【摘要】：核酸適配體因具有高度特異性和專(zhuān)一性以及穩(wěn)定性好、易于化學(xué)修飾、目標(biāo)配體范圍廣等優(yōu)點(diǎn),廣泛應(yīng)用于環(huán)境檢測(cè)及食品安全分析。本文通過(guò)“sol-gel”法制備巰基有機(jī)-無(wú)機(jī)硅膠雜化整體柱,以納米金為連接媒介,制備了具有超高適配體覆蓋密度的有機(jī)-無(wú)機(jī)硅膠雜化親和色譜柱,實(shí)現(xiàn)了對(duì)赭曲霉毒素A的高靈敏度識(shí)別與檢測(cè)。主要內(nèi)容如下:第一章,文獻(xiàn)綜述。概述了毛細(xì)管整體柱的類(lèi)型和研究進(jìn)展,介紹納米金整體柱的研究進(jìn)展與應(yīng)用,重點(diǎn)對(duì)核酸適配體的特點(diǎn)以及核酸適配體親和整體柱的研究進(jìn)展與應(yīng)用進(jìn)行的概述,并且對(duì)本論文的研究?jī)?nèi)容及意義進(jìn)行介紹。第二章,以四甲氧基硅烷(TMOS)和巰丙基三甲氧基硅烷(MPTMS)作為硅烷化試劑,制備了poly(TMOS-co-MPTMS)雜化硅膠毛細(xì)管整體柱;制備了不同尺寸大小的納米金,通過(guò)柱后衍生納米金和巰基核酸適配體,制備了Apt@AuNPs@poly(TMOS-co-MPTMS)雜化親和整體柱。實(shí)驗(yàn)考察了所制備的雜化整體柱的組成、形貌結(jié)構(gòu)、能譜分析以及紅外光譜和機(jī)械穩(wěn)定性表征。表征了核酸適配體在雜化整體柱上的修飾量,系統(tǒng)考察了基質(zhì)柱滲透性及納米金粒徑尺寸對(duì)Apt@AuNPs@ poly(TMOS-co-MPTMS)雜化親和柱納米金修飾量及對(duì)目標(biāo)物OTA富集、洗脫效果的影響。所制備的Apt@AuNPs@poly(TMOS-co-MPTMS)新型雜化親和整體柱具有高適配體覆蓋密度,可達(dá)3,494pmol/uL、穩(wěn)定性強(qiáng)。第三章,基于AuNPs@poly(TMOS-co-MPTMS)柱,開(kāi)展了核酸適配體雜化親和整體柱對(duì)目標(biāo)物OTA親和性能研究。應(yīng)用核酸適配體對(duì)OTA的特異選擇性及高親和作用力,考察了Apt@AuNPs@poly(TMOS-co-MPTMS)柱對(duì)OTA的識(shí)別作用;考察了所制備的親和柱對(duì)目標(biāo)物OTA的回收率,并優(yōu)化了洗脫參數(shù);考察了目標(biāo)物OTA在親和柱上的負(fù)載量以及親和整體柱對(duì)目標(biāo)物OTA的檢測(cè)限,應(yīng)用于啤酒等酒類(lèi)樣品中OTA的分析、檢測(cè)以及雜化親和整體柱的使用壽命測(cè)試。結(jié)果表明,所制備的Apt@Au@poly(TMOS-co-MPTMS)雜化親和整體柱對(duì)OTA具有高特異識(shí)別能力,穩(wěn)定性較好,使用壽命大于3個(gè)月,對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中的OTA回收率可達(dá)92.3±2.1%和92.5±0.5%(n=3),OTA負(fù)載量為9.75ng,未經(jīng)大體積進(jìn)樣富集時(shí)檢測(cè)限達(dá)到0.025 ng/mL。在加標(biāo)酒樣中雜化親和整體柱對(duì)目標(biāo)物OTA具有較高特異識(shí)別能力,在0.5-5 ng/mL的OTA加標(biāo)濃度范圍,啤酒樣品中OTA的平均回收率在89.6±3.7%-91.8±1.6%之間;葡萄酒樣品中OTA平均回收率在90.3±2.8-91.6±2.7%之間,回收率高。
【圖文】：

