【摘要】：內(nèi)分泌干擾物是近年來環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。目前,我國還未建立有效的內(nèi)分泌干擾物清單,也缺乏能夠快速、有效地對(duì)化合物內(nèi)分泌干擾效應(yīng)進(jìn)行高通量篩選的平臺(tái)。本研究構(gòu)建了以中國倉鼠卵巢癌細(xì)胞(CHO-K1)為宿主細(xì)胞,通過雌激素受體α(ERα)和甲狀腺激素受體β(TRβ)介導(dǎo)的雙熒光報(bào)告基因系統(tǒng),并結(jié)合T-screen實(shí)驗(yàn)和計(jì)算毒理學(xué)技術(shù),對(duì)3類化合物——限用殺蟲劑銳勁特及其代謝產(chǎn)物、20種典型持久性有機(jī)污染物多氯聯(lián)苯(PCBs)和9種新型工業(yè)替代品有機(jī)磷阻燃劑(OPFRs)的內(nèi)分泌干擾效應(yīng)進(jìn)行了定性及定量評(píng)價(jià)。主要的研究工作和成果分為以下3部分內(nèi)容:(1)銳勁特及其代謝產(chǎn)物的內(nèi)分泌干擾效應(yīng)評(píng)價(jià):在雙熒光報(bào)告基因體系中,銳勁特砜化物具有抗雌和抗甲活性,比其母本化合物(只有抗雌活性)表現(xiàn)出了更強(qiáng)的內(nèi)分泌干擾效應(yīng)。此外,通過分子對(duì)接后發(fā)現(xiàn):在與TRβ的結(jié)合方面,銳勁特代謝產(chǎn)物(砜化物)比母本化合物具有更強(qiáng)的親和力,即具有更強(qiáng)的抗甲狀腺激素活性,這一點(diǎn)也有力地支持了前期細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。(2)20種PCBs的甲狀腺激素效應(yīng)評(píng)價(jià):在檢測(cè)的20種PCBs中,PCB44,PCB52,PCB101,PCB110和PCB180具有類甲狀腺激素活性;而PCB99,PCB118,PCB128,PCB138,PCB163,PCB180,PCB187,PCB194和PCB199則具有抗甲狀腺激素活性,其中PCB180既具有類甲活性也具有抗甲活性。此外,分子對(duì)接技術(shù)也對(duì)PCBs活性大小差異的潛在原因進(jìn)行了探討和解釋。從構(gòu)效層面分析,氯原子的取代個(gè)數(shù)或取代位置可能會(huì)影響PCBs與甲狀腺受體TRβ間的相互作用。(3)9種OPFRs的甲狀腺激素效應(yīng)評(píng)價(jià):通過TRβ介導(dǎo)的報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),9種OPFRs均無激動(dòng)活性,而其中4種則表現(xiàn)出顯著的抗甲狀腺激素效應(yīng),活性大小順序如下:TCPTBPTCPPTDCPP。這一結(jié)果在T-screen實(shí)驗(yàn)中得到了部分驗(yàn)證。此外,分子對(duì)接結(jié)果顯示OPFRs甲狀腺激素活性的強(qiáng)弱部分程度上取決于它和TRβ不同的結(jié)合方式,結(jié)構(gòu)中含有苯環(huán)、鹵素及短鏈的OPFRs可能更易表現(xiàn)出拮抗效應(yīng)。
[Abstract]:Endocrine disruptors are one of the hotspots in the field of environmental science in recent years. At present, China has not established an effective list of endocrine disruptors, nor is there a platform for rapid and effective screening of endocrine disrupting effects of compounds. In this study, a double fluorescence reporter gene system, mediated by estrogen receptor 偽 (ER 偽) and thyroid hormone receptor 尾 (TR 尾), was constructed with Chinese hamster ovarian cancer cells (CHO-K1) as host cells. The system was combined with T-screen experiment and computational toxicology. In this paper, the endocrine disrupting effects of three kinds of chemical compounds, Reagin and its metabolite, 20 typical persistent organic pollutants (PCBs) (PCBs) and 9 new industrial substitutes, organophosphorus flame retardants (OPFRs), were evaluated qualitatively and quantitatively. The main research work and achievements are as follows: (1) Evaluation of endocrine disrupting effect of Trigonil and its metabolites: in the system of double fluorescence reporter gene, the sulfoxide has anti-female and anti-A activities. These compounds exhibit stronger endocrine disrupting effects than their female parent compounds (with only anti-female activity). In addition, after molecular docking, it was found that in binding to TR 尾, the sulfoxide metabolite of Fipronil had stronger affinity than the female compound, that is, it had stronger antithyroid hormone activity. This also strongly supports the results of previous cell experiments. (2) the evaluation of thyroid hormone effect of 20 PCBs: among the 20 PCBs tested, PCB44-PCB52PCB101 PCB110 and PCB180 have thyroid-like hormone activity, while PCB99,PCB118,PCB128,PCB138,PCB163,PCB180,PCB187,PCB194 and PCB199 have anti-thyroid hormone activity. Among them, PCB180 has both armour-like activity and anti-nail activity. In addition, molecular docking technique also discussed and explained the potential reasons for the difference of PCBs activity. From a structure-activity perspective, The number or position of substitution of chlorine atoms may affect the interaction between PCBs and thyroid receptor TR 尾. (3) the evaluation of thyroid hormone effect of nine OPFRs: through the TR 尾 mediated reporter gene assay, 9 OPFRs were found to be inactive. Four of them showed significant antithyroid hormone effects, and the order of activity was as follows: TCPTBPTPTDCPP. This result is partially verified in T-screen experiment. In addition, the molecular docking results showed that the activity of OPFRs thyroid hormone depended in part on its different binding mode with TR 尾, and that OPFRs with benzene ring, halogen and short chain might be more likely to exhibit antagonistic effect.
【學(xué)位授予單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：X503

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本文編號(hào)：2220965