磷酸酯酶可使含磷物質(zhì)中的磷酯鍵水解,釋放磷酸基團(tuán),生成相應(yīng)的糖、醇及酚等,因而普遍應(yīng)用于分子、醫(yī)藥和工業(yè)領(lǐng)域。對(duì)于微生物溶磷能力的研究多集中于有機(jī)酸類,而對(duì)磷酸酯酶的溶磷作用及磷酸酯酶降解農(nóng)藥的研究不多,論文從篩選高磷酸酯酶活性菌株出發(fā),對(duì)其磷酸酯酶基因進(jìn)行克隆異源表達(dá),研究其酶學(xué)特性、其溶磷能力和在有機(jī)磷農(nóng)藥降解方面的應(yīng)用,具有一定意義和價(jià)值。論文的主要研究結(jié)果如下:（1）從貴州磷礦上生長(zhǎng)的植物根際,分離得到118株菌株,用磷酸苯二鈉比色法篩選出7株具有磷酸酯酶活性的菌株,復(fù)篩得到一株高產(chǎn)磷酸酯酶的菌株YP6,通過(guò)對(duì)其16S rRNA進(jìn)行鑒定,并命名為Bacillus amyloliquefaciens YP6;（2）根據(jù)B.amyloliquefaciens全基因組序列預(yù)測(cè)了B.amyloliquefaciens YP6中5個(gè)磷酸酯酶的基因,分別命名為ap1（684 bp）,ap2（1752 bp）,ap3（1380 bp）,ap4（1740 bp）和ap5（489 bp）;對(duì)5個(gè)基因克隆誘導(dǎo)表達(dá)之后進(jìn)行純化,酶活驗(yàn)證后AP2、AP3、AP4和AP5均表現(xiàn)出磷酸酯酶酶活;其中AP3... 

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磷酸酯酶的作用機(jī)制Fig.1-1Themechanismofphosphatases

圖 1-2 OPs 的結(jié)構(gòu)式Fig. 1-2 The structural formula of OPs早在 1973 年，科學(xué)家首次報(bào)道 OP 降解菌 Flavobacterium sp.[75]。Chen 等以微生土壤中的殘留丁草胺發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)的毛霉可將其降解，青霉和曲霉則能夠大量吸胺[76]。隨即，多種具有降解農(nóng)藥能力的微生物被發(fā)現(xiàn)，OP 降解菌主要為假單胞真菌[78]。由于毒死蜱應(yīng)用廣，對(duì) OP 降解的研究，主要集中于對(duì)毒死蜱降解的研究ho 等研究了乳酸菌對(duì)毒死蜱的降解[79]；Anwar 等發(fā)現(xiàn) Bacillus pumilus C2A1 對(duì)毒降解作用[80]；Ghanem 等人則發(fā)現(xiàn) Klebsiella sp.對(duì)毒死蜱有高效降解能力和高耐]。目前，酶解農(nóng)藥已成研究熱點(diǎn)。細(xì)菌降解 OP 的實(shí)質(zhì)是由于酶促反應(yīng)，通過(guò)體內(nèi)酶，斷裂 OP 中的磷酯鍵來(lái)達(dá)到目的。Munnecke 和 Hsieh 在 1975 年發(fā)現(xiàn)，磷酯酶具有水解對(duì)硫磷的作用[82]。近來(lái)研究表明，OP 水解酶主要為磷酸酶[83]和羧酸]。來(lái)源于 Spirulina platensis 中的 AP 可將毒死蜱降解為 3,5,6-三氯吡啶-2-酚[85]。OP 因其具有磷酯鍵，決定了磷酯鍵水解酶對(duì)其降解的廣譜性，所以一種 OP 降解解多種 OP[86]。高明華等發(fā)現(xiàn)，環(huán)境中 pH 越高，OP 被降解越快[87]。AP 因其嗜

中的殘留丁草胺發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)的毛霉可將其降解，青霉和曲霉則能夠]。隨即，多種具有降解農(nóng)藥能力的微生物被發(fā)現(xiàn)，OP 降解菌主要為[78]。由于毒死蜱應(yīng)用廣，對(duì) OP 降解的研究，主要集中于對(duì)毒死蜱降研究了乳酸菌對(duì)毒死蜱的降解[79]；Anwar 等發(fā)現(xiàn) Bacillus pumilus C2作用[80]；Ghanem 等人則發(fā)現(xiàn) Klebsiella sp.對(duì)毒死蜱有高效降解能力，酶解農(nóng)藥已成研究熱點(diǎn)。細(xì)菌降解 OP 的實(shí)質(zhì)是由于酶促反應(yīng)，通斷裂 OP 中的磷酯鍵來(lái)達(dá)到目的。Munnecke 和 Hsieh 在 1975 年發(fā)現(xiàn)有水解對(duì)硫磷的作用[82]。近來(lái)研究表明，OP 水解酶主要為磷酸酶[83源于 Spirulina platensis 中的 AP 可將毒死蜱降解為 3,5,6-三氯吡啶-2其具有磷酯鍵，決定了磷酯鍵水解酶對(duì)其降解的廣譜性，所以一種 種 OP[86]。高明華等發(fā)現(xiàn)，環(huán)境中 pH 越高，OP 被降解越快[87]。AP被研究人員所關(guān)注。有機(jī)磷農(nóng)藥降解機(jī)制如圖 1-3 所示，AP 通過(guò)水 1-3)，使之生成無(wú)毒或低毒產(chǎn)物，達(dá)到清理環(huán)境的效果[71]。因此，境的監(jiān)測(cè)，還是一種非常有效的降解環(huán)境污染物的酶。


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