腫瘤是當(dāng)今世界直接危及人類生命的一種最常見、最嚴(yán)重的疾病,目前已成為全球頭號(hào)殺手。治療腫瘤的傳統(tǒng)方法主要包括手術(shù)切除、化學(xué)治療、放射治療等,大都對(duì)機(jī)體產(chǎn)生不同的損傷且治療效果不佳。近年來,納米藥物在腫瘤檢測、診斷及治療中取得了巨大的進(jìn)步,已成為抗腫瘤制劑研究的熱點(diǎn)之一。山奈酚(3,4',5,7-四羥基黃酮)是黃酮醇類化合物,存在于較多的藥用植物中,具有抗氧化、抗腫瘤、抗菌消炎等生物活性。為探討以山柰酚為抗癌活性成分的柔性脂質(zhì)體納米粒成為新型抗腫瘤藥物的可行性,本文利用乳化溶劑揮發(fā)法制備了山奈酚-柔性脂質(zhì)體納米粒,并對(duì)其形態(tài)、包封率、載藥量、體外釋放行為、藥物動(dòng)力學(xué)行為等進(jìn)行了研究。首先,建立了測定山奈酚柔性脂質(zhì)體納米粒中山奈酚含量的HPLC分析方法。實(shí)驗(yàn)所確立的色譜條件為:色譜柱:Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸水溶液(70:30,v/v,m L/m L);檢測波長為361 nm;流速是1.0 m L/min;進(jìn)樣量是10μL;柱溫30℃。方法學(xué)考察結(jié)果表明,山奈酚對(duì)照品在0.1 mg/m L~0.6 mg/m L濃度范圍內(nèi),峰面積與濃度關(guān)系呈良好的現(xiàn)線性關(guān)系,其回歸方程為A=457556C-25310(R2=0.9994)。此外,方法的精密度、回收率、穩(wěn)定性和專屬性等實(shí)驗(yàn)結(jié)果均滿足藥品檢測的要求。在建立上述分析方法的基礎(chǔ)上,本文通過低溫超速離心法對(duì)山奈酚納米粒的包封率和載藥量進(jìn)行了測定。其中,離心條件為:溫度:4℃,轉(zhuǎn)速:16000 r/min,離心時(shí)間25 min。該方法操作簡單,靈敏度高,適合測定山奈酚柔性脂質(zhì)體納米粒的包封率和載藥量。其次,本文優(yōu)化了利用溶劑揮發(fā)法制備山奈酚-柔性脂質(zhì)體納米粒的各項(xiàng)參數(shù)。以納米粒粒徑(Size)、粒徑分布(PDI)、包封率作為考察指標(biāo),利用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)考察了表面活性劑種類及濃度、水相體積、卵磷脂的濃度共四個(gè)因素對(duì)柔性脂質(zhì)體納米粒的影響,優(yōu)化了制備條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,其最佳制備條件為:向2 m L丙酮中加入山奈酚5 mg、卵磷脂20 mg,溶解,構(gòu)成油相;將去氧膽酸鈉作為表面活性劑,制成70 m L濃度為2%的水相;攪拌狀態(tài)下,將有機(jī)相慢慢滴入水相中得到混合溶液,超聲處理3分鐘,蒸去丙酮即可制成山奈酚-柔性脂質(zhì)體納米粒。按此最佳條件制備了三批的樣品,經(jīng)測定,它們的平均粒徑為217.5 nm,包封率為76.36%。在以上研究的基礎(chǔ)上,本文還探討了山奈酚柔性脂質(zhì)體納米粒凍干粉的制備方法。首先以凍干粉末的外觀、色澤、再分散性及包封率為考察指標(biāo),考察了凍干保護(hù)劑種類及用量,最終確定了以2%乳糖作為凍干保護(hù)劑。此外,還對(duì)凍干粉做了質(zhì)量評(píng)價(jià)與初步穩(wěn)定性研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,凍干粉外觀形態(tài)良好,凍干前后納米粒的粒徑和包封率變化均不大。經(jīng)測定,凍干粉在4℃保存6個(gè)月時(shí),其滲漏率為6.21%,載藥量下降0.61%,包封率和粒徑均無明顯的變化,說明其穩(wěn)定性良好。最后,本文對(duì)山奈酚-柔性脂質(zhì)體納米粒凍干粉的體外釋放過程與釋放規(guī)律進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示,山奈酚柔性脂質(zhì)體納米粒與Weibull模型釋放藥物的行為最為相似。大鼠體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)的相關(guān)參數(shù)表明,納米粒組和山奈酚乳劑組在相同劑量給藥的情況下,它們的AUC0-t(指梯形計(jì)算值)、t1/2(半衰期)、Cmin、DF和CL(清除率)均存在顯著性差異(P0.01),山奈酚柔性脂質(zhì)體納米粒組的t1/2(消除半衰期)是乳劑組的1.65倍。這些研究結(jié)果說明,山奈酚柔性脂質(zhì)體納米�？稍黾铀幬锱c腫瘤細(xì)胞的接觸時(shí)間,在一定程度上提高了藥物抗癌的療效�？傊�,本文采用乳化溶劑揮發(fā)法制備得到的山奈酚-柔性脂質(zhì)體納米粒,其形態(tài)圓整、包封率高、粒徑分布小、穩(wěn)定性好;體外釋藥實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,本文所制備的山奈酚-柔性脂質(zhì)體納米粒在一定程度上有緩釋作用,并且明顯改變了山奈酚的藥物動(dòng)力學(xué)行為,減緩了藥物的消除時(shí)間,提高了藥物的生物利用度。本論文的研究結(jié)果為山奈酚-柔性脂質(zhì)體納米粒在抗腫瘤方面的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：TB383.1;TQ464
【部分圖文】：

