【摘要】：氨氣是一種具有刺激性氣味的有害氣體,通�？梢栽诩s化養(yǎng)雞場雞舍內(nèi)檢測到較高濃度的氨氣。盡管氨氣的毒性是眾所周知的,但氨氣中毒(特別是脾臟等免疫器官)的機(jī)制研究很少。為了評價氨氣對雞的免疫毒性和研究氨氣誘導(dǎo)的雞脾臟炎癥損傷以及細(xì)胞自噬的機(jī)制,本研究建立了雞氨氣中毒模型,采用qRT-PCR和western blot分別檢測了三個水平(miRNA、mRNA和蛋白)上的變化。通過對雞脾臟組織顯微以及亞顯微結(jié)構(gòu)的觀察和對氧化應(yīng)激和能量代謝相關(guān)因子、Th1/Th2平衡相關(guān)細(xì)胞因子、炎癥相關(guān)因子、自噬相關(guān)因子以及熱休克蛋白水平的檢測,探討氨氣引起的肉雞氧化應(yīng)激、能量代謝紊亂、炎癥損傷、細(xì)胞自噬和熱休克蛋白代償性升高的機(jī)制。135只1日齡商品代羅斯308肉雞隨機(jī)分成對照組、中氨組和高氨組,每組45只雞。每組肉雞自由采食標(biāo)準(zhǔn)商品日糧和飲用水,其中對照組氨氣濃度1-6周為≤5 mg/m~3;中氨組氨氣濃度1-3周為10±1 mg/m~3,4-6周為15±1 mg/m~3;高氨組氨氣濃度1-3周為20±1 mg/m~3,4-6周為45±1 mg/m~3。在試驗的第14天、28天和42天,分別從每組隨機(jī)取15只雞處死,采集脾臟組織樣品。分別檢測:脾臟組織的顯微結(jié)構(gòu)和亞顯微結(jié)構(gòu),氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)(T-AOC、GSH-Px、CAT和SOD活性,GSH、MDA和H_2O_2含量),能量代謝相關(guān)指標(biāo)(Na~+-K~+ATPase、Ca~(2+)ATPase、Mg~(2+)ATPase和Ca~(2+)-Mg~(2+)ATPase活性),miRNA(miR-133a、miR-6615和miR-202-5p的水平)及其分別的靶基因(LOC101747543、SMAD7和PTEN的mRNA水平),Th1/Th2平衡相關(guān)細(xì)胞因子(IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ的mRNA水平),炎癥相關(guān)因子(NO含量,iNOS活性,iNOS、HO-1、NLRP3炎癥小體、NF-κB、TNF-α、COX-2和PTGEs的mRNA水平以及iNOS、HO-1和NF-κB的蛋白水平)、自噬相關(guān)因子(LC3-I、LC3-II、p62、PTEN、p53、PI3K、AKT、mTOR、Beclin1、Dynein、ATF3、ATG3、ATG5、ATG7、ATG10、ATG12、ATG14和ATG16L1的mRNA水平和LC3-I、LC3-II、PI3K、AKT和mTOR的蛋白水平)以及熱休克蛋白(HSP27、HSP40、HSP60、HSP70和HSP90的mRNA水平和HSP60、HSP70和HSP90的蛋白水平)。試驗結(jié)果顯示:(1)氨氣中毒引起雞脾臟組織顯微結(jié)構(gòu)和亞顯微結(jié)構(gòu)改變,引起了雞脾臟組織炎癥損傷和細(xì)胞自噬。(2)氨氣中毒引起雞脾臟組織T-AOC、GSH-Px、CAT和SOD活性以及GSH含量降低,MDA和H_2O_2含量升高,導(dǎo)致雞脾臟組織發(fā)生氧化應(yīng)激。(3)氨氣中毒引起肉雞脾臟組織Na~+-K~+ATPase、Ca~(2+)ATPase、Mg~(2+)ATPase和Ca~(2+)-Mg~(2+)ATPase活性降低,導(dǎo)致雞脾臟組織發(fā)生能量代謝紊亂。(4)氨氣中毒升高了雞脾臟組織miR-133a、miR-6615和miR-202-5p水平,下調(diào)了它們分別的靶基因LOC101747543、SMAD7和PTEN的mRNA水平。(5)氨氣中毒降低了雞脾臟組織IL-2和IFN-γ的mRNA水平,提升了IL-1β、IL-4和IL-6的mRNA水平,致使肉雞脾臟組織的Th1/Th2平衡被打破并漂移向Th2。(6)氨氣中毒降低了雞脾臟組織抗炎因子HO-1的mRNA和蛋白水平;增加NO含量,iNOS活性,iNOS、NLRP3炎癥小體、NF-κB、TNF-α、COX-2和PTGEs的mRNA水平以及iNOS和NF-κB的蛋白水平,導(dǎo)致了雞脾臟組織的炎癥損傷。(7)氨氣中毒降低了雞脾臟組織PI3K、AKT和mTOR的mRNA和蛋白水平,導(dǎo)致了雞脾臟中PI3K/AKT/mTOR信號通路被抑制。(8)氨氣中毒增加雞脾臟組織LC3-I、LC3-II、p53、Beclin1、ATG14、ATG16L1、ATG12、ATG10、ATG5、ATG3、ATG7和Dynein的mRNA水平,降低ATF3和p62的mRNA水平導(dǎo)致了雞脾臟組織的細(xì)胞自噬。(9)氨氣中毒增加雞脾臟組織HSP27、HSP40、HSP60、HSP70和HSP90的mRNA水平,以及HSP60、HSP70和HSP90的蛋白水平。機(jī)體動員了熱休克蛋白來抵御氨氣中毒。熱休克蛋白的升高可能是一種代償機(jī)制。結(jié)果表明,過量氨氣對雞脾臟具有免疫毒性,氨氣中毒導(dǎo)致雞脾臟氧化應(yīng)激、能量代謝紊亂、Th1/Th2失衡、炎癥損傷、細(xì)胞自噬和熱休克蛋白增加。雞脾臟在氨氣中毒條件下,機(jī)體動員了熱休克蛋白發(fā)生保護(hù)性反應(yīng),熱休克蛋白的增加可能是一種抵抗氨氣中毒的代償機(jī)制。
【圖文】：

