【摘要】：癌癥是威脅人類健康的重大疾病之一,近年來(lái),利用納米載體進(jìn)行的癌癥治療有望顯著提高藥物的負(fù)載量、利用度、降低對(duì)正常組織和細(xì)胞的毒性而備受關(guān)注。傳統(tǒng)的靶向方式包括介助于受體-配體識(shí)別作用的主動(dòng)靶向、增強(qiáng)的滲透和滯留效應(yīng)(EPR effect)的被動(dòng)靶向或者利用磁場(chǎng)誘導(dǎo)等。這些方法取得了一定的效果,但是不足之處也十分明顯。鑒于腫瘤細(xì)胞無(wú)氧糖酵解攝取葡萄糖后代謝排出大量乳酸,而使細(xì)胞膜表面帶有大量的負(fù)電荷這一生物物理特性。我們以兩種上皮細(xì)胞粘附因子(EpCAM)蛋白表達(dá)量不同、但是表面均帶較強(qiáng)負(fù)電荷的細(xì)胞系MCF-7和HeLa細(xì)胞為研究對(duì)象,對(duì)比研究靜電介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞識(shí)別與傳統(tǒng)受體-配體作用介導(dǎo)的識(shí)別效率的差異,并且借助磁性納米探針特有的光熱轉(zhuǎn)換效應(yīng),研究不同方式下腫瘤細(xì)胞結(jié)合后借助光熱效應(yīng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制效應(yīng)。結(jié)果顯示,正電磁性納米顆粒能夠更加快速和低能耗地與兩種腫瘤細(xì)胞結(jié)合并積累到足以抑制腫瘤細(xì)胞的量,而EpCAM抗體偶聯(lián)磁性納米顆粒需要更高溫度、更長(zhǎng)時(shí)間才能與MCF-7細(xì)胞大量結(jié)合并有效抑制,這種方式對(duì)EpCAM表達(dá)量偏低的HeLa細(xì)胞則幾乎無(wú)效,表明靜電靶向作為新型的物理靶向方式對(duì)比傳統(tǒng)的靶向方式更加高效、迅速、廣譜的特點(diǎn)。而為了推進(jìn)靜電靶向的方式朝實(shí)際應(yīng)用更近一步,我們使用胎牛血清(FBS)與納米顆粒共同孵育,使正電納米顆粒和負(fù)電納米顆粒的表面吸附FBS中的蛋白形成蛋白冠(protein corona),而我們驚奇的發(fā)現(xiàn)即使正電納米顆粒在吸附蛋白之后Zeta電位由正轉(zhuǎn)負(fù),正電納米顆粒也沒(méi)有喪失對(duì)腫瘤細(xì)胞膜的靜電靶向能力。我們通過(guò)一系列的測(cè)試表征,最終認(rèn)為這種現(xiàn)象的出現(xiàn)是由于蛋白冠在顆粒表面的不均勻分布造成的,雖然納米顆粒Zeta電位已經(jīng)又正轉(zhuǎn)負(fù),但是在納米顆粒表面仍然暴露有帶有正電荷的區(qū)域,而暴露的正電區(qū)域足以迅速結(jié)合腫瘤細(xì)胞,使得正電納米顆粒在生理?xiàng)l件下捕獲游離的腫瘤細(xì)胞。這一基本發(fā)現(xiàn)為在臨床環(huán)境中對(duì)全血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的敏感檢測(cè)開(kāi)辟了一條新的途徑,而且為正電納米顆粒直接用于體內(nèi)腫瘤的治療提供了可能性。
【學(xué)位授予單位】：青島科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R730.5;TB383.1
【圖文】：

