發(fā)布時間：2018-01-23 14:13

  本文關(guān)鍵詞： 奶牛子宮內(nèi)膜炎 菌群 LPS　出處：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：子宮內(nèi)膜炎是一種重要產(chǎn)科疾病,嚴重影響著奶牛業(yè)經(jīng)濟效益。生殖道微生物群落對奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生起關(guān)鍵作用,研究其作用機制不僅為開發(fā)防治奶牛子宮內(nèi)膜炎的微生態(tài)制劑提供參考,而且也能為闡明該病的發(fā)病機理奠定基礎(chǔ)。本研究利用PCR-DGGE和熒光定量PCR等技術(shù)比較研究了產(chǎn)后不同階段健康和子宮內(nèi)膜炎奶牛子宮菌群結(jié)構(gòu)的演替規(guī)律,利用RNA-seq技術(shù)分析了LPS(細菌脂多糖)對奶牛子宮內(nèi)膜細胞全基因組表達譜的影響,以期解析奶牛子宮內(nèi)膜炎相關(guān)微生態(tài)菌群及其與宿主的相互作用機制。采集健康和子宮內(nèi)膜炎奶牛產(chǎn)后7d、14d、25d、36d和46d子宮分泌物樣品。首先利用PCR-DGGE技術(shù)比較研究產(chǎn)后不同階段健康和子宮內(nèi)膜炎奶牛子宮細菌多樣性。結(jié)果表明,健康和子宮內(nèi)膜炎奶牛產(chǎn)后子宮內(nèi)細菌多樣性均呈現(xiàn)先升高后降低的演替規(guī)律。產(chǎn)后7d,羊創(chuàng)傷球菌、壞死梭桿菌和微小單胞菌僅存在于患病組,而解脲支原體、甲烷炎菌屬和產(chǎn)氣莢膜梭菌在兩組奶牛中均存在。產(chǎn)后第14d,解脲支原體和羊創(chuàng)傷球菌僅存在于健康組,而卟啉單胞菌、解肝素擬桿菌、甲烷炎菌屬和大腸桿菌在健康組和患病組均存在。產(chǎn)后25d,患病組細菌多樣性高于健康組,卟啉單胞菌、門多薩假單胞菌和甲烷炎菌屬在兩組均存在。產(chǎn)后36d,患病組細菌多樣性顯著高于健康組,卟啉單胞菌、埃希氏菌、放線桿菌、甲烷炎菌屬和壞死梭桿菌等僅存在于患病組。產(chǎn)后46d,健康和患病組子宮內(nèi)細菌多樣性顯著降低,且兩組間差異不顯著。基于PCR-DGGE結(jié)果,篩選出6種特異性的菌屬,應(yīng)用熒光定量PCR檢測其在健康和患病組產(chǎn)后不同階段數(shù)量變化規(guī)律。結(jié)果顯示:各菌屬數(shù)量隨產(chǎn)后不同階段呈現(xiàn)動態(tài)變化,且產(chǎn)后46d各菌數(shù)量在健康組和患病組趨于一致。解脲支原體在6種菌屬中數(shù)量最高,隨時間呈下降趨勢,且患病組均高于健康組。壞死梭桿菌數(shù)量在健康和患病奶牛產(chǎn)后均呈現(xiàn)先增加后減少的變化規(guī)律,且產(chǎn)后7d到36d期間,患病組壞死梭桿菌數(shù)量均高于健康組。產(chǎn)后不同階段門多薩假單胞菌和甲烷炎菌的數(shù)量在健康和子宮內(nèi)膜炎奶牛間均差異不顯著。產(chǎn)后25d,患病組卟啉單胞菌數(shù)量顯著高于健康組。羊創(chuàng)傷球菌數(shù)量呈現(xiàn)先升高后降低的變化,且僅在產(chǎn)后14d和25d患病組數(shù)量顯著高于健康組。結(jié)合PCR-DGGE結(jié)果,壞死梭桿菌和卟啉單胞菌可能是奶牛子宮內(nèi)膜炎的主要致病菌。RNA-seq結(jié)果表明,LPS處理奶牛子宮內(nèi)膜炎細胞24h后,有108個差異基因。GO分類統(tǒng)計及富集分析結(jié)果顯示,GO分類統(tǒng)計中差異基因注釋到生物過程的GO term共24個,注釋到細胞組分的GO term共15個,注釋到分子功能的GO term共10個。GO富集分析中差異基因富集到生物過程的GO term共68個,富集到細胞組分的GO term共4個,富集到分子功能的GO term共8個。KEGG通路富集分析結(jié)果顯示,共富集102個信號通路,其中20個信號通路顯著富集,其中與炎癥相關(guān)的差異富集通路包括TNF、NOD-like receptor和NF-kappa B等,從高通量結(jié)果中選擇4個關(guān)鍵基因,利用實時熒光定量PCR驗證其表達量,驗證結(jié)果證明了高通量測序技術(shù)的可靠性。本研究不僅利用分子生物學(xué)技術(shù)研究了產(chǎn)后不同階段健康和子宮內(nèi)膜炎奶牛子宮菌群結(jié)構(gòu)的變化規(guī)律,明確了二者間的差異,而且利用RNA-seq等技術(shù)獲得了LPS處理奶牛子宮內(nèi)膜細胞的全基因組表達譜,研究結(jié)果不僅為揭示奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)病機制奠定基礎(chǔ),而且也為開發(fā)新型治療藥物提供了參考。
[Abstract]:The effect of LPS ( bacterial lipopolysaccharide ) on the whole genome expression profile of cow endometritis was studied by means of PCR - DGGE and fluorescence quantitative PCR . The results showed that there were 102 signal pathways in GO term . The results showed that there were 102 signal pathways that were enriched in GO term . The results showed that there were 102 signal pathways . The results showed that there were 102 signal pathways . The results showed that there were 102 signal pathways , and the results demonstrated the reliability of high throughput sequencing . The results showed that the whole genome expression profile of the bovine endometrium cells was treated with LPS . The results showed that the results not only provide the basis for the pathogenesis of endometritis of cow , but also provide reference for the development of new therapeutic drugs .

【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.23

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 彭青;謝冰;袁琦;黃智婷;崔璐璐;王文婷;;青草沙水庫蓄水期間細菌群落結(jié)構(gòu)變化的初步研究[J];環(huán)境科學(xué);2012年10期

2 楊一新;李桂源;;LPS所介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究進展[J];中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2006年01期

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本文編號：1457731