本文選題：單增李斯特菌 + 低場磁共振技術�。� 參考：《上海師范大學》2016年碩士論文

【摘要】：食源性疾病是指通過攝食而進入人體的有毒有害物質(包括生物性病原體)等致病因子所造成的疾病。一般可分為感染性和中毒性。近年來,食源性疾患的發(fā)病率居各類疾病總發(fā)病率的前列,是當前世界上最突出的衛(wèi)生問題。近年來,隨著磁性納米技術的不斷發(fā)展,磁性納米材料以其獨特的理化性質,在各個領域都有著非常廣泛地應用,如定向載藥、生物分子的分離與富集、疾病的臨床治療與診斷、各種生物分子的檢測以及生物傳感器等方面。單增李斯特菌(Listeria monocytogenes)是全世界普遍公認一種重要的人畜共患食源性致病菌,其廣泛存在于各種乳制品、蔬菜、肉類等食品中,特別是即食食品中,對人的健康安全造成了極大的威脅。人類受感染后可導致胃腸炎、敗血癥、腦膜炎、流產(chǎn),尤其是孕婦、嬰兒、老年人及免疫力低下者更易感染。本論文采用生物功能化磁性納米粒子與低場磁共振技術結合而建立了一種單增李斯特菌的快速檢測方法,探究不同納米材料的低場磁共振技術在單增李斯特菌快速檢測中的影響。第一部分成功合成了生物功能化的磁性納米材料。首先通過高溫熱解法合成了油溶性Fe/Fe3O4和Fe3O4磁性納米粒子,Fe/Fe3O4磁性納米粒子粒徑約為12.22nm,Fe3O4磁性納米粒子粒徑約為11.29nm。其次利用反相微乳液法對磁性納米粒子進行表面修飾,制備出二氧化硅包裹,修飾氨基的Fe/Fe3O4和Fe3O4磁性納米粒子,修飾之后,納米粒子粒徑均一、生物相容性好。接著使用EDC?HCL和NHS活化已經(jīng)氨基功能化的Fe/Fe3O4和Fe3O4,從而制備得到特異性免疫化的納米材料。第二部分探究了納米磁珠對單增李斯特菌低場磁共振檢測的影響。首先優(yōu)化單增李斯特菌的培養(yǎng)條件,單增李斯特菌在李斯特氏菌增菌肉湯中生長最迅速、旺盛。其次使用不同納米材料成功構建了一種單增李斯特菌的快速、靈敏檢測方法,靶標菌可以與免疫功能化磁珠的抗體特異性結合,引起實驗體系中橫向弛豫時間(T2)的變化,NMR可以敏感的檢測到這一變化。接著研究不同納米材料在低場磁共振檢測方法的影響,不同納米材料都對靶標菌(L.monocytogenes)有很強的特異性。經(jīng)比較實驗,生物功能化的Fe/Fe3O4納米粒子和Fe3O4納米粒子進行核磁共振實驗時最優(yōu)穩(wěn)定劑都為2%脫脂牛奶;反應時,Fe/Fe3O4納米粒子的最優(yōu)濃度為0.16 mg/m L,Fe3O4納米粒子的反應最適濃度為0.2mg/m L;Fe/Fe3O4納米粒子的最佳孵育時間為30min,而Fe3O4納米粒子的最佳孵育時間為40min,前者所用時間稍短;不同的納米材料,快速檢測單增李斯特菌的線性檢測范圍均為1~103CFU/mL,檢測范圍一致,表明檢測的靈敏度與納米材料本身并沒有很大關聯(lián)。不同的納米材料用于實際樣品的檢測均顯示該檢測方法可以應用于食品樣品的檢測并對于L.monocytogenes有很強的特異性。所以經(jīng)比較可知不同納米材料在低場磁共振技術快速檢測L.monocytogenes中效果相似,在各項實驗參數(shù)中并沒有很大差別。本文構建了一種特異性強的單增李斯特菌快速檢測方法,并且探究納米磁珠對單增李斯特菌低場磁共振檢測的影響,進而增加該方法的穩(wěn)定性,對今后食源性致病菌的快速檢測有重要意義。
[Abstract]:Food borne diseases are diseases caused by pathogenic factors such as toxic and harmful substances (including biological pathogens) which enter the human body through feeding. Generally, it can be divided into infectious and toxic. In recent years, the incidence of food borne diseases is the forefront of the total incidence of all kinds of diseases. It is the most prominent health problem in the former world. With the development of magnetic nanotechnology, magnetic nanomaterials have been widely used in various fields for their unique physical and chemical properties, such as directional drug loading, separation and enrichment of biomolecules, clinical treatment and diagnosis of diseases, detection of various biomolecules and biosensors. Single increment List Rand (Listeria monocytog) Enes) is widely recognized as an important food borne pathogenic bacteria in the world. It is widely found in all kinds of dairy products, vegetables, meat and other foods, especially in instant food, which poses a great threat to the health and safety of human beings. After human infection, it can cause gastroenteritis, septicemia, meningitis, abortion, especially in pregnant women, infants, and old age. In this paper, a rapid detection method of single increasing Lester bacteria was established by combining biofunctionalized magnetic nanoparticles with low field magnetic resonance technology to explore the effect of low field magnetic resonance (MRI) on the rapid detection of single increasing Lester bacteria in different nanomaterials. Oil