圖 1.1 磁顆粒從外周血中富集循環(huán)腫瘤細(xì)胞的過(guò)程Fig. 1-1 Magnetic particles accumulate CTCs from peripheral blood近幾年，CTCs 免疫磁珠陰性富集法[21]逐漸開(kāi)始應(yīng)用于臨床，在將紅細(xì)裂解之后，利用偶聯(lián)了 CD45[22]抗體（CD45 在所有白細(xì)胞上均有表達(dá)，稱為細(xì)胞共同抗原 leukocyte common antigen,LCA）的磁珠將血液中大量的白細(xì)胞 除 ， 而 剩 余 的 細(xì) 胞 使 用 免 疫 熒 光 染 色 - 染 色 體 熒 光 原 位 雜 交munofluo-rescence in situ hybridization，iFISH)[23]法來(lái)染色區(qū)分 CTCs 和殘余細(xì)胞。Yilin Li 等[24]利用偶聯(lián) Anti-CD45 的免疫磁珠去除血液中的白細(xì)胞并且用獨(dú)特的綜合濃縮-免疫熒光染色法（subtraction enrichment (SET) andmunostaining-fluorescence in situ hybridization），得到清晰的熒光圖片圖 中Cs 呈現(xiàn) DAPI 陽(yáng)性/FISH 陽(yáng)性/CKs 陽(yáng)性/CD45 陰性可以與殘余的少量白細(xì)胞PI 陽(yáng)性/FISH 陰性/CKs 陰性/CD45 陽(yáng)性明確的區(qū)分出來(lái)，最終在臨床血樣與llSearch 系統(tǒng)對(duì)比中取得了更高效的 CTC 捕獲率。此方法在理論上來(lái)說(shuō)可以于所以類別腫瘤 CTCs 的檢測(cè)，且對(duì) CTCs 傷害較小，獲取的細(xì)胞可以繼續(xù)行后續(xù)的鑒定分析，但是具體使用效果依然有待于臨床使用的后續(xù)驗(yàn)證。

采用 SET-iFISH 鑒定的循環(huán)腫瘤細(xì)胞的特性，DAPI 陽(yáng)性/FISH 陽(yáng)性/C/CD45 陰性 1-2 Images of CTCs revealed by SET-iFISH identified by SET-iFISH are Due)/FISH+ (aneuploid chromosome 8, orange)/CKs+ or  (green) andCD45-2 磁共振成像成像（MRI, magnetic resonance imaging）[25]是一種臨床應(yīng)用檢測(cè)手段，具有損傷小、無(wú)輻射分辨率高等有點(diǎn)。超順磁 F改變目標(biāo)組織中氫質(zhì)子的弛豫性質(zhì)，作為造影的對(duì)比劑，將織顯著的區(qū)分出來(lái)。超順磁 Fe3O4納米顆粒作為造影劑[26]可像的對(duì)比度和分辨率，提高臨床檢查的靈敏度而且毒性較低3 腫瘤靶向3O4納米顆粒進(jìn)行合適的表面功能化修飾，并在顆粒的表面或治療的藥物、RNA 等[27]，采用靜脈注射等方法將其注射到體的超順磁性 Fe3O4納米顆粒在無(wú)外加磁場(chǎng)時(shí)分散良好，從而使用外加磁場(chǎng)控制磁顆粒的富集位點(diǎn)以及釋放時(shí)機(jī)，便可以

圖 1-3 正在進(jìn)行光熱治療的荷瘤小鼠umor-bearing mice were being treated with photo面電荷與無(wú)氧糖酵解，腫瘤細(xì)胞即使在氧氣充足的條件下也量，被稱為瓦爾堡效應(yīng)(Warburg effect)[3產(chǎn)生 2 個(gè) ATP，而有氧代謝 1 分子葡萄對(duì)葡萄糖的利用率較低卻又生長(zhǎng)繁殖十分糖進(jìn)而分泌大量的乳酸，當(dāng)乳酸根陰離+、Na+等陽(yáng)離子，使得癌細(xì)胞的表面帶有細(xì)胞獲取能量以有氧代謝為主，細(xì)胞表們治療癌癥提供了一個(gè)廣譜高效的靶點(diǎn)有正電荷的納米材料牢牢的吸附在腫瘤組織，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)腫瘤的檢測(cè)和治療，降低磁的四氧化三鐵納米顆粒表面修飾陽(yáng)離子的超順磁四氧化三鐵納米顆粒，并且利

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2798527