本文選題：新城疫病毒 + 火雞皰疹病毒　； 參考：《揚州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一種烈性、高度傳染性疾病,給養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。目前,常規(guī)疫苗毒株大多是NDV基因Ⅰ型或基因Ⅱ型,而當(dāng)前我國優(yōu)勢流行毒株為NDV基因Ⅶ型,雖然它們屬于同一血清型,但遺傳距離相差較遠。因此,免疫雞群中非典型ND和帶毒現(xiàn)象普遍存在,免疫失敗時有發(fā)生,迫切需要研制與流行毒株基因型相匹配的ND疫苗�；痣u皰疹病毒(herpesvirus of turkey,HVT)疫苗是預(yù)防雞馬立克氏病的常用疫苗,具有較多的病毒復(fù)制非必需區(qū)可供外源基因的插入,被廣泛應(yīng)用于重組病毒活疫苗的構(gòu)建。本研究擬以HVTFC126疫苗株為載體,構(gòu)建表達基因Ⅶ型NDVHN糖蛋白的重組火雞皰疹病毒,研制新型ND活疫苗。本研究通過PCR擴增出基因Ⅶ型NDVDT-2014株的HN基因,與人巨細胞病毒早期啟動子(CMV)和TK poly A組成表達盒。將該表達盒插入到HVT FCl26疫苗株的US2非必需區(qū)片段中,構(gòu)建轉(zhuǎn)移載體pHVT-US2-HN。將pHVT-US2-HN轉(zhuǎn)移載體與表達EGFP標志基因的重組HVT FC126病毒(rHVT-EGFP)基因組DNA共轉(zhuǎn)染雞胚成纖維細胞(CEF),經(jīng)同源重組,將EGFP基因替換為HN基因表達盒,獲得表達HN蛋白的重組病毒rHVT-US2-HN。通過 PCR、Southern-blot、Western-blot 和間接免疫熒光試驗(IFA)對獲得的重組病毒rHVT-US2-HN進行鑒定,并對其在CEF上的生長特性進行檢測。結(jié)果顯示:重組病毒rHVT-US2-HN中,HN基因表達盒已正確插入US2復(fù)制非必需區(qū)內(nèi),并能成功表達大小在70kD左右的目的蛋白。同時,重組病毒rHVT-US2-HN在CEF上表現(xiàn)出了與HVTFC126疫苗毒株相同的復(fù)制水平。本研究對重組病毒rHVT-US2-HN進行了免疫效力的初步評價。將80只1日齡SPF雞隨機分成4組,依次為rHVT-US2-HN免疫組、弱毒疫苗免疫組、攻毒對照組及空白對照組。其中,rHVT-US2-HN免疫組于1日齡頸部皮下接種5000噬斑形成單位(PFU)的rHVT-US2-HN;弱毒疫苗組于7日齡經(jīng)滴鼻/點眼途徑免疫1羽份LaSota疫苗。分別于7、14、21、28日齡采血分離血清,通過血凝抑制試驗(HI)檢測NDV抗體效價。除空白對照組外,其余3組于21日齡經(jīng)滴鼻點眼途徑以每只雞105EID50的基因Ⅶ型NDV DT-2014株攻毒。攻毒后第3d、5d,采集喉頭、泄殖腔拭子,進行病毒分離,檢測各組試驗雞的排毒情況;并連續(xù)觀察7天,統(tǒng)計各試驗組的臨床癥狀、發(fā)病率和死亡率。結(jié)果顯示:rHVT-US2-HN免疫組試驗雞在接種后抗體水平呈上升趨勢。攻毒后7天,對照組的死亡率為100%,rHVT-US2-HN免疫組的死亡率為50%,弱毒疫苗免疫組的死亡率為10%。表明重組病毒rHVT-US2-HN對基因VII型NDV強毒株的攻擊有一定的免疫保護效果,為ND的預(yù)防和控制提供了新的候選疫苗株。
[Abstract]:Newcastle disease (NDV) is a severe and highly infectious disease caused by Newcastle disease virus (NDV), which has brought great economic losses to poultry industry. At present, most of the conventional vaccine strains are NDV gene type 鈪，

本文編號：1893351