【摘要】：目的：2000年6月,我時(shí)年61歲公教人員退休時(shí),滿(mǎn)懷想過(guò)退休安閑自在的生活。沒(méi)想到第二年常覺(jué)得胸悶心悸現(xiàn)象,經(jīng)長(zhǎng)庚醫(yī)院心臟內(nèi)科診斷為冠心病,同年11月作心臟搭橋手術(shù),從此長(zhǎng)期服用降血壓藥氯沙坦、預(yù)防狹心癥發(fā)作藥消心痛、防心肌梗塞及血栓塞癥藥阿司匹林等西藥,雖心臟恢復(fù)功能,但腎功能逐年下降,且并發(fā)了高尿酸血癥、痛風(fēng)、糖尿病及輸尿管結(jié)石等病證。想起父親為中醫(yī)師,擬以中藥調(diào)理治療,副作用較少,故2010年9月考入廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)中醫(yī)。在2013年9月份博士班就讀時(shí)痛風(fēng)發(fā)作,以吳同學(xué)的痛風(fēng)經(jīng)驗(yàn)方,服后疼痛稍為緩解。又見(jiàn)近來(lái)國(guó)內(nèi)經(jīng)濟(jì)繁榮,生活水平提升,飲食文化受西式速食文化的沖擊,攝取高嘌呤、高蛋白等物質(zhì)引起高尿酸血癥及痛風(fēng),且患者年齡層逐年下降之隱憂(yōu)。有鑒于此,擬“五苓痛風(fēng)丸對(duì)高尿酸血癥及痛風(fēng)療效的實(shí)驗(yàn)與臨床研究”為課題。在梳整中國(guó)歷代古籍文獻(xiàn),自《黃帝內(nèi)經(jīng)·靈樞》稱(chēng)痛風(fēng)為賊風(fēng)、痹證、歷節(jié)等病名至金元時(shí)代,統(tǒng)合痛風(fēng)病名、癥狀、證型、論治及方藥,屬于中醫(yī)痹證范疇。幾千年流傳后世經(jīng)方,歷經(jīng)時(shí)代大臨床驗(yàn)證其療效,此為中醫(yī)藥治療優(yōu)勢(shì)。為驗(yàn)證其效力,特以中藥濃縮劑及中藥顆粒劑,以五苓痛風(fēng)丸對(duì)高尿酸血癥及痛風(fēng)療效動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與臨床實(shí)驗(yàn)之研究,整理中醫(yī)藥治療痛風(fēng)的文獻(xiàn),探討五苓痛風(fēng)丸治療高尿酸血癥和痛風(fēng)的療效及相關(guān)機(jī)理。方法：1文獻(xiàn)研究：本研究方法主要采取探討中醫(yī)古藉,歷史縱向與相關(guān)痹證、賊風(fēng)、歷節(jié)、痛風(fēng)疾病作為橫向,縱橫探討加以歸納整理,梳理歷代醫(yī)者關(guān)于痛風(fēng)的病機(jī)描述和辨證論治及方藥。2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：(1)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎造模方法,取60只Wistar雄性大鼠(200±20g),稱(chēng)重后隨機(jī)分成空白組、模型組、陽(yáng)性組(扶他林0.39mg/ml)、中藥高、中、低劑量組等6組。中藥各劑量組于造模前3天連續(xù)ig給藥；陽(yáng)性組于造模前2天連續(xù)ig給藥。除空白組外其余均將0.2ml尿酸鈉溶液注入到踝關(guān)節(jié)腔,形成急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型。(2)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：①造模方法：摸索尿酸鹽的造模濃度和造模時(shí)間：培養(yǎng)大鼠原代滑膜細(xì)胞,培養(yǎng)基中加入高中低(700,1000,l,400uM)三種濃度的尿酸鹽,檢測(cè)滑膜細(xì)胞內(nèi)VCAM-1的表達(dá),。②“五苓痛風(fēng)丸”含藥血清的制備：A.摸索中藥的給藥濃度和給藥時(shí)間,檢測(cè)VCAM-1水平,PCR或WB。B.培養(yǎng)大鼠原代滑膜細(xì)胞造模及細(xì)胞分組。3.臨床實(shí)驗(yàn)：(1)病例來(lái)源于2015年10月至2016年01月就診于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎病科門(mén)診患者18例及深圳市吳邱保西醫(yī)內(nèi)科診所患者12例并依照隨機(jī)取樣,共30例,以患者前后服用中西藥為對(duì)照研究。