貴金屬納米簇以其具有光致發(fā)光、生物相容性等優(yōu)點,已被廣泛用于生物檢測分析領域。然而,金屬納米簇的制備過程中大多需要外加還原劑,而還原劑的加入將影響模板的生物功能。并且在金屬納米簇的生物檢測應用中,多數(shù)檢測方法涉及偶聯(lián)和標記的過程,步驟復雜不易操作。因此,發(fā)展一種無需還原劑且操作簡單的金屬納米簇制備方法對其在生物檢測方面的應用有重要意義。蛋白激酶作為生命體內重要的激酶,其活性和濃度與很多重大疾病和癌癥緊密關聯(lián),因此建立高靈敏且操作簡單的蛋白激酶檢測方法,不僅可以提供癌癥早期的篩查,還有助于其他磷酸化相關癌癥的發(fā)現(xiàn)和抗癌新藥的篩選。本論文致力于研究以多肽-金屬納米簇為熒光探針,設計一系列綠色、免標記、操作簡單且靈敏的檢測蛋白激酶新方法,為磷酸化相關疾病的早期診斷及抗癌藥物的篩選提供幫助。主要研究內容如下:1、以多肽-金納米簇（peptide-Au NCs）為熒光探針,基于Zr4+能夠誘導磷酸化的peptide-Au NCs發(fā)生團聚的原理,構建了一種無需標記、靈敏度高、操作簡單的檢測蛋白激酶CK2的方法。其中,以多肽為模板,通過多肽中的酪氨酸將Au3+還原成Au NCs,并且通過半胱氨酸捕獲... 

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 金屬納米簇概述
        1.1.1 金屬納米簇定義
        1.1.2 金屬納米簇特性
        1.1.3 金屬納米簇制備
            1.1.3.1 以巰基化合物為配體制備金屬納米簇
            1.1.3.2 以聚合物或樹枝狀化合物為配體制備金屬納米簇
            1.1.3.3 以寡核苷酸DNA為配體制備金屬納米簇
            1.1.3.4 以蛋白質為配體制備金屬納米簇
    1.2 金屬納米簇的應用
        1.2.1 檢測金屬離子
        1.2.2 檢測小分子
        1.2.3 檢測DNA和miRNAs
        1.2.4 檢測蛋白質
        1.2.5 生物標記和生物成像
    1.3 蛋白質磷酸化和蛋白激酶
        1.3.1 蛋白質磷酸化概述
        1.3.2 蛋白激酶概述
        1.3.3 蛋白激酶分類
            1.3.3.1 蛋白激酶CK2
            1.3.3.2 蛋白激酶A
        1.3.4 檢測蛋白激酶的意義
        1.3.5 蛋白激酶的檢測方法
    1.4 本論文主要研究內容
第2章 原位制備金納米簇免標記熒光檢測蛋白激酶活性
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 化學試劑
        2.2.2 儀器設備
        2.2.3 多肽-金納米簇制備
        2.2.4 檢測蛋白激酶CK2活性
        2.2.5 蛋白激酶CK2抑制劑的檢測及IC_(50)分析
        2.2.6 熒光測量
    2.3 結果與討論
        2.3.1 多肽-金納米簇表征
        2.3.2 多肽-金納米簇體系檢測蛋白激酶CK2活性原理
        2.3.3 實驗條件的優(yōu)化
        2.3.4 熒光檢測蛋白激酶CK2
        2.3.5 共振光散射檢測蛋白激酶CK2
        2.3.6 在人體血清中檢測蛋白激酶CK2的抑制劑以及其IC_(50)
    2.4 結論
第3章 基于磷酸根抑制羧肽酶Y水解多肽銀納米簇熒光檢測多肽磷酸化
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 化學試劑
        3.2.2 儀器設備
        3.2.3 蛋白激酶CK2催化多肽磷酸化及羧肽酶Y水解多肽
        3.2.4 多肽-銀納米簇制備
        3.2.5 蛋白質磷酸化檢測（熒光光譜檢測）
        3.2.6 蛋白質磷酸化抑制劑檢測及IC_(50)分析
    3.3 結果與討論
        3.3.1 基于磷酸根抑制羧肽酶Y水解多肽的熒光檢測蛋白質磷酸化原理
        3.3.2 多肽-銀納米簇表征
        3.3.3 實驗條件的優(yōu)化
        3.3.4 蛋白質磷酸化檢測
        3.3.5 蛋白質磷酸化抑制劑檢測
    3.4 結論
第4章 基于羧肽酶Y對多肽-金納米簇的猝滅作用熒光“turn on”檢測蛋白激酶
    4.1 引言
    4.2 實驗部分
        4.2.1 化學試劑
        4.2.2 儀器設備
        4.2.3 多肽-金納米簇制備
        4.2.4 檢測蛋白激酶PKA活性
        4.2.5 蛋白激酶PKA抑制劑檢測及IC_(50)值分析
    4.3 結果與討論
        4.3.1 多肽-金納米簇表征
        4.3.2 多肽-金納米簇熒光“turn on”檢測蛋白激酶PKA原理
        4.3.3 實驗條件的優(yōu)化
        4.3.4 蛋白激酶PKA檢測
        4.3.5 在人體血清中檢測蛋白激酶PKA抑制劑
    4.4 結論
第5章 基于金納米簇-量子點雙波長發(fā)射比率熒光探針檢測蛋白激酶
    5.1 引言
    5.2 實驗部分
        5.2.1 實驗試劑
        5.2.2 儀器設備
        5.2.3 多肽-金納米簇制備
        5.2.4 制備羧基化的CdSe/ZnS QDs@SiO_2納米粒子
        5.2.5 制備QDs@SiO_2@Au NCs復合納米材料
        5.2.6 檢測蛋白激酶PKA活性
        5.2.7 蛋白激酶PKA抑制劑的檢測及IC_(50)分析
    5.3 結果與討論
        5.3.1 peptide-AuNCs及QDs@SiO_2@Au NCs復合納米材料表征
        5.3.2 實驗條件的優(yōu)化
        5.3.3 以QDs@SiO_2@Au NCs復合納米材料為比率熒光探針檢測蛋白激酶PKA原理
        5.3.4 蛋白激酶PKA檢測
        5.3.5 在人體血清中檢測蛋白激酶PKA抑制劑以及IC_(50)實驗
    5.4 結論
第6章 基于多肽模板化的兩種金屬納米簇同時檢測蛋白激酶PKA和CK2
    6.1 引言
    6.2 實驗部分
        6.2.1 試劑
        6.2.2 儀器設備
        6.2.3 發(fā)藍光的多肽-銅納米簇制備
        6.2.4 發(fā)紅光的多肽-金納米簇制備
        6.2.5 檢測蛋白激酶PKA活性
        6.2.6 檢測蛋白激酶CK2活性
        6.2.7 同時檢測蛋白激酶CK2和蛋白激酶PKA活性
    6.3 結果與討論
        6.3.1 多肽-銅納米簇與多肽-金納米簇表征
        6.3.2 同時檢測蛋白激酶PKA和CK2活性原理
        6.3.3 分別檢測兩種蛋白激酶活性
        6.3.4 同時檢測兩種蛋白激酶活性
    6.4 結論
第7章 總結與展望
參考文獻
致謝
攻讀學位期間的研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于銅納米簇的硝酸根微傳感器的研究[J]. 李洋,孫楫舟,邊超,佟建華,夏善紅.  分析化學. 2011(11)



本文編號：3693635