發(fā)布時(shí)間：2021-08-13 05:43

　　鎘（Cd）是環(huán)境中一種常見(jiàn)的有毒重金屬污染物,被廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)。Cd是高度累積的毒物,具有很長(zhǎng)的生物半衰期,對(duì)動(dòng)物機(jī)體損傷嚴(yán)重。Cd一旦被生物體吸收,能夠?qū)δI臟,肝臟,睪丸和脾臟等器官產(chǎn)生強(qiáng)烈的毒性作用。其中腎臟是Cd蓄積的主要部位,尤其是腎皮質(zhì),Cd主要損傷近端小管上皮細(xì)胞,引起腎毒性。前期研究表明葛根素（PU）在重金屬鉛致大鼠近端小管上皮細(xì)胞損傷中有保護(hù)效果,但在Cd致腎損傷中的保護(hù)作用尚未報(bào)道。因此,本試驗(yàn)以PU作為Cd中毒的保護(hù)劑,從細(xì)胞自噬、溶酶體功能和氧化應(yīng)激三個(gè)方面對(duì)PU的保護(hù)效應(yīng)進(jìn)行探討。本試驗(yàn)通過(guò)建立原代大鼠近端小管上皮細(xì)胞（rPT）體外模型,在Cd染毒期間進(jìn)行不同濃度的PU共處理12 h,進(jìn)行以下指標(biāo)的檢測(cè)。首先,采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率及通過(guò)相差顯微鏡觀察處理后rPT細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)濃度為100μM的PU對(duì)2.5μMCd致細(xì)胞毒性的保護(hù)效果最佳。第二,探討PU能否恢復(fù)Cd所致rPT細(xì)胞自噬抑制。免疫印跡技術(shù)檢測(cè)自噬標(biāo)志蛋白LC3-Ⅱ和p62表達(dá)水平的變化,結(jié)合瞬時(shí)轉(zhuǎn)染RFP-GFP-LC3和GFP-LC3質(zhì)粒進(jìn)行激光共聚焦顯微鏡觀察,發(fā)現(xiàn)PU處... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度葛根素對(duì)鎘致近端小管上皮細(xì)胞死亡率的影響

本研究采用了相差顯微鏡的形態(tài)學(xué)觀察，證實(shí)了 100 μM PU 對(duì) Cd 致細(xì)胞毒性的保護(hù)效應(yīng)。見(jiàn)圖3.2，Cd 處理導(dǎo)致細(xì)胞密度降低，出現(xiàn)細(xì)胞脫壁，皺縮及變圓等形態(tài)學(xué)異常；而 PU + Cd組可顯著改善 Cd 致細(xì)胞形態(tài)學(xué)異常；PU 單獨(dú)處理組對(duì)細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯影響，進(jìn)一步證實(shí)了 100 μM PU 對(duì) 2.5 μM Cd 致細(xì)胞毒性有顯著的保護(hù)效應(yīng)。圖 3.1 不同濃度葛根素對(duì)鎘致近端小管上皮細(xì)胞死亡率的影響Figure 3.1 Effects of Cd and/or PU on cell viabilities in rPT cells注：黑色代表鎘與不同濃度葛根素共同處理組，白色代表葛根素單獨(dú)處理組。

圖 3.3 葛根素對(duì)鎘致近端小管上皮細(xì)胞 DCFH-DA 熒光強(qiáng)度的影響Figure 3.3 Effects of Cd and/or PU on the fluorescence of DCFH-DAin rPT cell圖 3.4 葛根素對(duì)鎘致近端小管上皮細(xì)胞 MDA 水平的影響Figure 3.4 Effects of Cd and/or PU on the MDA levels in rPT cells

【參考文獻(xiàn)】：
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