(2)治療方法：①飲食療法。②中醫(yī)治療：采用“五苓痛風(fēng)丸”。A.主要組成：茵陳五苓散及上中下通用痛風(fēng)丸合成復(fù)方加減。B.服法：急性痛風(fēng)發(fā)作時(shí),每日28克,分二次服/或14g bid,每次用熱開(kāi)水約100毫升沖溶,飯前一小時(shí)口服。③西藥治療：服用A.苯溴馬隆、B.別嘌呤醇片、C.碳酸氫鈉片、D.秋水仙堿片等治療。內(nèi)容：1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：“五苓痛風(fēng)丸”對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型的作用研究：(1)造模時(shí)間：于2015年5月5日-2015年5月19日。(2)造模方法：取60只Wistar雄性大鼠(200士20g),實(shí)驗(yàn)分6組,每組5只大鼠。①空白組及②模型組：各以生理鹽水灌胃,每天1次,共5天。③扶他林組：以雙氯芬酸鈉混懸液(0.39mg/ml)灌胃,每天1次,共5天。④中藥高劑量組：以中藥濃縮劑五苓痛風(fēng)丸高濃度28g溶液灌胃,每天1次,共5天。⑤中藥中劑量組：以中藥濃縮劑五苓痛風(fēng)丸中濃度20g溶液灌胃,每天1次,共5天。⑥中藥低劑量組：以中藥濃縮劑五苓痛風(fēng)丸低濃度12g溶液灌胃,每天1次,共5天。,除空白組外其余5組均造模,注入尿酸鈉結(jié)晶溶液,誘導(dǎo)急性關(guān)節(jié)模型,空白組注入相同體積的生理鹽水。第5天灌胃后24h取材并處死大鼠2臨床研究?jī)?nèi)容：由高尿酸血癥而引發(fā)的急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是痛風(fēng)的前驅(qū)癥狀。起病急驟,多首發(fā)于足拇趾的跖關(guān)節(jié),其他受累部位依次為踝、跟、膝、腕、指、肘等關(guān)節(jié)。常有多種誘因：如飽餐、進(jìn)食高嘌呤食物、飲酒、勞累、受冷、感染等。發(fā)作可數(shù)小時(shí)、數(shù)天或數(shù)周,緩解期可數(shù)月甚至終生。由于痛風(fēng)反復(fù)發(fā)作,導(dǎo)致向慢性病程轉(zhuǎn)化。其治療方法,降低血尿酸,緩解急性期的癥狀、減少急性復(fù)發(fā)。西醫(yī)的治療以治標(biāo)為主,雖消炎止痛消腫見(jiàn)效快,但副作用大。中醫(yī)治療痛風(fēng)標(biāo)本兼治為本,副作用少,中醫(yī)治療痛風(fēng)已逐漸顯著優(yōu)勢(shì)。3高尿酸血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)：據(jù)國(guó)內(nèi)資料正常值男性血尿酸150-380μ mol/L(2.4-6.4mg /dl),女性絕經(jīng)前尿酸為100-300μ mol/L (1.6-5.2mg/dl),而女性絕經(jīng)后接近正常男性尿酸水平。故任何原因引起尿酸生成增加或排泄少,導(dǎo)致血尿酸濃度升高男性和絕經(jīng)后女性的血尿酸濃度為大於380μ mol/L (6.4mg/dl)以上,女性絕經(jīng)前大於300μ mol/L (5.2mg/dl)以上可診斷為高尿酸血癥。4急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)1977年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)訂定的《急性痛風(fēng)關(guān)節(jié)炎診斷參考標(biāo)準(zhǔn)。5慢性腎臟病(CKD)診斷標(biāo)準(zhǔn)：我國(guó)對(duì)慢性腎功能不全的分為5期：即1期正常(已有腎病)、2期代償期、3期失代償期、4期腎衰竭期、5期尿毒癥期。6中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照1994年國(guó)家中醫(yī)藥管理局所發(fā)布,中華人民共和國(guó)中醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》ZY/T001.1—94中醫(yī)內(nèi)科痛風(fēng)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)。