圖 2.1 山奈酚標(biāo)準(zhǔn)曲線山奈酚對(duì)照品溶液在 0.1 ~0.6 mg/mL 的濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)驗(yàn)壓干燥至恒重的山奈酚對(duì)照品 50.0 mg，置于 50 mL 量瓶中并定容至刻度，搖勻，制成濃度為 1.0 mg/mL 的儲(chǔ)備液，4密吸取儲(chǔ)備液 4.0 mL，置于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容g/mL 的山奈酚對(duì)照品溶液，按照 2.2.1.2 項(xiàng)的色譜條件進(jìn)樣其日內(nèi)精密度；每天進(jìn)樣 2 次，連續(xù)測定 3 天為其日間精.4。

第三章 山奈酚柔性脂質(zhì)體納米粒的制備工藝研究質(zhì)體納米粒表面形態(tài)觀察及粒度分布考察奈酚柔性脂質(zhì)體納米粒形態(tài)質(zhì)體納米粒的膠體分散體系是淡藍(lán)色納米粒溶液入 1 滴或者 2 滴山奈酚納米粒溶液，隨后將鎢酸上，進(jìn)行復(fù)染，染色時(shí)間為 2～3 min。再取 1 至液，滴入銅網(wǎng)（覆有支持膜）上，同時(shí)滴入磷鎢，染色時(shí)間為 2～3 min，等銅網(wǎng)上的溶液自然晾電子顯微鏡）下，仔細(xì)觀察山奈酚柔性脂質(zhì)體的。結(jié)果見圖 3.1，從其透射電鏡圖可以看出，類米粒的形態(tài)，其大小均勻，表面圓整，納米粒間

圖 3.2 山奈酚納米粒的粒度分布圖3.5 山奈酚柔性脂質(zhì)體納米粒制備方法的優(yōu)化3.5.1 單因素考察前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，影響山奈酚柔性脂質(zhì)體納米粒粒徑分布、包封率的主要因素有四個(gè)，分別是表面活性劑的種類、濃度、水相的體積、卵磷脂的濃度�，F(xiàn)就這四個(gè)單一因素進(jìn)行逐一考察。3.5.1.1 表面活性劑的種類的選擇保持以下條件不變：使用超聲探頭（250 W）；溫度保持 25 ℃；保持有機(jī)相不變，即山奈酚（3 mg）、卵磷脂（20 mg）溶解于 2 mL 丙酮中。保持水相體積不變，即 100 mL 溶液中表面活性劑濃度保持為 1%。實(shí)驗(yàn)所考察的表面活性劑分別為： Tween80、去氧膽酸鈉、膽酸鈉、Span80、甘草酸二鉀（KG）和油酸。
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本文編號(hào)：2842571