隨著人類開發(fā)地球資源的加劇,海洋受到了嚴重的污染。目前普遍認為生物修復(fù)是清除海洋石油污染的有效手段。從海洋石油污染較嚴重的環(huán)境中進行石油烴降解微生物的分離、培養(yǎng),以及對這些重要降解菌的鑒定是當前海洋環(huán)境微生物學(xué)研究的重點和熱點。在眾多的污染中,石油是海洋環(huán)境中的重要污染物,烷烴是石油的重要組成成分。但是其疏水性往往不利于微生物對其快速降解。化學(xué)表面活性劑雖然可以驅(qū)散油或加大其水溶性,但是由于其生物毒性,往往會阻礙微生物對油的利用。生物表面活性劑(biosurfactant)無毒、可生物降解,不會對環(huán)境造成污染,且能夠增強憎水性化合物的親水性和生物可利用性,提高微生物的數(shù)量,繼而提高了烷烴的降解速度,是提高生物修復(fù)技術(shù)的有效手段。此外,生物表面活性劑在環(huán)境生物工程其它領(lǐng)域也有極大的應(yīng)用潛力。因此,對烷烴降解菌和生物表面活性劑產(chǎn)生菌的研究具有較高的理論和應(yīng)用價值。 本文以十六烷為唯一碳源,通過培養(yǎng)和非培養(yǎng)兩種手段研究了南海沉積物中石油降解菌的多樣性。通過烷烴富集培養(yǎng),從2個站點不同深度的南海沉積物樣品中富集篩選出48株深海細菌,分屬于10個不同的屬,其中27株對十六烷有降解能力。表面張力測定結(jié)果表明,4株降解菌同時具有較強的表面活性劑產(chǎn)生能力,2株Dietzia maris菌能使水的表面張力降至33mN/m左右,這是該種微生物產(chǎn)表面活性劑的首次報道。通過變性梯度凝膠電泳(DGGE)分析顯示,南海沉積物富集物中的烷烴降解菌優(yōu)勢菌是芽孢桿菌,而且有多種。其中,Bacillus aquimaris在兩個站點的7個樣品的富集物中都是優(yōu)勢菌。此外,Sporosarcina,Halomona以及Brevibacterium屬的細菌在不同樣品中也表現(xiàn)為除Bacillus之外的優(yōu)勢菌。其中大多數(shù)菌已報道可以降解原油或柴油。 從南非開普敦碼頭的表層海水的十個樣品中,以原油和柴油為唯一碳源,分離篩選89株單菌,經(jīng)鑒定70株為烷烴降解菌。對十個站點中烷烴降解菌分布狀況進行分析,用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)、變性梯度凝膠電泳(DGGE)和切膠測序相結(jié)合的方法對十個樣品中的細菌多樣性進行分析,結(jié)果顯示開普敦表層海水中的烷烴降解菌優(yōu)勢菌是食烷菌。但是,不同樣品之間存在差別。在S23站點中Sphingopyxis和Bacillus是優(yōu)勢菌,在S24站點中Alcanivorax和Marinobacter是優(yōu)勢菌,在S25站點中Marinobacter是優(yōu)勢菌,在S26站點中Alcanivorax,Marinobacter,Sinorhizobium和Luteibacter是優(yōu)勢菌,在S27站點中Alcanivorax是優(yōu)勢菌,在S28站點中Acinetobacter和Vibrio是優(yōu)勢菌,在S29站點中Acinetobacter和Erythrobacter是優(yōu)勢菌,在S30站點中Alcanivorax是優(yōu)勢菌,在S31站點中Alcanivorax和Erythrobacter是優(yōu)勢菌,在S32站點中Alcanivorax是優(yōu)勢菌。同時還有一些未培養(yǎng)的細菌存在。選取四株較好的烷烴降解單菌接種于十六烷作為唯一碳源的培養(yǎng)基中,利用氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)測定烷烴降解率。培養(yǎng)三天后,降解率分別為43%,37%,40%,46%。為石油污染的生物修復(fù)技術(shù)的應(yīng)用提供豐富的菌種資源。 以十六烷為唯一碳源,通過測定西南印度洋中脊深海水樣中降解菌單菌培養(yǎng)液的表面張力,篩選出27株表面活性劑產(chǎn)生菌。有9種與GenBank中最近緣的菌株最高相似度均低于97%,是表面活性劑產(chǎn)生菌的新種或新屬。這些菌所產(chǎn)生的表面活性劑成分尚未確定,也許具有新的生物活性,具有進一步研究的價值。
【學(xué)位單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：X55
【部分圖文】：

結(jié)果與討論大類，如圖3.2所示。它們主要是屬于廠介用icutes(厚壁菌門，低G+C革蘭氏陽性菌)和Acti力obacteria(放線菌門，高G代革蘭氏陽性菌)類群，分別占49%和35%。其它兩類則只占很小的比例，分別為變形菌綱p亞群(4%)、丫亞群(12%)。Actinobacteria包含10個屬中的6個屬，種屬多樣性相對的豐富，但只在個別菌群中分離到，且多數(shù)只包含1個種;月尸陰icutes包含刀公d刀毋和AerococcusZ個屬，Bacillus屬占絕對的優(yōu)勢。其它的兩個類群中，變形菌綱p亞群則只包含一個屬

在樣品N3TF(3號站位，10一15cm)中，有7條亮帶，其中條帶3、4、5號帶最亮，亮帶3和5分別與單菌Bac，’/lusa穿uj服，rjs(99%)和Bac，’了了usha了ode刀jtrjfz’cans(98%)對應(yīng)上(圖3.3，laneE)，亮帶1，2，4，6，7沒有單菌與之對應(yīng)。將這五條亮帶回收測序，其中亮帶2與Ha了 ~asoe廠了dt’a刀 a(1000k)相似度最高

為了進一步了解富集物中的未培養(yǎng)菌及種群結(jié)構(gòu)情況，以第6次轉(zhuǎn)接培養(yǎng)物的DNA為模板，采用16SrRNA基因V3區(qū)的通用引物進行PCR擴增、然后在同一張膠中比較DGGE結(jié)果，如圖3.5，我們可以看出不同菌群間有部分條帶處于同一位置，說明彼此間可能包含相同的菌株，或者只是在V3區(qū)的序列一樣的菌株，但不同菌群間也有各自的一些其它菌群所沒有的特殊條帶，這反映了菌群間的共性與特性。結(jié)果顯示10個不同表層海水樣品富集物中的菌群結(jié)構(gòu)明顯不同，在DGGE凝膠上呈現(xiàn)的條帶在數(shù)目與亮度上均存在差異。但是，也能看出有的菌在不同的菌群中反復(fù)出現(xiàn)。為了確定每條帶代表的細菌，將每個樣品所有分離株和與菌群的DGGE的PCR產(chǎn)物一起上樣
【引證文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 游偲;海洋異養(yǎng)細菌對溢油污染響應(yīng)特征的初步研究[D];中國海洋大學(xué);2012年

本文編號：2842906