的影響

本研究采用了相差顯微鏡的形態(tài)學觀察，證實了 100 μM PU 對 Cd 致細胞毒性的保護效應。見圖3.2，Cd 處理導致細胞密度降低，出現細胞脫壁，皺縮及變圓等形態(tài)學異常；而 PU + Cd組可顯著改善 Cd 致細胞形態(tài)學異常；PU 單獨處理組對細胞形態(tài)無明顯影響，進一步證實了 100 μM PU 對 2.5 μM Cd 致細胞毒性有顯著的保護效應。圖 3.1 不同濃度葛根素對鎘致近端小管上皮細胞死亡率的影響Figure 3.1 Effects of Cd and/or PU on cell viabilities in rPT cells注：黑色代表鎘與不同濃度葛根素共同處理組，白色代表葛根素單獨處理組。

圖 3.3 葛根素對鎘致近端小管上皮細胞 DCFH-DA 熒光強度的影響Figure 3.3 Effects of Cd and/or PU on the fluorescence of DCFH-DAin rPT cell圖 3.4 葛根素對鎘致近端小管上皮細胞 MDA 水平的影響Figure 3.4 Effects of Cd and/or PU on the MDA levels in rPT cells

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本文編號：3339866