C3）） 脾臟動脈壁平滑肌周圍發(fā)生淀粉樣變性（Al），紅髓萎縮（RPS）（圖3-1（C2）） 圖3-1 雞脾臟顯微結(jié)構(gòu)（蘇木精-伊紅染色，400倍），A：對照組，B：中氨組，C1-C3：高氨組Fig. 3-1 Microstructure of chicken spleens (hematoxylin-eosin staining, ×400), A: the controlgroup, B: the middle ammnia group

線粒體數(shù)目以及線粒體的損傷程度增加，，自噬泡出現(xiàn)的數(shù)量顯著增加 氨氣中毒誘導(dǎo)脾臟細(xì)胞的自噬具有劑量依賴效應(yīng) 圖3-2 雞脾臟的亞顯微結(jié)構(gòu)，A：對照組，B：中氨組，C1-C2：高氨組Fig. 3-2 Ultrastructure of chicken spleens, A: the control group, B: the middle ammnia group,C1-C2: the high ammnia group3.2 雞脾臟中氧化應(yīng)激和能量代謝相關(guān)因子的測定3.2.1 雞脾臟中氧化應(yīng)激相關(guān)因子的結(jié)果為了評價雞脾臟組織中的氧化與抗氧化水平，我們檢測了 T-AOC SOD CAT 和 GSH-Px的活性以及 GSH H2O2和 MDA 的含量（圖 3-3） 我們發(fā)現(xiàn)在第 14 天 第 28 天和第 42
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：X171.5;S858.31

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2625857