soluble Fe/Fe3O4 and Fe3O4 magnetic nanoparticles are synthesized by high temperature pyrolysis. The particle size of Fe/Fe3O4 magnetic nanoparticles is about 12.22nm, and the particle size of Fe3O4 magnetic nanoparticles is about 11.29nm.. Secondly, the surface modification of magnetic nanoparticles by reverse phase microemulsion is used to prepare silicon dioxide package. Coated, modified amino Fe/Fe3O4 and Fe3O4 magnetic nanoparticles, after modification, nanoparticles have uniform particle size and good biocompatibility. Then EDC HCL and NHS are used to activate the amino functional Fe/Fe3O4 and Fe3O4, and the specific immunized nanomaterials are prepared. The second part explores the low field magnetic flux of nanomagnetic beads to the single increase of Lester bacteria. The influence of resonance detection. First, the culture conditions of monosalmus monocytogenes were optimized. The growth of the single increase of Lester bacteria was the fastest and vigorous in the mushroom broth of Listeria bacteria. Secondly, a rapid and sensitive detection method of single increase of Lester bacteria was successfully constructed with different nanomaterials, and the target bacteria could be specific to the antibody specificity of the immunomagnetic beads. In combination, the changes in the transverse relaxation time (T2) in the experimental system can be caused by NMR. The effect of different nanomaterials on the low field MRI detection method is studied. The different nanomaterials have strong specificity to the target bacteria (L.monocytogenes). By comparative experiments, the biofunctionalized Fe/Fe3O4 nanoparticles and The optimal stabilizer for Fe3O4 nanoparticles was 2% skimmed milk, the optimum concentration of Fe/Fe3O4 nanoparticles was 0.16 mg/m L, the optimum concentration of Fe3O4 nanoparticles was 0.2mg/m L, the optimum incubation time of Fe/Fe3O4 nanoparticles was 30min, while the best incubation time of Fe3O4 nanoparticles was 40min, the former was the former. The time used is slightly shorter, and the linear detection range of the rapid detection of Lester bacteria is 1~103CFU/mL, and the detection range is the same. It shows that the sensitivity of the detection is not closely related to the nanomaterial itself. The detection of different nanomaterials for the actual samples shows that the detection method can be applied to food samples. The detection has a strong specificity for L.monocytogenes, so it is known that the effect of different nanomaterials in the rapid detection of L.monocytogenes in low field magnetic resonance technology is similar, and there is no big difference in the experimental parameters. The effect of beads on the detection of single increased Lester's low field MRI can further increase the stability of the method and is of great significance for the rapid detection of foodborne pathogens in the future.
【學位授予單位】：上海師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R446.5;TB383.1

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本文編號：2082554