乳酸脫氫酶C4(lactate dehydrogenase-C4,LDH-C4)為LDH蛋白家族中一個特殊的同工酶,僅在哺乳動物成熟的睪丸(testis)和精子(spermatozoa)中表達(dá),在精子的能量代謝中發(fā)揮重要作用,是精子運(yùn)動、獲能及受精等過程的一個關(guān)鍵酶,其功能或活性異常與男性不育有密切關(guān)系。本研究進(jìn)一步優(yōu)化了以2-羥基戊酸為LDH-C4底物檢測精子LDH-C4活性的染色方法,建立了該方法酶活性積分的正常參考范圍,繪制了ROC曲線,并初步得到該方法診斷的靈敏度為89.5%,特異性為91.2%。同時,開發(fā)了一種以2-羥基丁酸鈉為底物的LDH-C4活性顯色方法。在此基礎(chǔ)上,對一組精子LDH-C4活性降低的特發(fā)性不育患者進(jìn)行Ldhc基因突變檢測,并通過T克隆加以確證。結(jié)果顯示,一名患者編碼區(qū)第5外顯子的40位堿基產(chǎn)生T→G雜合突變,對應(yīng)Ldhc基因的第153位密碼子由TTA變?yōu)門GA,將其命名為L153X突變。為研究L153X突變引起男性不育的致病機(jī)制,本研究采用分子克隆技術(shù),構(gòu)建了野生型Ldhc的原核、真核重組載體,并利用人工誘導(dǎo)突變技術(shù)獲得了L153X突變體的重組質(zhì)粒,通過誘...

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 乳酸脫氫酶C4活性檢測方法的建立
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第二部分Ldhc基因突變的檢測及鑒定
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第三部分L153X突變體原核、真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第四部分L153X突變體的生物信息學(xué)分析及其亞基間相互作用的研究
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第五部分L153X基因突變患者精子功能評價
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
全文小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)
在校期間發(fā)表論文目錄



本文編號：4000288