7臨床實(shí)驗(yàn)倫理規(guī)范等規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果：1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果：(1)五苓痛風(fēng)丸對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型的作用機(jī)理研究：首先造模,結(jié)果發(fā)現(xiàn)：中藥高劑量組與扶他林組能夠一定程度上降低關(guān)節(jié)功能障礙指數(shù)；中藥組的關(guān)節(jié)炎癥指數(shù)高于扶他林組,低于模型組,24h和72h效果較明顯；24h和72h后,中藥組的關(guān)節(jié)腫脹率低于扶他林組,也低于模型組。然后,通過(guò)觀(guān)察關(guān)節(jié)滑膜組織病理形態(tài)學(xué)的改變,發(fā)現(xiàn)中藥組能一定程度上減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn),吞噬細(xì)胞增生和組織紊亂等。最后,通過(guò)免疫組織化學(xué)和Elisa實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),中藥組的NF K B p65、 VCAM1和IL-1β均發(fā)生不同程度的下調(diào)表達(dá),且呈現(xiàn)劑量效應(yīng),即中藥組劑量越高,則其效能越高。說(shuō)明中藥對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎具有一定治療效果,且我們推測(cè)其是通過(guò)核轉(zhuǎn)錄因子NF κ B信號(hào)通路發(fā)揮作用。(2)五苓痛風(fēng)丸對(duì)尿酸鹽誘導(dǎo)的痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的細(xì)胞模型的作用機(jī)理研究：通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：首先構(gòu)建痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的細(xì)胞模型,通過(guò)qRT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ICAM-I的表達(dá),來(lái)摸索尿酸鹽的造模濃度和造模時(shí)間,選擇細(xì)胞狀態(tài)最佳的24h為最佳時(shí)間,選擇中藥濃度1,000μM為最佳濃度(炎性因子大量產(chǎn)生時(shí)間為24h左右最佳)。其次,摸索中藥的給藥濃度,qRT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ICAM-I的表達(dá),發(fā)現(xiàn)隨著濃度的增加,ICAM-I隨之下降,具有劑量效應(yīng),故選擇效果最好的高劑量組。隨后,為了驗(yàn)證是否通過(guò)NF κB信號(hào)通路發(fā)揮作用,我們將NF κBp65進(jìn)行siRNA干擾,下調(diào)其表達(dá)(通過(guò)qRT-PCR和WB實(shí)驗(yàn)篩選獲得有效siRNA).最后,經(jīng)WB和Elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,NF K Bp65下調(diào)后, NF κ B p65、VCAM1和IL-1β表達(dá)均發(fā)生下調(diào),且效果與中藥組相差無(wú)幾,由此推測(cè)中藥確實(shí)是通過(guò)下調(diào)NF κ B的表達(dá),進(jìn)而影響VCAM1和IL-1β表達(dá)而發(fā)揮作用。2臨床研究結(jié)果：(1)參照《臨床疾病診斷依據(jù)治愈好轉(zhuǎn)的標(biāo)準(zhǔn)》2002版中的有關(guān)內(nèi)容,結(jié)合高尿酸血癥臨床實(shí)際,擬定療效標(biāo)準(zhǔn)。顯效數(shù)占40%；有效數(shù)占33.3%；無(wú)效數(shù)占26.7%；總有效率占73.3%。