【摘要】：隨著抗生素在人類臨床醫(yī)療、畜牧及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的濫用,致使大量具有生物活性的抗生素進(jìn)入環(huán)境中,細(xì)菌在巨大的環(huán)境選擇壓力下通過(guò)基因突變或捕獲外源耐藥基因來(lái)增強(qiáng)自身耐藥能力,而整合子作為一種基因元件,通常與細(xì)菌的耐藥性有關(guān)。本研究首先通過(guò)自制生物載體掛膜裝置探究了細(xì)菌整合子在脅迫因子作用下隨時(shí)間的變化規(guī)律,結(jié)果表明較高濃度的四環(huán)素和氯化鉻脅迫會(huì)明顯影響生物膜細(xì)菌中一類整合子的豐度,其豐度都顯示了隨時(shí)間逐漸升高又逐漸降低的趨勢(shì),一定濃度的次氯酸鈉脅迫也會(huì)使一類整合子的豐度升高。表明擁有一類整合子的細(xì)菌在一定的脅迫作用下有更高的生存率。三類整合子豐度在各類脅迫下大致呈現(xiàn)出逐漸降低的趨勢(shì),表明三類整合子不是細(xì)菌抵御四環(huán)素、重金屬脅迫的主要機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)未檢測(cè)到二類整合子。另外,為探究自然界中細(xì)菌耐藥性與整合子的關(guān)系,選擇青島第二、第六海水浴場(chǎng)為研究對(duì)象并采集樣本,利用抗性篩選平板從分離自海水及沙灘樣本的271株菌中篩選出60(22.1%)株多重耐藥菌(multidrug-resistant organism,MDRO),藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示60株MDRO對(duì)15種藥敏紙片的耐藥率在31.6%~81.7%之間,其中對(duì)磺胺類、氨基糖苷類和磷霉素類抗生素的耐藥率較高,對(duì)鏈霉素耐藥率最高(81.7%);60株MDRO分屬于24個(gè)菌屬,其中寡養(yǎng)單胞菌屬占比最大(16%)。經(jīng)過(guò)對(duì)耐藥數(shù)據(jù)的分析,發(fā)現(xiàn)第二、第六海水浴場(chǎng)的耐藥情況無(wú)顯著差異,但海水中的耐藥情況比沙灘嚴(yán)重,海水浴場(chǎng)不同地點(diǎn)細(xì)菌的耐藥率與游客的密集程度有關(guān)。通過(guò)對(duì)特定耐藥基因與耐藥表型的相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)MDRO對(duì)四環(huán)素、鏈霉素的耐藥性與其相關(guān)耐藥基因的檢出率顯著相關(guān)。60株MDRO中檢測(cè)到11株一類整合子陽(yáng)性菌株和3株三類整合子陽(yáng)性菌株,一類整合子可變區(qū)陽(yáng)性菌株基因盒排列包括4種,分別為:aadA1、aadA5-orfA、dfrA1-orfA-aadA1、dfrA12,未檢測(cè)到三類整合子的基因盒。MDRO的整合子檢出率較低,說(shuō)明整合子介導(dǎo)的耐藥性不是青島海水浴場(chǎng)多重帶藥菌的主要耐藥機(jī)制。在本研究設(shè)置的脅迫因子影響下,濾料生物膜中的一類整合子豐度出現(xiàn)了先上升后下降的明顯規(guī)律。另外,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示青島海水浴場(chǎng)的MDRO污染嚴(yán)重,且多樣性豐富,對(duì)常見抗生素表現(xiàn)出較強(qiáng)的耐藥性,但整合子的檢出率較低,說(shuō)明整合子不是青島海水浴場(chǎng)中耐藥菌主要的耐藥機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)化工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：X55
【圖文】：

整合子結(jié)構(gòu)

實(shí)驗(yàn)裝置與濾料Figure2-1Experimentaldeviceandfiltermaterial

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