目的:rno-mi R-10a-5p和rno-mi R-542-5p是本實驗室首次鑒定的參與有氧運動干預(yù)慢性心衰進程的兩個micro RNA。它們在壓力負荷致慢性心衰大鼠的心室肌中低表達,以有氧運動為干預(yù)手段,可以使它們的表達量顯著升高,同時伴有線粒體功能的增強及心衰進程的延緩。本研究的目的是鑒定rno-mi R-10a-5p和rnomi R-542-5p在心肌細胞中的可能靶蛋白,通過靶蛋白的功能研究探討有氧運動干預(yù)心力衰竭的mi RNA機制,為慢性心衰的干預(yù)尋找突破口。方法:1、RIP免疫共沉淀與靶基因的篩選:在H9C2大鼠心肌細胞中過表達rno-mi R-10a-5p或rno-mi R-542-5p,通過RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP)技術(shù),用特異性Argonaute2(Ago2)蛋白抗體對過表達mi RNA的細胞中的RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RNA-induced silencing complex,RISC)進行免疫共沉淀,并提取其中富集的m RNA。通過基因芯片法檢測富集的m RNA的種類,然后進行聚...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 研究背景
    1.2 選題依據(jù)
    1.3 前期研究
    1.4 研究內(nèi)容與目的
    1.5 文獻綜述
        1.5.1 基本定義
        1.5.2 心力衰竭的現(xiàn)狀及有氧運動對心力衰竭有良性干預(yù)效果
        1.5.3 線粒體質(zhì)量控制在心衰進程中發(fā)揮重要作用
        1.5.4 有氧運動對線粒體質(zhì)量控制的影響
        1.5.5 miRNAs對心力衰竭的影響
        1.5.6 microRNAs：在促進和抑制心肌肥大中扮演著重要的角色
        1.5.7 microRNAs可雙向調(diào)節(jié)基因的表達
        1.5.8 miRNAs對線粒體質(zhì)量控制的影響
        1.5.9 心肌肥大
        1.5.10 與心臟發(fā)育相關(guān)的基因
2 實驗材料與研究方法
    2.1 實驗細胞及培養(yǎng)條件
    2.2 儀器及設(shè)備
    2.3 主要試劑
    2.4 主要試劑配制方法
    2.5 實驗研究方法
        2.5.1 質(zhì)粒提取
        2.5.2 細胞轉(zhuǎn)染
        2.5.3 RIP免疫共沉淀與靶基因的篩選
        2.5.4 引物的設(shè)計
        2.5.5 瓊脂糖凝膠電泳
        2.5.6 Trizol法提取總RNA
        2.5.7 SYBR?Green定量PCR
        2.5.8 蛋白質(zhì)樣品制備
        2.5.9 Bradford法測定蛋白質(zhì)濃度
        2.5.10 免疫印跡
        2.5.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
3 實驗結(jié)果
    3.1 轉(zhuǎn)染效率的檢測
    3.2 RIP免疫共沉淀富集情況
    3.3 基因芯片GO富集分析
    3.4 miR-10a-5p或miR-542-5p候選靶基因預(yù)測軟件計算情況
    3.5 引物序列設(shè)計及驗證
    3.6 部分預(yù)測靶基因在過表達microRNA細胞中的驗證
    3.7 部分預(yù)測靶基因在動物模型中的驗證
    3.8 早期心衰和有氧運動對線粒體功能及自噬凋亡相關(guān)蛋白的影響
4 分析與討論
    4.1 RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀
    4.2 microRNAs在心力衰竭中的調(diào)控作用
    4.3 microRNAs調(diào)節(jié)基因表達的方式
    4.4 心肌細胞的增殖
5 結(jié)論與建議
    5.1 結(jié)論
    5.2 建議與不足
參考文獻：
縮略詞索引（Abbreviated Index）
致謝
研究生個人簡歷



本文編號：3925352