核酸由于無與倫比的可編程性,已被積極開發(fā)各種精致的納米結(jié)構(gòu)。DNA相互作用的可預(yù)測性使納米級尺寸的2D和3D DNA結(jié)構(gòu)的組裝成為了可能。DNA本質(zhì)上是化學(xué)惰性的,基于未修飾DNA的納米結(jié)構(gòu)大多缺乏功能。但是,可以通過對DNA納米結(jié)構(gòu)進(jìn)行化學(xué)修飾來獲得功能,并且機(jī)會(huì)是無限的。尤其是具有可定制功能和精確尋址能力的框架核酸在生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用中具有廣闊的前景。本文主要研究內(nèi)容有以下幾部分:1.利用DNA的可編程性,構(gòu)建成一種能夠特異性識別MUC-1蛋白且同時(shí)檢測Survivin mRNA與TK1 mRNA的星型DNA納米探針。DNA納米星上有分別與Survivin mRNA和TK1 mRNA堿基互補(bǔ)配對的DNA鏈,其與Survivin mRNA與TK1 mRNA結(jié)合,使原來因相互靠近而熒光猝滅的熒光基團(tuán)分開從而分別使花菁3（Cy3）與花菁5（Cy5）的熒光恢復(fù),通過熒光信號的變化來檢測細(xì)胞內(nèi)Survivin mRNA與TK1 mRNA,實(shí)現(xiàn)了對靶標(biāo)的靈敏檢測。2.DNA螺旋結(jié)構(gòu)具有疏水內(nèi)部結(jié)構(gòu)和高度可預(yù)測性以及帶負(fù)電荷的外部結(jié)構(gòu),使其與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)不同。DNA雜交形成的結(jié)構(gòu)具有動(dòng)態(tài)性質(zhì)。設(shè)計(jì)合成了... 

【文章來源】：青島科技大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 DNA納米技術(shù)
        1.1.1 DNA納米技術(shù)的起源
        1.1.2 基于模塊的自底向上裝配
            1.1.2.1 寡酸模塊核苷
            1.1.2.2 由張力三角形圖塊組裝而成的3DDNA晶體
            1.1.2.3 DNA多面體
                1.1.2.3.1 DNA立方體
                1.1.2.3.2 DNA四面體
                1.1.2.3.3 DNA八面體
                1.1.2.3.4 DNA納米棱鏡
            1.1.2.4 點(diǎn)星狀圖塊
                1.1.2.4.1 DNA十二面體
        1.1.3 DNA折紙
        1.1.4 單鏈模塊組裝
        1.1.5 納米粒子模板DNA納米結(jié)構(gòu)
        1.1.6 DNA納米結(jié)構(gòu)構(gòu)建的其他方法
            1.1.6.1 過渡金屬離子用于建立金屬與DNA的連接和組裝
            1.1.6.2 滾圓擴(kuò)增構(gòu)建DNA納米結(jié)構(gòu)
    1.2 DNA納米水凝膠
    1.3 DNA納米結(jié)構(gòu)的藥物遞送
        1.3.1 進(jìn)入器官
        1.3.2 進(jìn)入細(xì)胞
        1.3.3 通過DNA納米技術(shù)輸送藥物分子
            1.3.3.1 小分子
                1.3.3.1.1 熒光染料
                1.3.3.1.2 阿霉素
            1.3.3.2 寡核苷酸
                1.3.3.2.1 CpGs
                1.3.3.2.2 siRNA
                1.3.3.2.3 micro RNA
                1.3.3.2.4 CRISPR-Cas
                1.3.3.2.5 適體
                1.3.3.2.6 脫氧核酶
            1.3.3.3 蛋白質(zhì)
            1.3.3.4 無機(jī)納米顆粒
    1.4 細(xì)胞內(nèi)的檢測
        1.4.1 用于細(xì)胞內(nèi)mRNA檢測的NanoFlares
        1.4.2 分子信標(biāo)修飾的AuNPs用于細(xì)胞內(nèi)mRNA檢測
    1.5 本文研究思路
第二章 基于DNA納米星對細(xì)胞內(nèi)TK1 mRNA與Survivin mRNA的高效檢測
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.3.1 DNA納米星制備
            2.2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.3.3 CCK-8分析
            2.2.3.4 細(xì)胞成像
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 DNA納米星的細(xì)胞熒光成像的實(shí)驗(yàn)原理
        2.3.2 材料表征
            2.3.2.1 DNA納米星的透射電鏡及動(dòng)態(tài)光散射表征
            2.3.2.2 聚丙烯酰胺電泳分析表征DNA納米星
                2.3.2.2.1 DNA納米星的組裝過程的聚丙烯酰胺電泳表征
                2.3.2.2.2 DNA納米星的觸發(fā)過程的聚丙烯酰胺電泳表征
                2.3.2.2.3 DNA納米星的穩(wěn)定性的聚丙烯酰胺電泳表征
        2.3.3 實(shí)驗(yàn)可行性探究
        2.3.4 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化
        2.3.5 DNA納米星對Survivin mRNA及TK1 mRNA的熒光檢測
            2.3.5.1 DNA納米星對Survivin mRNA的熒光檢測
            2.3.5.2 DNA納米星對TK1 mRNA的熒光檢測
        2.3.6 DNA納米星對Survivin mRNA及TK1 mRNA的特異性
        2.3.7 DNA納米星的熒光成像
        2.3.8 DNA納米星的毒性研究
    2.4 本章小結(jié)
第三章 DNA骨架的二十面體作為藥物載體用于活細(xì)胞中生存素（Survivin）RNA與胸苷激酶（TK1）RNA的同時(shí)比率型檢測
