目的建立結(jié)節(jié)性硬化癥TSC1/TSC2基因高通量測序技術(shù)以快速準(zhǔn)確檢測結(jié)節(jié)性硬化的TSC基因突變。方法對10例結(jié)節(jié)性硬化癥患者及10例正常對照進(jìn)行研究,利用長鏈PCR方法擴增TSC1及TSC2基因所有外顯子區(qū)域,運用Ion PGMTM平臺進(jìn)行二代測序并運用常規(guī)測序驗證。結(jié)果設(shè)計引物對TSC1及TSC2基因特異性擴增出7個長片段產(chǎn)物,產(chǎn)物長度介于13 kb¹5 kb間;運用二代測序技術(shù)快速鑒定出10個致病突變,其中,7個突變位于TSC2基因,3個突變位于TSC1基因;所有突變經(jīng)常規(guī)Sanger測序驗證,結(jié)果一致。結(jié)論高通量二代測序技術(shù)可快速可靠診斷結(jié)節(jié)性硬化癥TSC1、TSC2基因突變。 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2016,32(01)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1. 1 材料
    1. 2 方法
        1.2.1基因組DNA提取
        1.2.2長片段PCR擴增
        1.2.3文庫構(gòu)建
        1.2.4模板擴增及純化
        1.2.5測序反應(yīng)
        1.2.6數(shù)據(jù)分析
        1.2.7數(shù)據(jù)驗證
2 結(jié)果
    2. 1 長片段PCR產(chǎn)物
    2. 2 文庫質(zhì)量評價
    2. 3 測序結(jié)果及檢測結(jié)果的功能預(yù)測
    2. 4 Sanger測序驗證
3 討論



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