本文關(guān)鍵詞：單激發(fā)-雙通道成像策略用于細胞表面特定糖蛋白上糖型的分析

  更多相關(guān)文章： 碳水化合物 雙通道LRET 納米粒子 近紅外激發(fā) 特定糖蛋白上糖成像

【摘要】：聚糖作為細胞基本組分之一,參與細胞粘附、細胞間通訊、信號轉(zhuǎn)導、受體激活以及細胞內(nèi)吞等一系列重要的生物學過程。同時,特定蛋白上的糖型表達與細胞特定生理功能間有密切聯(lián)系,糖基化的動態(tài)變化也反映了疾病的進程和狀態(tài)。因此,細胞表面特定蛋白上的糖基化與糖型的檢測是當前生命分析化學領(lǐng)域的研究熱點。上轉(zhuǎn)換納米粒子(UNP)因為具有近紅外光激發(fā)、上轉(zhuǎn)換多色發(fā)光、發(fā)射峰窄、斯托克斯位移大、光滲透深度大、生物相容性好以及發(fā)射光波長可調(diào)諧等一系列優(yōu)點,而成為近年來研究的熱點,被用作生物探針或藥物載體�；赨NP的上轉(zhuǎn)換發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移體系因為沒有能量受體的Bleed-through現(xiàn)象而被用于生物檢測中,可顯著地提高檢測的靈敏度和準確性。本文利用上轉(zhuǎn)換納米材料(UNP)的近紅外單色激發(fā)、多色發(fā)射的特點,結(jié)合糖代謝標記技術(shù),通過在細胞表面的特定蛋白位點上建立單激發(fā)-雙通道的發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移體系(D-LRET),實現(xiàn)了特定糖蛋白上兩種單糖的同時成像。具體工作如下所示：本文通過在細胞表面的特定蛋白位點上建立單激發(fā)-雙通道的上轉(zhuǎn)換發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(D-LRET)體系,實現(xiàn)了特定糖蛋白上兩種單糖的同時成像。這個單激發(fā)雙通道成像體系利用核酸適配體功能化的上轉(zhuǎn)換納米粒子作為能量供體連接到細胞表面的特定糖蛋白上,兩種不同的熒光分子作為能量受體通過雙糖代謝標記技術(shù)標記到細胞表面的兩種單糖上。在980 nm近紅外光激發(fā)下,通過-對平行發(fā)生的共振能量轉(zhuǎn)移,使連接到特定糖蛋白的兩種單糖上的熒光分子被點亮,從而實現(xiàn)特定糖蛋白上兩種單糖的同時成像。以黏蛋白MUC1作為蛋白模型,利用該策略可對三種細胞的MUC1上的糖型進行原位可視化表征,并且可定量分析MUC1上兩種單糖的相對表達情況及追蹤外界藥物對相對表達的影響。該方法為特定糖蛋白上糖型的檢測提供了一個普適的平臺,從而有助于研究糖基化對蛋白質(zhì)功能的調(diào)節(jié)機理。
【關(guān)鍵詞】：碳水化合物 雙通道LRET 納米粒子 近紅外激發(fā) 特定糖蛋白上糖成像
【學位授予單位】：南京大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：Q26;TB383.1
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 本論文的主要創(chuàng)新點12-13
• 第一章 緒言13-34
• 1.1 細胞表面的聚糖14-15
• 1.1.1 糖復合物14
• 1.1.2 聚糖的結(jié)構(gòu)14-15
• 1.1.3 聚糖的功能15
• 1.2 細胞表面聚糖的識別與檢測15-20
• 1.2.1 凝集素識別16-17
• 1.2.2 基于分子改造的化學共價識別17-18
• 1.2.3 糖代謝標記技術(shù)18-19
• 1.2.4 直接化學共價識別19-20
• 1.3 特定糖蛋白上單糖的成像分析20-24
• 1.3.1 細胞表面特定糖蛋白上糖成像21-23
• 1.3.2 細胞內(nèi)特定糖蛋白上糖成像23-24
• 1.4 上轉(zhuǎn)換納米粒子及其在生物檢測中的應(yīng)用24-25
• 1.5 黏蛋白MUC1及其家族25-29
• 1.5.1 黏蛋白的功能25-26
• 1.5.2 黏蛋白家族的序列和結(jié)構(gòu)26-27
• 1.5.3 黏蛋白MUC127-29
• 1.6 選題意義及研究內(nèi)容29-30
• 參考文獻30-34
• 第二章 單激發(fā)-雙通道成像策略用于細胞表面特定糖蛋白上糖型的分析34-65
