多肽是由多種氨基酸通過酰胺鍵相連形成的特殊生物大分子。所有的氨基酸都具有相似的結(jié)構(gòu)和不同的“R”側(cè)基。這些“R”基團(tuán)的物理化學(xué)性質(zhì)往往各不相同,譬如有的帶有正電荷,有的帶有負(fù)電荷,有的容易在水介質(zhì)中電離,有的非常疏水,有的側(cè)鏈體積龐大,分子振動(dòng)模式多樣,而最簡(jiǎn)單的側(cè)鏈只是一個(gè)氫原子。這樣巨大的差異性決定了多肽結(jié)構(gòu)及其功能具有其它任何生物大分子,比如核酸和多糖以及磷脂,都無可比擬的多樣性。因此,具有不同R基團(tuán)的氨基酸通過排列組合就能產(chǎn)生多種功能型多肽,這些功能肽在電化學(xué)生物傳感領(lǐng)域具有很好的應(yīng)用潛力。多肽的優(yōu)點(diǎn)是合成方法簡(jiǎn)單、易于被化學(xué)修飾、在儲(chǔ)存過程中具有良好的穩(wěn)定性,不易被降解以及易于與其他方法或技術(shù)結(jié)合。因此,近年來多肽材料在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。多肽自組裝作為自然界普遍存在的分子自組裝現(xiàn)象之一,其自組裝行為的研究對(duì)理解生命現(xiàn)象、仿生制備、構(gòu)建功能材料以及解決疑難疾病等都具有十分重要的意義。通過合理調(diào)控多肽分子結(jié)構(gòu)以及給予合適的外界的刺激,多肽分子可以通過多重非共價(jià)鍵作用自發(fā)或觸發(fā)地組裝形成特異形態(tài)和功能的組裝體。電化學(xué)生物傳感器是使用電極作為信號(hào)轉(zhuǎn)換器使用生物物質(zhì)作為敏... 

【文章來源】：濟(jì)南大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

使用血小板驅(qū)動(dòng)的肽探針的構(gòu)成來評(píng)估Aβ的變性活性

濟(jì)南大學(xué)碩士學(xué)位論文13評(píng)估提供一種新手段[58]。圖2.2設(shè)計(jì)探針的序列2.3.2對(duì)Aβ是否固著在傳感表面進(jìn)行表征如圖2.1所示和上文所述，本研究首先使用電化學(xué)阻抗譜（EIS）進(jìn)行驗(yàn)證（圖2.3ac）。將傳感表面與血小板樣品（與聚酪氨酸作為共底物混合）或僅與聚酪氨酸一起孵育。與圖2.1中描述的標(biāo)準(zhǔn)傳感程序進(jìn)行比較。比較得到的EIS圖如圖2.3a所示，在沒有添加血小板的情況下（曲線B）的光譜圖顯示幾乎沒有阻抗，這表明在沒有血小板分泌Aβ以及沒有隨后的過氧化物酶樣活性的情況下，聚酪氨酸在傳感表面上沒有被保留。相反，在使用洗滌劑經(jīng)過劇烈的漂洗之后，實(shí)驗(yàn)組殘留物阻抗（曲線A）仍然明顯大于對(duì)照組，表明血小板分泌的Aβ和聚酪氨酸共底物得到共價(jià)保留。隨著孵育時(shí)間的逐漸延長(zhǎng)，停止血小板與聚酪氨酸混合物的孵育[59]。之后如果不進(jìn)行劇烈沖洗，立即將其表面用于EIS測(cè)量。所得的光譜圖（圖2.3b）在孵育時(shí)間方面僅表現(xiàn)出中等程度的差異。所有記錄的阻抗都表明大量血小板已經(jīng)與傳感表面接觸。相反，如果重復(fù)相同的步驟，但是在每次EIS測(cè)量之前都進(jìn)行劇烈沖洗，結(jié)果顯示隨著孵育時(shí)間的增加阻抗也逐漸增加（圖2.3c），這表明在經(jīng)過劇烈沖洗之后共價(jià)物得到了很好的保留并且隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng)共價(jià)物得到了很好的積累[60]。再將這些結(jié)果通過表面等離子體共振（SPR）傳感圖得到反映（圖2.3d13），其中，相同血小板的積聚時(shí)間幾乎相同，導(dǎo)致了幾乎相同的“開關(guān)時(shí)間”曲線，而在劇烈沖洗之前逐漸延長(zhǎng)孵育時(shí)間會(huì)使共價(jià)物得到較大的

多肽納米軟材料用于疾病標(biāo)記物的檢測(cè)14保留（來自d3至d1）。綜上所述，這些結(jié)果都證實(shí)在血小板活性被激活之后，聚酪氨酸和血小板分泌的淀粉樣蛋白Aβ得到了共價(jià)保留。圖2.3（a）（c）為在各種條件下，肽探針修飾的電極上記錄的電化學(xué)阻抗譜圖（EIS）：（a）以100×106/mL血小板孵育，并將在空白緩沖液中的孵育作為對(duì)照；（b）與相同靶標(biāo)一起孵育更長(zhǎng)的時(shí)間，而無需進(jìn)一步?jīng)_洗；（c）在與（b）相同的操作之后，進(jìn)行劇烈沖洗；（d）讓相同濃度的血小板在d3到d1之間流過肽探針修飾的傳感表面而獲得的表面等離子體共振（SPR）傳感圖。為了進(jìn)一步鞏固上述結(jié)果，將血小板（沒有添加聚酪氨酸）孵育后，用5％的吐溫-20輕輕沖洗肽探針表面。使用硫黃素-T（一種靶向的Aβ染料）去檢驗(yàn)血小板分泌的傳感表面捕獲的Aβ是否存在[61]。盡管為了除去血小板進(jìn)行的漂洗同時(shí)也除去了一些被表面捕獲的Aβ，但仍可以明顯地觀察到硫黃素-T的電化學(xué)反應(yīng)（圖2.4a），且其強(qiáng)度隨血小板濃度的增加而增加，這表明成功捕獲了血小板樣品中的Aβ[62]。使用等溫量熱法（ITC）也證實(shí)了捕獲的血小板分泌出Aβ，同時(shí)還證實(shí)了表面探針和硫黃素-T與Aβ特異性結(jié)合的能力（圖2.4b，分別為左和右）。按照本實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)程序，在最終生成的表面產(chǎn)物中，存在二酪氨酸的熒光（圖2.4c），其熒光強(qiáng)度隨著血小板濃度的增加而增強(qiáng)，證實(shí)存在共價(jià)交聯(lián)的產(chǎn)物，這種共價(jià)交聯(lián)產(chǎn)物是含有Aβ的酪氨酸以及聚酪氨酸，它們之間依靠二酪氨酸鍵連接[63]。為了進(jìn)一步說明這一點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)又做了以下對(duì)照實(shí)驗(yàn)：在孵育血小板時(shí)不加入聚酪氨酸，用吐溫-20溫和漂洗后，可以觀察到一些交叉偶聯(lián)現(xiàn)象（圖2.4d，曲線A），表明血小板被催化了，這是Aβ自催化的交叉偶聯(lián)；在存在H2O2


本文編號(hào)：3042774