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基于RPA和ECL的生物氣溶膠核酸檢測(cè)方法研究

發(fā)布時(shí)間:2021-04-20 15:39
  氣溶膠態(tài)病原體主要包括病毒和細(xì)菌(生物氣溶膠),由于氣溶膠粒徑小常懸浮于空氣中,因此,生物氣溶膠病原體容易造成呼吸道傳染性疾病的大規(guī)模爆發(fā)。生物氣溶膠采樣對(duì)傳染性疾病的防控尤為重要,目前傳統(tǒng)的生物氣溶膠采樣方法主要有自然沉降法、沖擊法、撞擊法、采樣膜法等。采樣膜法由于采樣效率高,常被用于空氣采樣。FTA卡(Flinders Technology Associates)適用血液、口腔拭子、上皮細(xì)胞、細(xì)菌、病毒和培養(yǎng)細(xì)胞等多種樣品的保藏,可與核酸結(jié)合,維持樣品中DNA的完整性。目前尚未見(jiàn)利用FTA卡進(jìn)行生物氣溶膠病原體采集的報(bào)道。生物氣溶膠病原體常用檢測(cè)方法主要包括細(xì)胞培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)法、免疫檢測(cè)法和核酸檢測(cè)法。細(xì)胞培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)法需依靠人工操作,耗時(shí)費(fèi)力,細(xì)胞培養(yǎng)超過(guò)24 h,不能實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化快速檢測(cè)。免疫檢測(cè)法對(duì)樣本的處理相對(duì)較為簡(jiǎn)便,但是復(fù)雜樣本的檢測(cè),存在交叉污染等問(wèn)題。近年來(lái),核酸分子檢測(cè)技術(shù)在臨床醫(yī)療、疾病防控等領(lǐng)域發(fā)揮越來(lái)越重要的作用,如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、熒光原位雜交技術(shù)(FISH)、基因測(cè)序技術(shù)等。但傳統(tǒng)PCR方法由于需依靠精密的儀器以精確控制溫度的變化,并且由專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員... 

【文章來(lái)源】:華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】:72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
abstract
英文縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 常見(jiàn)的空氣氣溶膠態(tài)病原體
        1.1.1 病毒
        1.1.2 細(xì)菌
    1.2 氣溶膠病原體采樣方法研究進(jìn)展
        1.2.1 傳統(tǒng)采樣方法
        1.2.2 新型采樣技術(shù)
    1.3 FTA技術(shù)原理及應(yīng)用
    1.4 空氣氣溶膠病原體檢測(cè)方法
        1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)法
        1.4.2 免疫檢測(cè)法
        1.4.3 分子核酸檢測(cè)法
        1.4.4 其它檢測(cè)技術(shù)
        1.4.5 空氣病原體采樣檢測(cè)的難點(diǎn)
    1.5 恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)介紹及應(yīng)用
        1.5.1 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
        1.5.2 重組聚合酶擴(kuò)增技術(shù)
    1.6 電化學(xué)發(fā)光(ECL)原理及應(yīng)用
        1.6.1 湮滅式ECL
        1.6.2 共反應(yīng)物式ECL
    1.7 本課題研究意義及技術(shù)路線(xiàn)
        1.7.1 研究意義
        1.7.2 技術(shù)路線(xiàn)
第二章 基于FTA卡的生物氣溶膠采樣系統(tǒng)構(gòu)建
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 氣溶膠采樣系統(tǒng)構(gòu)建
        2.3.2 含HBV基因質(zhì)粒的大腸桿菌培養(yǎng)、質(zhì)粒提取及濃度測(cè)定
        2.3.3 FTA卡采集氣溶膠HBV質(zhì)粒及樣本洗脫
        2.3.4 引物設(shè)計(jì)
        2.3.5 FTA卡HBV質(zhì)粒樣本檢測(cè)
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 氣溶膠發(fā)生器相關(guān)特性表征
        2.4.2 FTA卡采樣效果評(píng)估
        2.4.3 FTA卡HBV質(zhì)粒檢測(cè)結(jié)果
    2.5 本章小結(jié)
第三章 基于重組聚合酶擴(kuò)增和紙基電化學(xué)發(fā)光的核酸檢測(cè)方法
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記引物
        3.3.2 重組聚合酶擴(kuò)增反應(yīng)參數(shù)優(yōu)化
        3.3.3 紙基電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)擴(kuò)增核酸
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記引物及表征
        3.4.2 重組聚合酶擴(kuò)增反應(yīng)相關(guān)條件優(yōu)化結(jié)果
        3.4.3 鏈霉親和素磁珠對(duì)電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的影響
        3.4.4 紙基電化學(xué)發(fā)光響應(yīng)特性
    3.5 本章小結(jié)
第四章 基于FTA—RPA—ECL方法檢測(cè)HBV血清樣本
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 基于FTA-RPA-ECL方法檢測(cè)HBV血清樣本
        4.3.2 基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)HBV血清樣本
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 紙基電化學(xué)發(fā)光響應(yīng)特性
        4.4.2 HBV血清樣本檢測(cè)結(jié)果分析
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
    一、結(jié)論
    二、不足與展望
    三、本論文的創(chuàng)新之處
    四、本研究應(yīng)用價(jià)值
參考文獻(xiàn)
攻讀博士/碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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[3]等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的原理及其在病原檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 高瑤,孟星宇,羅玉子,胡永浩,仇華吉.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2017(08)
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[10]軍團(tuán)菌感染實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)與預(yù)防新進(jìn)展[J]. 魏賀璽.  醫(yī)療裝備. 2016(08)

博士論文
[1]一種新型核酸恒溫?cái)U(kuò)增方法的研究及其在現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)中的應(yīng)用[D]. 董德榮.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2016

碩士論文
[1]基于碳納米材料電化學(xué)發(fā)光生物傳感器的研究與應(yīng)用[D]. 吳魯?shù)?濟(jì)南大學(xué) 2016



本文編號(hào):3149955

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