假單胞菌NyZ12降解環(huán)己胺初始步驟冗余機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2021-01-22 10:05
環(huán)己胺作為一種重要的精細(xì)化工中間體,給大氣和水體帶來(lái)了嚴(yán)重的污染,該化合物還具有一定的致癌性。Pseudomonas plecoglossicida NyZ12是一株能利用環(huán)己胺為唯一碳源、氮源和能源生長(zhǎng)的菌株,其環(huán)己胺代謝的分子生物學(xué)機(jī)理仍未闡述清楚。本實(shí)驗(yàn)室在前期研究假單胞菌NyZ12中環(huán)己胺的降解途徑中,將amo2631克隆到廣宿主表達(dá)載體pVLT33,在假單胞菌PaW340中表達(dá)和純化,最終成功得到amo2631所表達(dá)蛋白,在其轉(zhuǎn)化的過(guò)程中,也成功檢測(cè)到產(chǎn)物環(huán)己酮的生成,驗(yàn)證了該基因的功能。然而,采用無(wú)痕敲除技術(shù)敲除了amo2631后,突變體仍然能夠以環(huán)己胺為唯一碳氮源良好的生長(zhǎng),僅生長(zhǎng)速率受到了一定的影響,表明了該菌株在環(huán)己胺的初始代謝步驟中存在代謝冗余機(jī)制,即可能含有兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因共同完成環(huán)己胺到環(huán)己酮的代謝過(guò)程。本論文的目的在于探究環(huán)己胺的初始代謝步驟的冗余基因,充分揭示假單胞菌NyZ12代謝環(huán)己胺的分子機(jī)理。為了達(dá)到該目的,采用了生物信息學(xué)分析、基因組建庫(kù)篩選和轉(zhuǎn)座子插入突變體庫(kù)三種方式篩選環(huán)己胺降解相關(guān)基因,得到了基因 orf671、orf5356、orf566...
【文章來(lái)源】：武漢輕工大學(xué)湖北省
【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖３．．?１－１?Ｋ５／ＸＫ６引物對(duì)鑒定單交換ＷＨＡ５５３９??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００；?１￣３：?Ｋ５／ＸＫ６?引物對(duì)擴(kuò)增片段??
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Pseudomonas plecoglossicida NyZ12基因無(wú)痕敲除方法的建立[J]. 毛靈琪,李存治,閆達(dá)中. 生物技術(shù)通報(bào). 2016(04)
[2]水體中基因組提取方法的比較及水體中銅綠假單胞菌檢測(cè)技術(shù)的研究[J]. 張淑紅,許文濤,石慧,程國(guó)靈,羅云波,黃昆侖. 食品工業(yè)科技. 2012(09)
[3]2,4-二硝基苯肼顯色法測(cè)定環(huán)己酮含量[J]. 李凌凌,呂早生,黃樂(lè)繁,侯亞利,庹保華,劉郭飛. 化學(xué)與生物工程. 2010(05)
碩士論文
[1]環(huán)己胺降解菌NyZ12胺氧化酶基因敲除突變體的構(gòu)建及特性研究[D]. 毛靈琪.武漢輕工大學(xué) 2016
[2]假單胞菌NyZ12中環(huán)己胺氧化酶基因的克隆、表達(dá)與純化[D]. 李存治.武漢輕工大學(xué) 2016
本文編號(hào)：2993036
【文章來(lái)源】：武漢輕工大學(xué)湖北省
【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖３．．?１－１?Ｋ５／ＸＫ６引物對(duì)鑒定單交換ＷＨＡ５５３９??Ｍ：?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００；?１￣３：?Ｋ５／ＸＫ６?引物對(duì)擴(kuò)增片段??
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Pseudomonas plecoglossicida NyZ12基因無(wú)痕敲除方法的建立[J]. 毛靈琪,李存治,閆達(dá)中. 生物技術(shù)通報(bào). 2016(04)
[2]水體中基因組提取方法的比較及水體中銅綠假單胞菌檢測(cè)技術(shù)的研究[J]. 張淑紅,許文濤,石慧,程國(guó)靈,羅云波,黃昆侖. 食品工業(yè)科技. 2012(09)
[3]2,4-二硝基苯肼顯色法測(cè)定環(huán)己酮含量[J]. 李凌凌,呂早生,黃樂(lè)繁,侯亞利,庹保華,劉郭飛. 化學(xué)與生物工程. 2010(05)
碩士論文
[1]環(huán)己胺降解菌NyZ12胺氧化酶基因敲除突變體的構(gòu)建及特性研究[D]. 毛靈琪.武漢輕工大學(xué) 2016
[2]假單胞菌NyZ12中環(huán)己胺氧化酶基因的克隆、表達(dá)與純化[D]. 李存治.武漢輕工大學(xué) 2016
本文編號(hào)：2993036
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