本文關(guān)鍵詞：γ-H2AX、53BP1、Mre11、MDC1作為低劑量輻射生物標(biāo)志物的初步研究

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【摘要】：目的在放射醫(yī)學(xué)與電離輻射防護(hù)領(lǐng)域中,預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞輻射敏感性和輻射事故情況下估算人員的生物劑量的指標(biāo)一般有以下幾種：(1)染色體畸變分析,是目前廣泛使用的金標(biāo)準(zhǔn),雖然分析準(zhǔn)確,但工作量大、試驗(yàn)周期長；(2)ESR分析,劑量范圍廣,但材料獲得困難； (3)利用分子生物學(xué)技術(shù)分析基因表達(dá)的變化。此外,近年來,越來越多的人關(guān)注組蛋白γ-H2AX等DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白、拷貝數(shù)變異、代謝組學(xué)等的研究,在輻射損傷生物標(biāo)志物的篩選取得了一定的進(jìn)展。然而,人們對(duì)低劑量電離輻射的生物標(biāo)志物所知甚少,低劑量電離輻射受照劑量的估算方法也并不成熟。本課題選取了γ-H2AX、MDC1、53BP1、 Mrel1等DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白。γ-H2AX在DNA雙鏈斷裂(Double Strand Break, DSB)早期,在損傷位點(diǎn)即可募集MDC1 (Mediator of DNA damage checkpoint protein 1)、53BP1(p53-binding protein 1)、Mrel1(meiotic recombination 11 homolog A)等參與DSB修復(fù),本研究試圖探索在低劑量水平下人永生化細(xì)胞株和人外周血原代細(xì)胞中的四種焦點(diǎn)形成水平的劑量-效應(yīng)關(guān)系,這將有助于日常醫(yī)療照射等低劑量照射下快速、高效、準(zhǔn)確的輻射生物標(biāo)志物的探尋。方法1.利用免疫熒光技術(shù)分別分析受到0～200 mGy ~(60)Co γ射線照射后永生化淋巴細(xì)胞株AHH-1在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)(1h、2h、6h、18 h)時(shí)γ-H2AX、MDC1、53BP1和Mre11蛋白焦點(diǎn)的形成情況,分析各焦點(diǎn)形成水平隨時(shí)間和劑量的變化規(guī)律。2.在此基礎(chǔ)上,利用免疫熒光技術(shù)分析受到0-200mGy~(60)Coγ射線照射且修復(fù)1h后人外周血淋巴細(xì)胞中γ-H2AX、MDC1、53BP1 和 Mrell蛋白的焦點(diǎn)形成情況,確定這些焦點(diǎn)形成水平與照射劑量之間的關(guān)系。結(jié)果1.~(60)Coγ射線照射1h和2h后,人永生化淋巴細(xì)胞株AHH-1細(xì)胞中DNA損傷相關(guān)蛋白γ-H2AX、MDC1、53BP1和Mre11焦點(diǎn)形成均隨照射劑量增加而升高,且具有良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系,并可以擬合成直線方程,R2值較高。~(60)Coγ射線照射6h和18h后,人永生化淋巴細(xì)胞株AHH-1細(xì)胞中DNA損傷相關(guān)蛋白γ-H2AX、MDC1、53BP1和Mre11焦點(diǎn)形成與照射劑量之間不存在良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系。2.~(60)Co γ射線照射人永生化淋巴細(xì)胞株AHH-1細(xì)胞中DNA損傷相關(guān)蛋白γ-H2AX、MDC1、53BP1 和 Mre11照射1h和2h后在25mGy以上照射組焦點(diǎn)形成均高于未照射組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)；且照射后1h各個(gè)蛋白焦點(diǎn)水平高于2 h,總體上焦點(diǎn)水平形成隨時(shí)間而呈下降趨勢(shì)。在照射后6h與18h時(shí)間點(diǎn)四種蛋白的各個(gè)照射組焦點(diǎn)形成水平均與未照射組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。3.~(60) Coγ射線照射人外周血淋巴細(xì)胞1h后DNA損傷相關(guān)蛋白γ-H2AX、 MDCl、53BP1口Mre11焦點(diǎn)形成水平,在25 mGy以上照射組焦點(diǎn)形成水平均高于未照射組(p0.05),且隨劑量增加而呈上升趨勢(shì),具有良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系,R2值較高。結(jié)論1.低劑量電離輻射作用2 h內(nèi)AHH-1細(xì)胞中DNA損傷相關(guān)蛋白γ-H2AX、 MDC1、53BP1和Mre11焦點(diǎn)形成與照射劑量存在良好的劑量效應(yīng)關(guān)系。2.低劑量電離輻射誘導(dǎo)的AHH-1細(xì)胞中DNA損傷相關(guān)蛋白γ-H2AX、MDC1、53BP1和Mre11焦點(diǎn)形成會(huì)隨時(shí)間逐漸減少,6h以后下降到本底水平。3.低劑量電離輻射誘導(dǎo)的人外周血淋巴細(xì)胞中DNA損傷相關(guān)蛋白γ-H2AX、 MDC1、53BP1和Mre11焦點(diǎn)形成水平在照射后1h與照射劑量存在良好的劑量效應(yīng)關(guān)系。綜上所述,DNA損傷相關(guān)蛋白H2AX、MDC1、53BP1和Mrel1具有成為低劑量輻射生物標(biāo)志物的潛力。
【關(guān)鍵詞】：低劑量 ~(60)COγ射線 免疫熒光 DSB
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R144
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 英文縮略詞表11-12
• 前言12-21
• 技術(shù)路線21-23
• 材料與方法23-29
• 結(jié)果29-49
• 第一部分 0~200mGy ~(60)Co γ射線照射人永生化淋巴細(xì)胞株AHH-1 γ-H2AX焦點(diǎn)形成變化29-33
• 第二部分 0~200mGy ~(60)Co γ射線照射人永生化淋巴細(xì)胞株AHH-153BP1焦點(diǎn)形成變化33-37
• 第三部分 0~200mGy ~(60)Co γ射線照射人永生化淋巴細(xì)胞株AHH-1 MDC1焦點(diǎn)形成變化37-41
• 第四部分 0-200mGy ~(60)Co γ射線照射人永生化淋巴細(xì)胞株AHH-1 MRE11焦點(diǎn)形成變化41-45
• 第五部分 0~200 mGy ~(60)Co γ射線照射人外周血淋巴細(xì)胞各DNA損傷修復(fù)蛋白焦點(diǎn)形成變化45-49
• 討論49-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 作者簡(jiǎn)介67-68
• 致謝68

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6 馬t，

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