(2)治療前后腎功能及血尿酸比較,經(jīng)五苓痛風(fēng)丸治療后,治療前血尿酸528.8±69.9,治療后平均尿酸下降為435.6±78.0,且經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析二者差異是有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說(shuō)明五苓痛風(fēng)丸對(duì)降尿酸明顯有療效。(3)至于腎小球?yàn)V過(guò)率(eGFR),治療前平均eGFR為68.93±17.22,治療后平均eGFR為77.09±20.75似乎表示治療后能有改善,但經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0.05),此表明五苓痛風(fēng)丸對(duì)腎功能無(wú)害。也可能對(duì)尿酸治療并非通過(guò)改善腎功能為標(biāo)的。結(jié)論：本論文中藥濃縮劑-五苓痛風(fēng)丸對(duì)治療高尿酸血癥及痛風(fēng)關(guān)節(jié)炎,經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、臨床研究及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果：(1)五苓痛風(fēng)丸高劑量組腫脹率低于造模組,表明治療有效,同時(shí)五苓痛風(fēng)丸低、中劑量與扶他林組造模組腫脹率差異均未顯示統(tǒng)計(jì)意義,表明五苓痛風(fēng)丸治療效果與扶他林組相當(dāng)。加大劑量、效果更優(yōu)于造模組與扶他林組。(2)五苓痛風(fēng)丸經(jīng)實(shí)驗(yàn),對(duì)動(dòng)物具有一定抗炎作用,并對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)腫脹顯著抑制效力。(3)對(duì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn),五苓痛風(fēng)丸,能降低對(duì)大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎之病變局部炎性白細(xì)胞、滑模浸潤(rùn)及增生。(4)根據(jù)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明：五苓痛風(fēng)丸對(duì)尿酸鹽誘導(dǎo)的痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎,具有一定治療效果,能夠減輕炎性反應(yīng),由整個(gè)實(shí)驗(yàn)證明推測(cè),是經(jīng)過(guò)核因子轉(zhuǎn)錄因子NFκ Bp65信號(hào)通路發(fā)揮抑制作用。(5)本課題經(jīng)過(guò)五苓痛風(fēng)丸對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎影響實(shí)驗(yàn),證明其具有抗炎作用,也探討了其部分機(jī)理,因此其實(shí)驗(yàn)結(jié)果,足以作為臨床提供了有力的理論基礎(chǔ)。(6)中藥五苓痛風(fēng)丸,長(zhǎng)遠(yuǎn)的看是標(biāo)本兼治,藥效持久性,副作用少,除治療主癥痛風(fēng)外,對(duì)其伴隨癥比較全面性的改善。(7)臨床研究結(jié)論：五苓痛風(fēng)丸對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎有一定的臨床療效,其機(jī)制與降低血尿酸和抗炎相關(guān)。
【圖文】：

邐邐邐胃內(nèi)胃Ｉ邋Ｉ核酸酶Ｉ逡逑酸炸用Ｉ邋Ｉ水解Ｉ逡逑邐邐邋大部分在＾膜細(xì)逡逑核巧酶邐胞＃被Ａ解。逡逑邐］邋ｒ邐逡逑？核邐糖—邐邐逡逑＾戊糖Ｉ邋ｆＫ邋Ｋ邋Ａ邋）邋Ｉ邐＿＾被腸黏膜吸收，，并參加體內(nèi)戊糖代謝。逡逑邐邋Ｉ脫氧核糖Ｉ逡逑（邋Ｄ邋Ｎ邋Ａ邋）邋Ｉ邋￣逡逑堿基邋ｈ邋，邐邋＾邐＾邐＂邋Ｉ邋—＾邋酸逡逑—？喀巧邐Ｌ＿＾邋腺嘿吟—邐邐邋＿—逡逑１：尿酸重吸收逡逑

造模及指標(biāo)檢測(cè)
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R285

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本文編號(hào)：2557958