適配體需要通過(guò)一定的固載方式鍵合到某種載體上，常見(jiàn)的的載體有瓊脂逡逑、微球、芯片、納米粒子及毛細(xì)管整體柱材料等。整體柱柱具有通孔和微孔網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)；逡逑質(zhì)速率快；吸附容量高；良好滲透性，流通阻力�。恢苽浜�(jiǎn)單，無(wú)需柱塞。結(jié)合核酸適逡逑體與毛細(xì)管整體柱的優(yōu)勢(shì)制備出的高效新型的親和色譜固定相材料，在富集、純化小分逡逑化合物、蛋白質(zhì)等發(fā)揮重要作用，因而核酸適配體鍵合整體柱在色譜分析領(lǐng)域倍受研究逡逑的關(guān)注。目前，適配體在毛細(xì)管整體柱材料上鍵合技術(shù)主要包括：非化學(xué)鍵合技術(shù)［？７１］逡逑化學(xué)鍵合技術(shù)兩種。逡逑．２．１非化學(xué)鍵合技術(shù)逡逑非化學(xué)鍵合技術(shù)是基于親和作用力來(lái)實(shí)現(xiàn)適配體與色譜固定相載體的結(jié)合。目前，使逡逑該技術(shù)來(lái)制備核酸適配體整體柱較為成熟的是生物素－鏈霉親和素法。逡逑鏈霉親和素是一種四聚體蛋白，一分子的鏈霉親和素可以與四分子的生物素高度特異逡逑的結(jié)合。Ｌｉｕ等［７２］研制了一類(lèi)親水性、光穩(wěn)定性、生物相容性和高熒光鏈霉親和素功能逡逑二氧化硅納米粒子，制備過(guò)程如圖１－４所示，鏈霉親和素功能化二氧化硅納米粒子的研逡逑利用經(jīng)典連鎖技術(shù)對(duì)反相蛋白質(zhì)微陣列進(jìn)行檢測(cè)。該納米粒子探針具有熒光性能較好、逡逑測(cè)靈敏度高線性范圍寬、檢測(cè)限低等優(yōu)點(diǎn)。逡逑？邐＇邐廠邐ｒ￣￣￣ｚ．—）逡逑

逑的覆蓋密度，可達(dá)５６８邋ｐｍｏｌ／＾Ｌ。Ｐｉｃｈｏｎ等ｔ７５］同樣借用戊二醛為連接媒介，成功制備了邋ＯＴＡ逡逑適配體功能化的雜化整體柱，如圖１－６－Ｂ所示，實(shí)現(xiàn)了對(duì)目標(biāo)物赭曲霉毒素Ａ特異性富集，逡逑平均回收率為８０％，，負(fù)載量可達(dá)５ｎｇ，并應(yīng)用于啤酒實(shí)際樣品中ＯＴＡ的分析檢測(cè)。如圖逡逑１－６＿Ｃ所示，Ｗａｎｇ等［％通過(guò)乙二胺在整體柱表面修飾上氨基，然后以戊二醛為連接媒介，逡逑制備抗溶菌酶ＤＮＡ適配體鍵合的有機(jī)聚合親和整體柱，實(shí)現(xiàn)從雞蛋清中選擇性提取溶菌逡逑酶，具有較好的重現(xiàn)性，同時(shí)適配體的覆蓋密度為２９０邋ｐｍｏｌ／＾Ｌ。但這些制備方法涉及多個(gè)逡逑步驟，需要整體柱進(jìn)行反復(fù)修飾鍵合，以確保親和材料上適配體的覆蓋密度，這是相對(duì)耗逡逑時(shí)的。逡逑—ＯＨ逡逑Ａ邐一0Ｈ邋ＮＭ２邋ｌ￡％ｇａｔｔｉｒｒｆｄｒｔｊｄｅ邋’邋ｎ＾＾ＣＨＯ邐＿逡逑”ＮＭ２邐＾ＣＨＯ邋ＰＢ４＾00ｍＭ邋Ｎ？ＣＨ２０？ｄＭ邋ＫＣｉ逡逑一０？邐－ＯＨ逡逑Ｈｙｂｒｉｄ邋ｓｉｌｉｃａ邋ｍ
【學(xué)位授予單位】：福州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：X836;O652.6

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本文編號(hào)：2699643