• 2.1 引言34-36
• 2.2 實驗部分36-43
• 2.2.1 材料和試劑36-37
• 2.2.2 儀器設(shè)備37
• 2.2.3 細胞培養(yǎng)37-38
• 2.2.4 核殼結(jié)構(gòu)的上轉(zhuǎn)換納米粒子NaYF_4：Er/Gd/Yb@NaGdF_4的合成38
• 2.2.5 合成Oleate-free UNP38-39
• 2.2.6 合成A30-COOH修飾的UNP(A30-UNP)39
• 2.2.7 合成和核酸適配體功能化的UNP(Apt-UNP)39
• 2.2.8 細胞免疫分析實驗39-40
• 2.2.9 流式細胞分析驗證核酸適配體特異性40
• 2.2.10 共聚焦顯微成像分析驗證核酸適配體特異性40
• 2.2.11 UNP表面Apt的裝載量40-41
• 2.2.12 掃描電鏡及透射電鏡表征Apt-UNP在細胞表面特定位點上的識別41
• 2.2.13 體外雙通道能量共振轉(zhuǎn)移(D-LRET)實驗41
• 2.2.14 MUC1上鹽藻糖的成像及正交標記41-42
• 2.2.15 雙通道成像及數(shù)據(jù)分析42-43
• 2.2.16 衣霉素處理阻礙N-型糖的糖基化43
• 2.3 結(jié)果與討論43-62
• 2.3.1 方案設(shè)計43-44
• 2.3.2 UNP的功能化及表征44-45
• 2.3.2.1 TEM表征44-45
• 2.3.2.2 其它表征方法45
• 2.3.3 免疫熒光法證明細胞表面MUC1的表達45-46
• 2.3.4 核酸適配體S2.2的特異性驗證46-47
• 2.3.4.1 流式細胞法46-47
• 2.3.4.2 激光共聚焦顯微成像法47
• 2.3.5 Apt-UNP與MUC1~+細胞的特異性結(jié)合47-48
• 2.3.6 電鏡實驗表征Apt-UNP在細胞表面的分布48-49
• 2.3.6.1 SEM實驗48-49
• 2.3.6.2 基于TEM的共定位實驗49
• 2.3.7 D-LRET體系中能量受體的選擇49-50
• 2.3.8 體外實驗驗證D-LRET50-51
• 2.3.9 體外實驗排除兩組LRET間的相互干擾51-52
• 2.3.9.1 熒光激發(fā)實驗51-52
• 2.3.9.2 LRET1與LRET2信號間的相互影響52
• 2.3.10 體外實驗驗證LRET信號強度與能量受體濃度的關(guān)系52-53
• 2.3.11 基于單LRET的MUC1上巖藻糖的成像53-54
• 2.3.12 代謝時間的優(yōu)化54-55
• 2.3.13 基于D-LRET的MUC1上的雙糖成像55-56
• 2.3.14 細胞表面D-LRET的驗證56-57
• 2.3.15 終端糖巖藻糖和唾液酸的相對表達量分析57-60
• 2.3.15.1 糖內(nèi)標成像57-59
• 2.3.15.2 D-LRET成像成像數(shù)據(jù)分析59-60
• 2.3.16 蛋白分子內(nèi)D-LRET的驗證60-61
• 2.3.17 D-LRET效率61
• 2.3.18 藥物處理下巖藻糖/唾液酸的動態(tài)變化61-62
• 2.4 結(jié)論62-63
• 參考文獻63-65
• 附錄65-66
• 致謝66-68

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李慶,李輝,蘇斌,孟祥豹,蔡孟深,李中軍;用糖基化反應(yīng)分離4半乳糖基-2-疊氮-2-脫氧甘露糖1-硝酸酯及其葡萄糖型異構(gòu)體[J];北京大學學報(醫(yī)學版);2001年03期

2 李華;山本一夫;大澤利昭;;Erythrina variegata凝集素的糖結(jié)合特異性[J];中國生化藥物雜志;1992年02期

3 ;[J];;年期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王繼峰;質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測技術(shù)用于甲胎蛋白特異糖型的定量分析及其臨床應(yīng)用[D];北京工業(yè)大學;2014年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳娜;單激發(fā)-雙通道成像策略用于細胞表面特定糖蛋白上糖型的分析[D];南京大學;2016年

，

本文編號：888591