本文關鍵詞：典型抗生素菌渣殘留效價檢測方法及其利用的初步研究　出處：《哈爾濱工業(yè)大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：隨著抗生素產(chǎn)量增多,抗生素菌渣的處理問題已逐漸成為了限制制藥業(yè)發(fā)展的重要問題。由于菌渣中的殘留效價會引發(fā)耐藥風險,故抗生素菌渣已被列為危廢。本論文選擇土霉素和桿菌肽為典型,通過對菌渣樣品前處理條件(提取、凈化)及色譜條件(色譜柱、柱溫、流動相、檢測波長)的優(yōu)化,建立檢測菌渣中殘留效價的方法,并以桿菌肽菌渣為研究對象,探究了抗生素菌渣用作飼料添加劑的可行性。對于土霉素菌渣,用甲醇/冰乙酸提取土霉素,采用分散固相萃取技術,用GCB和C18各50mg及1mgNaSO4作為吸附藥劑凈化樣品,色譜條件為:PLRP-S色譜柱分離,柱溫30°C,流動相為甲醇/0.05mol/L草酸,檢測波長為355nm,結果顯示,土霉素在0.1~2000mg/L范圍內線性良好,回收率為86.86~97.33%,RSD為2.45~4.38%,LOD和LOQ分別為0.0506和0.1533,所建立的方法簡單有效。在此基礎上,建立了土霉素三種降解產(chǎn)物E-OTC、α-OTC與β-OTC的檢測方法。E-OTC是OTC的同分異構體,結構和性質相似,因此采用與OTC相同的提取和凈化方式。檢測E-OTC的色譜條件為:PLRP-S色譜柱分離,流動相選用乙腈/0.2%甲酸水,檢測波長270nm。α-OTC與β-OTC是同分異構體,結構性質相似,可一同提取、凈化和檢測,提取劑選用甲醇/冰乙酸/0.02mol/LNa2EDTA,用Waters Sep-Pak C18固相萃取柱凈化提取液,甲醇、超純水、Na2EDTA溶液活化小柱,5ml超純水淋洗,2ml甲醇和1ml乙酸乙酯洗脫,檢測α-OTC與β-OTC的色譜條件為:PLRP-S色譜柱分離,甲醇/乙腈/磷酸鹽緩沖溶液(pH=8)為流動相,波長為254nm。經(jīng)檢測,E-OTC、α-OTC和β-OTC的回收率分別為75.98~84.73%、59.22~76.76%和63.91~72.57%,RSD分別為2.23~4.26%、2.12~4.85%、2.79~5.04%,LOD和LOQ分別為0.0658~0.0774和0.1990~0.2346。對于桿菌肽菌渣,用甲醇/0.1%甲酸水提取桿菌肽A,加入乙腈除蛋白,用正己烷進行二次除脂,然后過Oasis HLB固相萃取柱,5ml甲醇和5ml超純水活化,3ml超純水淋洗,3ml甲醇洗脫。檢測桿菌肽A的色譜條件為:Aglient TC-C18色譜柱分離,流動相為0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水,柱溫30°C,檢測波長254nm。經(jīng)檢測,桿菌肽A在0.1~1000mg/L范圍內相關系數(shù)是0.9997,呈良好線性,回收率為87.89~97.33%,相對標準偏差為3.05%~5.18%。最后探究了桿菌肽菌渣用作飼料添加劑的可行性。對桿菌肽菌渣進行成分分析,將菌渣中常規(guī)營養(yǎng)成分含量及各氨基酸含量與幾種常規(guī)飼料對比,表明菌渣中的營養(yǎng)成分符合飼料水平,且菌渣中有毒重金屬含量均低于規(guī)定的最大允許值,屬無毒產(chǎn)品。在此基礎上設計并優(yōu)化了菌渣制備飼料添加劑的工藝。最后對菌渣中的耐藥基因進行了檢測,檢測到菌渣中含有bcrB基因,雖然bcrB基因單獨存在時不足以引發(fā)耐藥性,但仍存在一定風險,可通過加壓加熱法滅活耐藥菌,破壞菌渣中的耐藥基因。
【學位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：X787;X833
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本文編號：1313658