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            3.2.3.1 五路DNA的合成
            3.2.3.2 半二十面體DNA的合成
            3.2.3.3 二十面體DNA的合成及gelonin蛋白的封裝
            3.2.3.4 細(xì)胞培養(yǎng)
            3.2.3.5 CCK-8分析
            3.2.3.6 細(xì)胞成像
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 DNA骨架的二十面體的細(xì)胞熒光成像的實(shí)驗(yàn)原理
        3.3.2 材料表征
            3.3.2.1 DNA骨架的二十面體的透射電鏡表征
            3.3.2.2 DNA骨架的二十面體的動(dòng)態(tài)光散射表征
            3.3.2.3 DNA骨架的二十面體的聚丙烯酰胺電泳分析表征
                3.3.2.3.1 五路DNA的聚丙烯酰胺電泳分析表征
                3.3.2.3.2 半二十面DNA及二十面體DNA的瓊脂糖凝膠電泳分析表征
            3.3.2.4 實(shí)驗(yàn)可行性探究
            3.3.2.5 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化
            3.3.2.6 DNA骨架二十面體對Survivin mRNA及TK1 mRNA的熒光檢測
            3.3.2.7 DNA骨架二十面體對Survivin mRNA及TK1 mRNA的特異性
            3.3.2.8 DNA骨架二十面體的熒光成像
            3.3.2.9 DNA骨架二十面體的毒性及凋亡率的研究
    3.4 本章小結(jié)
第四章 DNA交聯(lián)的水凝膠包覆的SiNPs熒光探針檢測活細(xì)胞中的三磷酸腺苷
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            4.2.3.1 SiNPs-MA-DNA1結(jié)構(gòu)的構(gòu)建
            4.2.3.2 MA-DNA2結(jié)構(gòu)的構(gòu)建
            4.2.3.3 SiNPs-PMA-DNA的制備1
            4.2.3.4 PMA-DNA的制備2
            4.2.3.5 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的合成
            4.2.3.6 細(xì)胞培養(yǎng)
            4.2.3.7 CCK-8分析
            4.2.3.8 體外細(xì)胞攝取和成像
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的細(xì)胞熒光成像的實(shí)驗(yàn)原理
        4.3.2 材料表征
            4.3.2.1 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的透射電鏡表征
            4.3.2.2 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的動(dòng)態(tài)光散射表
            4.3.2.3 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的紫外吸收表征
            4.3.2.4 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的zeta電位表征
            4.3.2.5 聚丙烯酰胺電泳分析DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠
            4.3.2.6 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的紅外光譜表征
            4.3.2.7 SiNPs和DHSN的熱重分析（TGA）
        4.3.3 實(shí)驗(yàn)可行性探究
        4.3.4 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化
        4.3.5 在目標(biāo)ATP存在下優(yōu)化pH
        4.3.6 ATP和 DHSN的化學(xué)計(jì)量分析
        4.3.7 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠對ATP的熒光檢測
        4.3.8 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠對ATP的特異性
        4.3.9 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的適用性研究
        4.3.10 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的穩(wěn)定性研究
            4.3.10.1 用熒光發(fā)射光譜評估DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的穩(wěn)定性
            4.3.10.2 用凝膠電泳評估DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的穩(wěn)定性
        4.3.11 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的毒性研究
        4.3.12 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的熒光成像
            4.3.12.1 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠的隨時(shí)間的熒光成像
            4.3.12.2 DNA交聯(lián)的SiNPs納米水凝膠在抑制劑和促進(jìn)劑下的熒光成像
    4.4 本章小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號：3147530