本文選題：納米微粒 + 親和分離��； 參考：《河南大學》2015年碩士論文

【摘要】：本文利用液相化學法制備了HAP/IDA-Ni2+、Fe3O4/HAP-Ni2+、Ni(OH)2/HAP及Ni(OH)2/HAP-RBH納米微粒,并用多種方法對合成微粒進行表征。利用Ni2+與組氨酸標簽(His-tagged)蛋白質(zhì)之間的親和作用,將這些納米微粒作為吸附劑實現(xiàn)了對His-tagged蛋白質(zhì)的分離與純化,并對其親和分離行為進行了研究。具體研究內(nèi)容和結論如下:(1)HAP/IDA納米微粒的制備及分離純化His-tagged蛋白質(zhì)采用水熱法在SBF溶液中成功制備了多孔的HAP納米微粒,平均粒徑在40 nm左右。利用HAP納米微粒表面的活性羥基,成功實現(xiàn)了其表面IDA功能化,進一步螯合Ni2+后,得到HAP/IDA-Ni2+納米微粒。這種納米微粒能夠從蛋白混合液中一步純化His-tagged蛋白質(zhì)。結果表明,HAP/IDA-Ni2+納米微粒表現(xiàn)出高的特異性和吸附能力,重復利用四次后,材料依然保持較高的分離性能。HAP/IDA-Ni2+納米微粒適用于分離低分子量His-tagged蛋白質(zhì)。(2)Fe3O4/HAP納米微粒的制備及分離純化His-tagged蛋白質(zhì)采用水熱法成功制備了具有磁響應性能的Fe3O4/HAP納米微粒。進一步螯合Ni2+后,Fe3O4/HAP-Ni2+納米微粒在外加磁場條件下可以直接從蛋白混合液中純化His-tagged蛋白質(zhì)。結果表明,該納米微粒對His-tagged蛋白質(zhì)具有高的選擇性和相對弱的非特異性吸附,其最大吸附量為12.98 mmol/g。(3)Ni(OH)2/HAP納米微粒的制備及分離純化His-tagged蛋白質(zhì)采用水熱法成功制備了Ni(OH)2/HAP納米微粒,并考察了反應條件和Ni2+濃度對Ni(OH)2/HAP粒徑和形貌的影響,Ni2+濃度越低,所得納米微粒的粒徑則越小。這種納米微�？梢灾苯佑糜诩兓疕is-tagged蛋白質(zhì),并采用三種His-tagged蛋白質(zhì)對其親和特性進行了評價。結果表明,Ni(OH)2/HAP納米微粒對His-tagged蛋白質(zhì)具有很高的親和分離特性和對His-tag的普適性。(4)Ni(OH)2/HAP-RBH納米微粒的制備及分離純化His-tagged蛋白質(zhì)采用三步法成功制備了多功能Ni(OH)2/HAP-RBH納米微粒。首先在檸檬酸存在下,水熱法合成Ni(OH)2/HAP納米微粒。其次羅丹明B與水合肼回流12 h合成羅丹明酰肼(RBH)。最后RBH與微粒表面羧基反應形成Ni(OH)2/HAP-RBH納米微粒。作為親和吸附劑,該粒子可以用于直接凈化His-tagged蛋白質(zhì),并表現(xiàn)出極好的蛋白質(zhì)吸附能力,最高吸附量為115 mg/g。Ni(OH)2/HAP-RBH納米微粒對Pt2+表現(xiàn)出良好的熒光增強效應、靈敏性和選擇性,檢出限為3.0×10-8 mol/L,可作為Pt2+探針用于熒光成像。
[Abstract]:In this paper, HAP/IDA-Ni2 Fe3O4 / HAP-Ni2 and Ni(OH)2/HAP-RBH nanoparticles were prepared by liquid-phase chemical method and characterized by various methods. Based on the affinity between Ni2 and His-tagged protein, the His-tagged protein was separated and purified by using these nanoparticles as adsorbents, and the affinity separation behavior was studied. The specific research contents and conclusions are as follows: the preparation and purification of His-tagged protein by His-tagged nanoparticles were studied. The porous HAP nanoparticles were successfully prepared by hydrothermal method in SBF solution. The average diameter of HAP nanoparticles was about 40 nm. The IDA functionalization of HAP nanoparticles was successfully realized by using the active hydroxyl groups on the surface of HAP nanoparticles. After chelating Ni2 further, HAP/IDA-Ni2 nanoparticles were obtained. The nanoparticles can purify His-tagged proteins from protein mixtures in one step. The results showed that HAP / IDA-Ni2 nanoparticles showed high specificity and adsorption ability, and were reused for four times. HAP / IDA-Ni2 nanoparticles were suitable for the preparation of low molecular weight His-tagged protein, Fe3O4 / HAP nanoparticles and the preparation of purified His-tagged proteins. The magnetically responsive Fe3O4/HAP nanoparticles were successfully prepared by hydrothermal method. After further chelating Ni2, Fe _ 3O _ 4 / HAP-Ni _ 2 nanoparticles can purify His-tagged protein directly from protein mixture under the condition of external magnetic field. The results showed that the nanoparticles had high selectivity and relatively weak nonspecific adsorption on His-tagged protein, and the maximum adsorption capacity was 12.98 mmol/g.(3)Ni(OH)2/HAP nanoparticles. The preparation and purification of His-tagged protein were successfully prepared by hydrothermal method. The effects of reaction conditions and Ni2 concentration on the particle size and morphology of Ni(OH)2/HAP were investigated. The smaller the concentration of Ni2 was, the smaller the particle size was. The nanoparticles can be directly used to purify His-tagged proteins and their affinity properties are evaluated by using three His-tagged proteins. The results showed that the two HAP nanoparticles had high affinity for His-tagged protein separation, and the preparation and purification of His-tagged protein by His-tag. The preparation and purification of His-tagged nanoparticles were successfully carried out by three-step method. Firstly, Ni(OH)2/HAP nanoparticles were synthesized by hydrothermal method in the presence of citric acid. Secondly, Rhodamine B was refluxed with hydrazine hydrate for 12 h to synthesize Rhodamine acyl hydrazide (RBH). Finally, RBH reacts with carboxyl group on the surface of particles to form Ni(OH)2/HAP-RBH nanoparticles. As an affinity adsorbent, the particle can be used to purify His-tagged protein directly and exhibit excellent protein adsorption ability. The maximum adsorption capacity of the nanoparticles is 115 mg/g.Ni(OH)2/HAP-RBH nanoparticles with good fluorescence enhancement effect, sensitivity and selectivity to Pt2. The detection limit is 3.0 脳 10 ~ (-8) mol / L, which can be used as a Pt2 probe for fluorescence imaging.
【學位授予單位】：河南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：TB383.1

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本文編號：1779856