傳統(tǒng)的細(xì)胞收獲法是采用胰蛋白酶消化,然而胰蛋白酶的消化不可避免地降解細(xì)胞膜蛋白和沉積的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM),導(dǎo)致細(xì)胞活力降低甚至某些功能的喪失,影響治療級細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量。聚(N-異丙基丙烯酰胺)(PNIPAM)是一種可用于細(xì)胞培養(yǎng)與溫控脫附的溫敏性智能材料,然而,PNIPAM溫敏性材料存在細(xì)胞脫附速率慢且細(xì)胞成片脫落的問題,影響其在細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)用。為此,本文通過不同基材的微球,制備了接枝PNIPAM溫敏性微球,并通過控制溫度實現(xiàn)了細(xì)胞在微球上的貼附、擴增和分散脫附。本文首先以Cytodex 3和SiO2微球為基材,分別采用“Grafting to”法和“Grafting from”法成功制備了 PNIPAM-Cytodex 3微球和PNIPAM-SiO2微球,并以Hela細(xì)胞為對象,考察了該微球?qū)?xì)胞貼附、生長以及脫附的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),這兩種微球均在一定程度上可支持Hela細(xì)胞的貼附與生長,但都未能實現(xiàn)細(xì)胞的溫控脫附。其次,以聚苯乙烯微球為基材,通過“Grafting from”法制備了不同PNIPAM接枝量的聚苯乙烯微球。利用Hela細(xì)胞評估不同PNIPAM接枝量的聚苯乙烯微球?qū)?xì)胞...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 智能響應(yīng)材料
    1.2 溫度響應(yīng)材料
        1.2.1 天然溫敏聚合物
        1.2.2 醚類溫敏聚合物
        1.2.3 酰胺類溫敏聚合物
    1.3 溫敏性微球的制備
        1.3.1 溫敏性微球的基材
        1.3.2 溫敏性微球制備方法
    1.4 本研究的內(nèi)容和意義
第2章 材料與方法
    2.1 實驗儀器設(shè)備
    2.2 實驗材料與試劑
        2.2.1 培養(yǎng)基與血清
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)器材
        2.2.3 微球
        2.2.4 化學(xué)試劑
        2.2.5 其他試劑
    2.3 實驗方法
        2.3.1 PNIPAM-Cytodex 3的制備
        2.3.2 PNIPAM-SiO₂的制備
        2.3.3 PNIPAM-Polystyrene的制備
        2.3.4 傅里葉變換紅外光譜分析
        2.3.5 核磁共振氫譜分析
        2.3.6 微球表面元素含量分析
        2.3.7 Cytodex 3微球的預(yù)處理
        2.3.8 細(xì)胞培養(yǎng)孔板的預(yù)處理
        2.3.9 SiO₂微球和聚苯乙烯微球的滅菌
        2.3.10 PNIPAM-Cytodex 3上Hela細(xì)胞的培養(yǎng)與收獲
        2.3.11 PNIPAM-SiO₂和PNIPAM-Polystyrene上Hela細(xì)胞的培養(yǎng)與收獲
        2.3.12 PNIPAM-Polystyrene上MSCs細(xì)胞的培養(yǎng)與收獲
        2.3.13 溫敏收獲的細(xì)胞的再增殖能力檢測
        2.3.14 MSCs細(xì)胞分化能力檢測
        2.3.15 細(xì)胞計數(shù)
        2.3.16 細(xì)胞死活染色
        2.3.17 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 PNIPAM修飾的Cytodex 3和SiO₂微球制備
    3.1 PNIPAM修飾的Cytodex 3微球制備與表征
        3.1.1 PNIPAM-Cytodex 3微球的制備
        3.1.2 產(chǎn)物的表征
    3.2 PNIPAM-Cytodex 3微球應(yīng)用于Hela細(xì)胞的體外培養(yǎng)
        3.2.1 Hela細(xì)胞在PNIPAM-Cytodex 3微球上的貼附
        3.2.2 Hela細(xì)胞在PNIPAM-Cytodex 3微球上的擴增
        3.2.3 Hela細(xì)胞在PNIPAM-Cytodex 3微球上的降溫脫附
    3.3 PNIPAM修飾的SiO₂微球制備與表征
        3.3.1 PNIPAM-SiO₂微球的制備
        3.3.2 產(chǎn)物的表征
    3.4 PNIPAM-SiO₂應(yīng)用于Hela細(xì)胞的體外培養(yǎng)
        3.4.1 Hela細(xì)胞在PNIPAM-SiO₂上的貼附
        3.4.2 Hela細(xì)胞在PNIPAM-SiO₂上的擴增
        3.4.3 Hela細(xì)胞在PNIPAM-SiO₂上的降溫脫附
    3.5 本章小結(jié)
第4章 PNIPAM修飾的聚苯乙烯微球的制備
    4.1 PNIPAM修飾的聚苯乙烯微球制備與表征
        4.1.1 PNIPAM修飾的聚苯乙烯微球的制備
        4.1.2 PNIPAM修飾的聚苯乙烯微球的表征
    4.2 PNIPAM-Polystyrene應(yīng)用于Hela細(xì)胞的體外培養(yǎng)
        4.2.1 Hela細(xì)胞在PNIPAM-Polystyrene上的貼附
        4.2.2 Hela細(xì)胞在PNIPAM-Polystyrene上的擴增
        4.2.3 Hela細(xì)胞在PNIPAM-Polystyrene上的降溫脫附
        4.2.4 Hela細(xì)胞的再增殖能力
    4.3 PNIPAM-Polystyrene應(yīng)用于MSCs細(xì)胞的體外培養(yǎng)
        4.3.1 MSCs細(xì)胞在PNIPAM-Polystyrene上的貼附
        4.3.2 MSCs細(xì)胞在PNIPAM-Polystyrene上的擴增
        4.3.3 MSCs細(xì)胞在PNIPAM-Polystyrene上的降溫脫附
        4.3.4 MSCs細(xì)胞的再增殖能力
        4.3.5 MSCs細(xì)胞的分化能力
    4.4 本章小結(jié)
第5章 全文總結(jié)與展望
    5.1 全文總結(jié)
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄



本文編號：3808855