本研究采用分段鹽析法和柱層析法從巢湖新鮮藍藻中提取純化藻藍蛋白。首先,使用硫酸銨、檸檬酸三銨、檸檬酸鈉和硫酸鈉對藻藍蛋白粗提液進行兩步分段鹽析純化,并利用紫外-可見分光光度法對藻藍蛋白溶液進行純度及回收率分析,以此確定了硫酸銨、檸檬酸三銨、檸檬酸鈉和硫酸鈉的最佳用量。其結果為:硫酸銨、檸檬酸三銨、檸檬酸鈉和硫酸鈉在第一和第二鹽析過程中的最佳摩爾濃度分別為:硫酸銨(NH_4)_2SO_4為1.0 mol/L和1.7 mol/L;檸檬酸三銨C_6H_(17)N_3O_7為0.7mol/L和1.3 mol/L;檸檬酸鈉C_6H_5Na_3O_7為0.5 mol/L和0.9 mol/L;檸檬酸鈉C_6H_(17)N_3O7為1.0 mol/L和1.3 mol/表示硫酸鈉Na_2SO_4。經(jīng)過兩步分段鹽析,發(fā)現(xiàn)隨著無機鹽摩爾濃度的增高,雜質去除量增大到一定程度后會去除藻藍蛋白,故純度和收率都先提高再降低。最優(yōu)結果表明,使用(NH_4)_2SO_4純化后,藻藍蛋白純度達2.0以上,藻藍蛋白回收率較高。為了進一步提高藻藍蛋白的純度,用(NH_4)_2SO_4進行第二次鹽析后,利用離子交換色譜法進一步純化藻藍蛋白,研究了pH、離子強度、洗脫速度與進樣濃度對純化效果的影響。其最佳條件為:纖維素A-500,洗脫液pH值7.0,樣品濃度1-2 mol/L,加樣速度2cm/min,洗脫液NaCl濃度0.25mol/L,最終得到純度在4.0以上的試劑級藻藍蛋白。
【學位單位】：合肥工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：Q51;X524
【文章目錄】：
Acknowledgement
ABSTRACT
摘要
Chapter 1 Introduction
    1.1 Background information
        1.1.1 Location of Chaohu Lake
        1.1.2 Overview of Chaohu Lake Basin
        1.1.3 Analysis of eutrophication status of Chaohu Lake
        1.1.4 Current status of cyanobacteria resource utilization in Chaohu Lake
    1.2 Research status of phycobiliprotein purification at home and abroad
        1.2.1 Concepts related to purification of Phycobiliprotein
        1.2.2 Research status of phycobiliprotein purification
Chapter 2 Materials and Methods
    2.1 Materials
        2.1.1 Organism and culture conditions
        2.1.2 Laboratory equipment
        2.1.3 Experiment reagents and materials
    2.2 Methods
        2.2.1 Phycobiliprotein extraction and purification
    2.3 Main analysis methods
Chapter 3 Results and analysis
    3.1 Ammonium sulfate precipitation
        3.1.1 One step salting out
        3.1.2 Two-step salting out
    3.2 Triammonium citrate precipitation
        3.2.1 One-step salting out
        3.2.2 Two-step of salting out
    3.3 Sodium citrate precipitation
        3.3.1 One-step of salting out
        3.3.2 Two-step of salting out
    3.4 Sodium sulfate precipitation
        3.4.1 One-step of salting out
        3.4.2 Two-step of salting out
    3.5 Analysis
Chapter 4 Purification of Phycocyanin by ion Exchange Chromatography
    4.1 Literature review
    4.2 Materials and methods
        4.2.1 Experimental Materials and Instruments
        4.2.2 IEC precipitation methods
    4.3 Selection of Fillers for Ion Exchange Chromatography
    4.4 Results and analysis
        4.4.1 Effect of eluent p H on Purification of phycocyanin by CellufineA-500
        4.4.2 Effect of ionic strength on purification of phycocyanin by columnchromatography
        4.4.3 Effect of elution rate on the purification of phycocyanin by columnchromatography
        4.4.4 Effect of Sample Concentration on Purification of Phycocyanin byColumn Chromatography
    4.5 Response Surface Experiment of Cellufine A-500 ColumnChromatography
Chapter 5 Conclusion And Prospect
    5.1 Conclusion
    5.2 Prospect
References
List of Academic Activities and Achievements during the Degree

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本文編號：2852692