發(fā)布時(shí)間：2017-08-08 16:45

  本文關(guān)鍵詞：粗糙脈孢菌GH45家族內(nèi)切纖維素酶基因ncGH45在畢赤酵母中表達(dá)及重組酶的性質(zhì)表征

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【摘要】：纖維素酶作為一種重要的糖苷水解酶,在生物質(zhì)能源生產(chǎn)、飼料、造紙、洗滌和紡織領(lǐng)域都有著非常廣泛的應(yīng)用。粗糙脈孢菌來(lái)源的GH45家族內(nèi)切纖維素酶基因(nc GH45)全長(zhǎng)935 bp,包含一個(gè)53 bp的內(nèi)含子(339-391),編碼272個(gè)氨基酸,包括一個(gè)N-端的GH45家族催化結(jié)構(gòu)域和C-端的1家族碳水化合物結(jié)合結(jié)構(gòu)域。該基因在畢赤酵母中得到了分泌表達(dá),且表達(dá)蛋白條帶單一,酶活性達(dá)到20 U/m L。重組酶r Nc GH45的最適p H為4.5~5.0,最適溫度為60~65℃,并且在較寬的p H范圍(p H 4.0~8.0)和溫度范圍(30~70℃)都能維持75%以上的酶活。在37℃和50℃,p H 3.0~11.0都有著非常好的穩(wěn)定性;該酶的熱穩(wěn)定性非常好,在70℃和80℃處理2 h還能剩余89.6%和77.7%的酶活,即使在沸水中煮10 min還能剩余10%的酶活。r Nc GH45的最適底物是地衣多糖(1 116.0 U/mg),其次是大麥葡聚糖(754.2 U/mg)和CMC-Na(254.6 U/mg),對(duì)大麥葡聚糖和CMC-Na的動(dòng)力學(xué)常數(shù)Km和Vmax分別為6.26 mg/m L和997.4μmol/mg·min,19.96 mg/m L和722.1μmol/mg·min。水解產(chǎn)物分析結(jié)果表明,r Nc GH45對(duì)多糖的水解產(chǎn)物主要是纖維五糖,對(duì)寡糖的最小作用底物是纖維三糖,而對(duì)纖維二糖沒(méi)有作用。對(duì)紡織品脫毛實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明,酶的添加量為10 U時(shí),減量率為1.55%。上述結(jié)果表明成功構(gòu)建了r Nc GH45高效表達(dá)工程菌株,表達(dá)的重組蛋白性質(zhì)優(yōu)越,有著良好的工業(yè)應(yīng)用前景。
【作者單位】： 天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院教育部工業(yè)發(fā)酵微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所中科院系統(tǒng)微生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 粗糙脈胞菌 GH內(nèi)切纖維素酶 脫毛 紡織 畢赤酵母
【基金】：國(guó)家863計(jì)劃項(xiàng)目(2012AA022203,SS2014AA021301) 天津市科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(13ZCDZSY05000)資助
【分類號(hào)】：Q55
【正文快照】： 纖維素作為自然界中存在最廣的生物多糖,是植物細(xì)胞壁、種皮和樹木的主要成分[1]。由于其通常與木質(zhì)素、半纖維素相互交聯(lián)而難于降解。相對(duì)于比較劇烈的酸、堿處理,微生物因其比較環(huán)保,而被廣泛關(guān)注。已經(jīng)陸續(xù)有大量的微生物被發(fā)現(xiàn)可以降解木質(zhì)纖維素,包括研究比較多的里氏木，

本文編號(hào)：640998