本文選題：耐藥基因 + 土壤耐藥菌��； 參考：《浙江大學》2015年碩士論文

【摘要】：本文以不同環(huán)境土壤抗生素的耐藥性及抗生素污染對土壤氮素轉化的影響為目的,綜合運用傳統(tǒng)的微生物生態(tài)學方法以及分子生物學研究手段,并借鑒臨床醫(yī)學方法,研究茶園、養(yǎng)殖場、醫(yī)院和森林等四種環(huán)境中土壤抗生素抗性基因的存在及豐度特征,篩選高抗生素耐藥菌,探明耐藥菌中抗性基因的遺傳位置;同時研究外源抗生素添加對土壤氮轉化及相關微生物的響應,初步研究了 土壤環(huán)境條件與土壤耐藥性及養(yǎng)分轉化之間的內在聯(lián)系。主要研究結果如下:1.四類土壤環(huán)境中,養(yǎng)殖場土壤中抗生素抗性基因(AGRs)含量較高,是耐藥基因的一個重要存儲庫,而森林土壤受到人為影響最小,各基因拷貝數(shù)較低。茶園土壤中耐藥基因雖然絕對拷貝數(shù)較低,但是相對表達量較高�？梢�,耐藥基因的積累受人類活動的影響。四類土壤環(huán)境中均檢測到了一類整合子,含量達到4.75× 105-1.39× 107 copies/g;二類整合子在茶園、養(yǎng)殖場、豬糞中存在,但拷貝數(shù)低于一類整合子。說明整合子廣泛存在于土壤環(huán)境中,耐藥基因在環(huán)境中有較高的基因轉移水平。2.不同環(huán)境土壤存在不同程度的耐青霉素和四環(huán)素細菌,其中四類土壤均能篩選出超級青霉素耐藥菌,耐受濃度高達1000 mg/L。所分離純化的20株耐藥菌屬于Pseudomonas sp.或Variovorax sp.。多重耐藥表明每個菌株至少對兩種抗生素存在抗性,但是所有菌株均對四環(huán)素類抗生素敏感�；驒z測表明所有分離的高耐藥菌不僅含有青霉素抗性基因blaTEM,而且含有編碼四環(huán)素外排泵基因tet(C),說明基因的存在并不一定能夠表達,基因存在只能說明這種基因具有表達的潛能。質粒去除后,有6株耐藥菌消除了對大環(huán)內脂類抗生素的抗性,說明這些菌株的部分耐藥基因是存在于質粒上的,易于橫向轉移。3.外源添加抗生素處理初期能使土壤中硝態(tài)氮含量增加,后慢慢平衡。土壤NH4+-N的含量在培養(yǎng)9 d顯著下降,后趨于平衡;土壤在高濃度抗生素處理下,AOA呈平緩下降的趨勢,而低濃度抗生素處理下AOA呈先抑制再激活后平緩下降趨勢,總體培養(yǎng)前期與氨氮硝氮變化相呼應。因此,抗生素污染壓力下AOA可能對土壤的硝化起主要貢獻。
[Abstract]:Aiming at the effects of antibiotic resistance and antibiotic contamination on soil nitrogen conversion in different environments, the traditional methods of microbial ecology and molecular biology were used in this paper, and the clinical medical methods were used for reference. To study the existence and abundance of antibiotic resistance genes in tea garden, farm, hospital and forest, to screen high antibiotic resistant bacteria and to find out the genetic position of resistance genes in drug resistant bacteria. At the same time, the responses of exogenous antibiotics to soil nitrogen transformation and related microorganisms were studied, and the internal relationship between soil environmental conditions, soil resistance and nutrient transformation was studied. The main results are as follows: 1. In the four kinds of soil environment, the content of antibiotic resistance gene (AGRs) in farm soil is high, and it is an important repository of drug resistance gene, but forest soil is least affected by human being, and the copy number of each gene is low. Although the absolute copy number of drug resistance gene in tea garden soil was lower, the relative expression of drug resistance gene was higher. It can be seen that the accumulation of drug resistance genes is affected by human activities. A class of integron was detected in four kinds of soil environment, and the content of integron was 4.75 脳 105-1.39 脳 107 copies-g.The second class integron was found in tea garden, breeding farm and pig manure, but the copy number was lower than that of one class integron. The results showed that integron existed widely in soil environment, and drug resistance gene had higher gene transfer level. Penicillin-and tetracycline-resistant bacteria were found in different soil environments. Four kinds of soils were able to screen super penicillin resistant bacteria and the tolerance concentration was up to 1000 mg 路L ~ (-1) 路L ~ (-1) 路L ~ (-1) 路L ~ (-1) ~ (-1). Twenty strains of drug-resistant bacteria isolated and purified belong to Pseudomonas sp. Or Variovorax sp. Multidrug resistance indicated that each strain was resistant to at least two antibiotics, but all strains were sensitive to tetracycline antibiotics. Gene analysis showed that all highly resistant strains contained not only the penicillin resistance gene blaTEM, but also the tetracycline efflux pump gene tet (C), indicating that the presence of the gene may not be able to express it. The presence of a gene only indicates that the gene has the potential to express. After the removal of plasmids, 6 strains of drug-resistant bacteria eliminated the resistance to macrocyclic lipids, indicating that some of the resistant genes of these strains existed on the plasmids and were easy to be transfered horizontally. Exogenous antibiotics could increase nitrate content in soil at the initial stage and then balance slowly. The content of NH4-N in soil decreased significantly after 9 days of culture, and then tended to balance, and AOA decreased slowly under high concentration of antibiotics, while that of AOA in low concentration of antibiotics decreased at first, then activated, and then decreased slightly in the treatment of low concentration of antibiotics, while in the treatment of high concentration of antibiotics, the content of AOA decreased slowly. The change of ammonia, nitrite and nitrogen in the early stage of the whole culture coincided with the change of ammonia and nitrate. Therefore, AOA may play a major role in soil nitrification under antibiotic pollution.
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：X53;R124

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本文編號：2116249