二氧化硅（SiO₂）作為硅酸鹽的主要成分,廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)、房地產(chǎn)等領(lǐng)域。隨著中國現(xiàn)代化建設(shè)進(jìn)程加劇,對于二氧化硅的需求越來越大,但由于大量的開采和不合理利用,導(dǎo)致二氧化硅資源短缺并帶來了嚴(yán)重的環(huán)境污染問題,并且情況不斷惡化。針對二氧化硅傳統(tǒng)采集方法和使用的局限性,急需一種高效環(huán)保的富集二氧化硅的方法。本研究希望通過微生物學(xué)方法構(gòu)建一種表面展示硅結(jié)合蛋白Si-tag的酵母工程菌,以期建立一種節(jié)能環(huán)保且能富集SiO₂的方法。主要研究工作如下:（1）研究了Si-tag結(jié)合SiO₂的生物學(xué)功能及結(jié)合最適條件。將Si-tag與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白EGFP融合,并成功在大腸桿菌BL21（DE）中表達(dá)。將純化的融合蛋白與SiO₂顆粒共同孵育后洗滌,于熒光顯微鏡下觀察到SiO₂顆粒表面有綠色熒光,驗(yàn)證了Si-tag與SiO₂顆粒吸附的功能;同時Si-tag吸附SiO₂玻璃片的最適時間為50min,最適溫度為30°C,最適pH為8.0。（2）成功... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Si-tag在硅材料表面形成不可逆的吸附原理簡圖

圖 2.1 A：pET28a 質(zhì)粒圖譜；B：EGFP 的電泳檢測。M：DNA marker Ds 5000；1：EGF基因；C：pET28aE 的雙酶切電泳檢測。M：DNA marker Ds 5000；1：經(jīng) EcoR I 和 Sal I 雙切的 pET28aE 電泳檢測Fig.2.1 A: pET28a expression vector; B: Gel electrophoresis of EGFP. M: DNA marker Ds 500lane 1: Gel electrophoresis of EGFP gene. C: Gel electrophoresis of double digested recombinantplasmids pET28aE. M: DNA marker Ds 5000; Lane 1: Double digested recombinant plasmidspET28aE with EcoR I and Sal I.2.2.2 表達(dá)載體 pET28aSE 的構(gòu)建以 pUC57F 為模板，SE-F1：CGCGAATTCATGCACCACCACCACCACCACGC（劃線部分為 EcoR I 酶切位點(diǎn)）和 SE-R1：AGCTCCTCGCCCTTAGAAACCTTGATCGTCGTCGCACGA 為上下游引物擴(kuò)增硅結(jié)合蛋白 Si-tag，純化回收獲得目片段 a；以 pUC57C 為模板，SE-F2：TCGTGCGACGACGATCCAAGGTTTCTAAGGCGAGGAGCT 和 SE-R2：CGCGTCGACTTACTTGTAGAGCTCGTCCATACC（線部分為 Sal I 酶切位點(diǎn)）為上下游引物擴(kuò)增 EGFP，純化回收獲得目的片段 b；目的片段 a 和目的片段 b 為模板，SE-F1 和 SE-R2 為上下游引物擴(kuò)增得融合基因 SE

2.2 A：PCR 產(chǎn)物電泳檢測。M：DNA Marker (Ds 5000)；1：基因 a 的電泳檢電泳檢測；3：基因 SE 的電泳檢測；B：重組質(zhì)粒 pET28aSE 雙酶切電泳檢測er (Ds 5000)；1：重組質(zhì)粒 pET28aSE 的電泳檢測；2：經(jīng) EcoR I 和 Sal I 雙酶切的電泳檢測Fig.2.2 A: Gel electrophoresis of PCR productions. M: DNA Marker (Ds 5000); lanetrophoresis of gene a; lane 2: Gel electrophoresis of gene b; lane 3: Gel electrophoresSE; B:Gel electrophoresis of double digested recombinant plasmids pET28aSE. M: D 5000); lane 1: Gel electrophoresis of recombinant plasmids pET28aSE; lane 2: Doubrecombinant plasmids pET28aSE with EcoR I and Sal I. BL21(DE)重組菌株的陽性驗(yàn)證提取重組質(zhì)粒 pET28aE 和 pET28aSE，在蛋白表達(dá)宿主 BL21(DE)中轉(zhuǎn)后挑取單克隆進(jìn)行陽性驗(yàn)證，結(jié)果如圖 2.3。PCR 獲得的特異性條帶與相符，說明重組質(zhì)粒均已成功導(dǎo)入到了表達(dá)宿主 BL21(DE)中，并通過了目的基因準(zhǔn)確轉(zhuǎn)入到 BL21(DE)中并無突變。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]黑曲霉細(xì)胞表面展示CALB的催化特性及其應(yīng)用[D]. 李遠(yuǎn)鋒.華南理工大學(xué) 2018



本文編號：3254891