【摘要】：隨著抗生素在人類臨床醫(yī)療、畜牧及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的濫用,致使大量具有生物活性的抗生素進入環(huán)境中,細菌在巨大的環(huán)境選擇壓力下通過基因突變或捕獲外源耐藥基因來增強自身耐藥能力,而整合子作為一種基因元件,通常與細菌的耐藥性有關。本研究首先通過自制生物載體掛膜裝置探究了細菌整合子在脅迫因子作用下隨時間的變化規(guī)律,結果表明較高濃度的四環(huán)素和氯化鉻脅迫會明顯影響生物膜細菌中一類整合子的豐度,其豐度都顯示了隨時間逐漸升高又逐漸降低的趨勢,一定濃度的次氯酸鈉脅迫也會使一類整合子的豐度升高。表明擁有一類整合子的細菌在一定的脅迫作用下有更高的生存率。三類整合子豐度在各類脅迫下大致呈現(xiàn)出逐漸降低的趨勢,表明三類整合子不是細菌抵御四環(huán)素、重金屬脅迫的主要機制,本實驗未檢測到二類整合子。另外,為探究自然界中細菌耐藥性與整合子的關系,選擇青島第二、第六海水浴場為研究對象并采集樣本,利用抗性篩選平板從分離自海水及沙灘樣本的271株菌中篩選出60(22.1%)株多重耐藥菌(multidrug-resistant organism,MDRO),藥敏試驗結果顯示60株MDRO對15種藥敏紙片的耐藥率在31.6%~81.7%之間,其中對磺胺類、氨基糖苷類和磷霉素類抗生素的耐藥率較高,對鏈霉素耐藥率最高(81.7%);60株MDRO分屬于24個菌屬,其中寡養(yǎng)單胞菌屬占比最大(16%)。經(jīng)過對耐藥數(shù)據(jù)的分析,發(fā)現(xiàn)第二、第六海水浴場的耐藥情況無顯著差異,但海水中的耐藥情況比沙灘嚴重,海水浴場不同地點細菌的耐藥率與游客的密集程度有關。通過對特定耐藥基因與耐藥表型的相關性分析,發(fā)現(xiàn)MDRO對四環(huán)素、鏈霉素的耐藥性與其相關耐藥基因的檢出率顯著相關。60株MDRO中檢測到11株一類整合子陽性菌株和3株三類整合子陽性菌株,一類整合子可變區(qū)陽性菌株基因盒排列包括4種,分別為:aadA1、aadA5-orfA、dfrA1-orfA-aadA1、dfrA12,未檢測到三類整合子的基因盒。MDRO的整合子檢出率較低,說明整合子介導的耐藥性不是青島海水浴場多重帶藥菌的主要耐藥機制。在本研究設置的脅迫因子影響下,濾料生物膜中的一類整合子豐度出現(xiàn)了先上升后下降的明顯規(guī)律。另外,實驗結果顯示青島海水浴場的MDRO污染嚴重,且多樣性豐富,對常見抗生素表現(xiàn)出較強的耐藥性,但整合子的檢出率較低,說明整合子不是青島海水浴場中耐藥菌主要的耐藥機制。
【學位授予單位】：沈陽化工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：X55
【圖文】：

整合子結構

實驗裝置與濾料Figure2-1Experimentaldeviceandfiltermaterial

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