為了篩選出一株高效的菲降解菌株,采取東北白城地區(qū)受原油污染的土壤,以菲作為唯一的碳源,利用傳統(tǒng)培養(yǎng)的方式進(jìn)行篩選。通過(guò)形態(tài)學(xué)的方法進(jìn)行電鏡掃描檢測(cè)出菌落形態(tài)為光滑的雙球連接成的短桿狀,進(jìn)一步通過(guò)16S rRNA測(cè)序結(jié)果顯示為不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter sp.),命名為AC;探索菌株AC的生長(zhǎng)(OD_(600))與菌落數(shù)(CFU)的形成,以及菌株AC在不同條件下的生長(zhǎng)狀況,顯示菌株AC在30℃、pH 7.0的條件下具有良好的生長(zhǎng)狀況。研究發(fā)現(xiàn)菲在濃度為20 mg·L~(-1)、接種量為0.1的條件下培養(yǎng)7天,菌株AC的降解率達(dá)到了80%。結(jié)果表明該菌株為高效降解菌株,同時(shí)也在生物修復(fù)土壤方面具有良好的應(yīng)用前景。
【部分圖文】：

本研究采取受原油污染的土壤，以菲為唯一碳源，加入無(wú)機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中進(jìn)行富集培養(yǎng)，采用傳統(tǒng)培養(yǎng)的方式，篩選出一株高效菲降解菌株，命名為AC；圖1為菌株的形態(tài)鑒定圖。圖1(a）為菌株AC在LB固體培養(yǎng)基中的菌落形態(tài)，圖1(b）為菌株AC在光學(xué)顯微鏡下的形態(tài)特征，圖1(c）為菌株AC電鏡下的菌落形態(tài)。結(jié)果表明該菌落為圓形，表面光滑，經(jīng)光學(xué)顯微鏡檢測(cè)該菌株為革蘭氏陰性菌，經(jīng)電鏡掃描菌落形態(tài)為雙球連接成的短桿狀。使用基因組DNA做模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，加入測(cè)序反應(yīng)體系進(jìn)行PCR，測(cè)序儀得到的結(jié)果與Gen Bank數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列進(jìn)行比對(duì)，如圖2所示。菌株AC與Acinetobacter beijerinckii strain CP9的比對(duì)率相似性達(dá)到了99%，說(shuō)明該菌株為不動(dòng)桿菌屬，利用鄰接法創(chuàng)建菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹，命名為Acinetobacter sp.AC(NCBI登錄號(hào)為MK908403）。

使用基因組DNA做模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，加入測(cè)序反應(yīng)體系進(jìn)行PCR，測(cè)序儀得到的結(jié)果與Gen Bank數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列進(jìn)行比對(duì)，如圖2所示。菌株AC與Acinetobacter beijerinckii strain CP9的比對(duì)率相似性達(dá)到了99%，說(shuō)明該菌株為不動(dòng)桿菌屬，利用鄰接法創(chuàng)建菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹，命名為Acinetobacter sp.AC(NCBI登錄號(hào)為MK908403）。2.2 菌落總數(shù)的檢測(cè)

挑取單菌落在LB中培養(yǎng)12～16 h，測(cè)量其OD600，控制在1.0左右，加入到含有菲的無(wú)機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中，在30℃下進(jìn)行培養(yǎng)。每隔12 h進(jìn)行測(cè)量OD600，同時(shí)涂布在含有菲的固體培養(yǎng)基中，稀釋不同的濃度。如圖3所示，OD600與細(xì)菌總數(shù)（CFU）相應(yīng)變化，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，菌株AC在48 h達(dá)到其對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在96 h后趨于衰亡期，OD600與CFU的值也逐漸的降低。2.3 菌株降解菲的工藝條件優(yōu)化及降解能力的檢測(cè)
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