稻(Oryza sativa L.)是世界上最重要的糧食作物之一,供養(yǎng)了世界將近50%的人口。由子囊菌Magnaporthe oryzae (無(wú)性世代：Pyricularia oryzae)引起的稻瘟病,是水稻生產(chǎn)上最嚴(yán)重的病害之一,常常導(dǎo)致水稻產(chǎn)量嚴(yán)重?fù)p失。實(shí)踐證明增強(qiáng)水稻的稻瘟病抗性是防治稻瘟病最經(jīng)濟(jì)、有效的途徑。在常規(guī)的稻瘟病抗性育種中,需要通過(guò)不斷雜交和回交才能將多個(gè)抗病基因聚合到一個(gè)水稻材料中,時(shí)間往往需要十年甚至更長(zhǎng)。但是,高度變異的稻瘟病菌致病性經(jīng)常導(dǎo)致抗性品種的抗性快速消失。通過(guò)RNAi (RNA interference)技術(shù)下調(diào)稻瘟病感病基因或感病相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因的表達(dá)是提高水稻稻瘟病抗性的一種有效途徑。但不同的RNAi轉(zhuǎn)基因植株中表達(dá)量往往不一致,難以獲得穩(wěn)定的高表達(dá)轉(zhuǎn)入株系；且因?yàn)檗D(zhuǎn)基因安全問(wèn)題,RNAi轉(zhuǎn)基因植株還面臨嚴(yán)格的管理流程。然而,TALENs (Transcription activator-like effector nucleases, TALENs) 和 CRISPR/Cas9 (Clustered regularly interspaced ...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１?ＤＳＢｓ修復(fù)途棒??ＳＳＮｓ在基因組特定位點(diǎn)產(chǎn)生ＤＮＡ巧鏈斷裂（ＤＳＢｓ），通過(guò)非同源末端連接（ＮＨＥＪ）修復(fù)途徑可實(shí)??現(xiàn)定點(diǎn)刪除（左）；在供體ＤＮＡ片段存在時(shí)，通過(guò)同源末端連接（ＨＲ）修復(fù)途徑可實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)脊換??

定的位置上切割ＤＮＡ雙鏈，造成ＤＮＡ雙鏈斷裂（ＤＮＡ?ｄｏｕｂｌｅ－ｓｔｒａｎｄ?ｂｒｅａｋｓ，?ＤＳＢｓ）！??而ＤＳＢｓ的發(fā)生能夠極大地提髙重組事件發(fā)生的概率（Ｃｏｈｅｎ－Ｔａｎｎｏｕｄｊｉｅｔａｌ．，１９９８）。在??真核生物中，ＤＳ化的修復(fù)機(jī)制高度保守，主要包括兩種途徑（....

圖１－２黃單胞桿菌ＴＡＬ效應(yīng)子功能結(jié)構(gòu)域（Ｂｏ油ａｎｄ?Ｂｏｎａｓ，２０１０）??

Ｌ３．２?ＴＡＬＥ?＾＾巧分布??經(jīng)序列分析發(fā)現(xiàn)，所有的ＴＡＬＥＳ都具有高度統(tǒng)一的結(jié)構(gòu)：即高度保守的Ｎ端和Ｃ??端、中間部分的重復(fù)區(qū)（圖１－２）。其中，Ｎ端含有Ｔ３Ｓ分泌和轉(zhuǎn)運(yùn)信號(hào)結(jié)構(gòu)域，是ＴＡＬＥ??４??

圖1-3RVDs與核普酸堿基之間的識(shí)別密碼(Bochetal,2b09)

）?ＴＡＬ效應(yīng)子包含中的串聯(lián)重復(fù)結(jié)構(gòu)域、核定位信號(hào)結(jié)構(gòu)域和漱活結(jié)構(gòu)域。ＡｖｒＢｓ３的單元編碼的氣基酸序列如圖所示，第１２和第１３位氣基酸高度可變�；粒觯颍拢螅车模保罚翟冢保埠偷冢保澄粴莼鶖硨�(duì)應(yīng)一致的ＵＰＡ框核貫酸。（Ｃ）ＴＡＬ效應(yīng)子重復(fù)可變區(qū)氣基酸ＤＮＡ鏈核菩酸及其頻率。....

圖１－５?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９核酸酶剪切範(fàn)序列原理（Ｍａ?ｅｔ?ａｌ．，２０１沛）??ｇＲＮＡ結(jié)合到基因組把序列后，Ｃａｓ９蛋白的類ＲｕｖＣ結(jié)構(gòu)域在ＰＡＭ?（ＮＧＧ）上游的第３和第４個(gè)榜??普酸中間剪切ＤＮＡ鏈，ＨＮＨ結(jié)構(gòu)域在同一位置巧切互補(bǔ)ＤＮＡ鏈

圖１－５?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９核酸酶剪切範(fàn)序列原理（Ｍａ?ｅｔ?ａｌ．，２０１沛）??ｇＲＮＡ結(jié)合到基因組把序列后，Ｃａｓ９蛋白的類ＲｕｖＣ結(jié)構(gòu)域在ＰＡＭ?（ＮＧＧ）上游的第３和第４個(gè)榜??普酸中間剪切ＤＮＡ鏈，ＨＮＨ結(jié)構(gòu)域在同一位置巧切互補(bǔ)ＤＮＡ鏈。??Ｆｉｇ．?１－５?Ｐｒ....

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